全 文 ：中革1s ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月·6 7-
不同产地三花龙胆地下器官龙胆苦苷的测定
马立祥，肖 玮，王 臣
(哈尔滨师范大学生物学系，黑龙江哈尔滨 150025)
产自东北的龙胆草药材商品俗称“关龙胆”，由
于产量大、质量佳，在国内外颇负盛名，具有传统的
市场优势。三花龙胆GentianatrifloraPall．是关龙
胆3种原植物之一，生于湿草甸、林间空地或灌丛
中。历史上，南于三花龙胆主要生于湿地及苔草草
甸，难以采挖，加之外观质量较差，野生资源没有受
到严重破坏。近年来，随着“关龙胆”供需矛盾的加剧
以及人们对野生药材的偏好，三花龙胆的采挖量快
速提高，而且已经成为野生“关龙胆”药材的主体。为
了保护和开发利用野生三花龙胆种质资源，笔者对
三花龙胆进行了系统的野生变家植研究。本实验采
用高效液相色谱法对不同产地的野生三花龙胆根及
根茎中龙胆苦苷进行测定，以探讨原生地条件与主
要药效成分量之间的关系，为引种栽培研究选择优
良种质提供依据。
1仪器、试剂与材料
1．1仪器：Waters1525高效液相色谱泵，Walers
2487紫外一可见光检测器，EmpowerPro工作站，
Nova—PakC，R柱(150iilm×3．9mm)，AnkeTDL一5
型离心机，SartoriuaBS210s电子天平，WaterCode
5CH型柱温箱。
1．2试剂：龙胆苦苷对照品购自中国药品生物制品
检定所。甲醇为色谱纯(美国迪马公司)，乙醇为分析
纯，水为超纯水。
1．3材料：在传统的药材采收期(花、果期)，采集不
同地区的三花龙胆(经哈尔滨师范大学生物系刘鸣远
教授鉴定)各10～15株，带回实验室内，将药材部分
(根及根茎)取下洗净泥土，吸净附水，分开每株的根
和根苹，合并同一采集地的根与根茎，置通风处阴T。
用研钵研唐备份样品，过40目筛，根粉备用，测试前
再用变色硅胶干燥一周。采集地点和时间见表1。
2方法与结果
2．1色谱条件：Nova—PakC。。色谱柱(150nlnl×
3，9ram)；流动相：甲醇水(25：75)，体积流量：1．0
mL／min；紫外检测波长270nm，理论塔板数按龙胆
苦苷峰计算不低于9000，柱温40(：。
2+2对照品溶液的制备：精密称取龙胆苦苷对照品
适量，加甲醇制成含6txg／mL的溶液，作为对照品
溶液。
2．3供试品溶液及阴性对照液的制备：精密称取三
花龙胆样品50．0mg，置50mI，量瓶中，加人70％
乙醇约45m1．，超声提取30～35rain，冷却至室温，
70％乙醇定容，混匀，取约5mI。放入离心管中，
2500r／min离心10rain。精密吸取上清液lmL，加
入到10ml，量瓶中，用流动相稀释并定容，混匀，经
0．45“m微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
用70％乙醇作阴性对照液。
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、
阴性对照液与供试品溶液各5pL，注入液相色谱
仪，测定，得到龙胆苦苷对照品溶液、阴性对照液与
供试品溶液的色谱图(图1)。
2．4标准曲线的制备：精密称取龙胆苦苷对照品
10．0mg置于25mL龟瓶中，以甲醇溶解并定容至
刻度，摇匀制成质量浓度为0．40mg／mI。的对照品
贮存液。精密吸取上述贮存液0．1、0．2、0．3、0．4、
0．5ml，加入到10，0mI。容量瓶中，用甲醇定容至
刻度，摇匀并进样。每一质量浓度平行进样3次，进
样量为5止。以峰面积为纵坐标，对照品质量浓度
为横坐标绘制标准曲线。回归方程为：Y=7．20×106
x 1．96×103，r：：=0．99967，表明龙胆苦苷在
0．004--0．020mg／ml。具有良好的线性关系。
2．5精密度试验：精密吸取2．3项下供试品溶液5
pL，重复进样6次，测定峰面积积分值，RSD为
0．96％。
2．6稳定性试验：精密吸取2．3项下供试品溶液5
f-L，分别于制备后0、2、4、6、8、10、12h进样进行测
定，结果供试品溶液中龙胆苦苷在12h内稳定，
RSD为4．1％(n一7)。
收稿日期：20050612
箨妻藩界；鸯孝舞骞篓妻写笃妻羹耄登奢器晏釜芰：蔷磊漭器量善；霉；象争煮善专萋孳霜碰；麓陈簦品范大学，同年留校任教，主要从
事药用植物生物学研究。Tel：(0451)88060625E—mail：M1，X88@sinaCOnl
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerhlDrugs第37卷第4期2006年4月
n ，、8
—JL
J 4 5 3 4 5 3 4 5
，／mln
a龙胆苫苷
a—Kentlopjcros】d。
图I 对照品(A)、阴性对照(B)和样品(c)HPLC图谱
Figl HPLCChromatogramsfreferencesubstance
(A)，negativecontrol(B)．andsample(C)
2．7重现性试验：精密称取三花龙胆根粉(6号样
品)50．0mg，共5份，按2．3项下方法制备成样品
溶液，测定龙胆苦苷质量分数，结果RSD为1．6％。
2．8加样回收率试验：精密称取已知量的三花龙胆
根粉(6号样品)样品6份，分别精密加入龙胆苦苷
对照品溶液，按2．3项下方法制备样品溶液并进行
测定。计算加样回收率，结果平均回收率为
98．19％，RSD为4．22％。
2．9样品测定：三花龙胆样品按2．3项下方法制备
样品溶液，结果见表1。
表1不同产地三花龙胆根茎殛根中龙胆苦
苷测定结果(n一6)
Table1 Determinationofgentjopicrosidein hizomes
androotsofG．triflorafromthree
differenthabitats(H一6)
3讨论
3．1不同产地三花龙胆药材中龙胆苦苷的量存在
一定差异，其中采自凤凰山山顶湿地的药材量最高。
观察发现，采自凤凰山山顶的三花龙胆植株年龄通
常都在10年以上，根茎上保留的不定根为1～7龄，
其他采集点的植株一般为3～6年。可见“高龄”三花
龙胆植株药材的龙胆苦苷量较高，量与年龄成正
相关。
3．2植物次生代谢产物的种类和分布通常表现出
明显的种属、器官、组织及生育时期的特异性。1]。本
实验5个不同采集地点的药材，均表现为根茎中龙
胆苦苷量明显高于根，说明根茎和根的器官异质性
影响龙胆苦苷的量。文献报道，地上茎与根茎属于同
源器官，而地上茎中龙胆苦苷量却很低，二者相差为
17．5倍01．根茎作为地上器官与不定摄的过渡结
构，其龙胆苦苷的量却明显偏高。
3．3自然条件下，三花龙胆生于草甸子、林缘或疏
林中。草甸子(湿地)主要特点是土壤水分充足，根际
温度较低，不利于根系的发育。采自黑龙江尚志市老
山镇林缘的药材龙胆苦苷量高于“踏头”湿地，并且
林缘植株的地下器官(包括根和根茎)发育也好于湿
地上的植株。可以认为，林缘的土壤条件较好而有利
于根系的发育和龙胆苦苷的积累。
3．4有报道指出，来自哈尔滨郊区的二年生三花龙
胆药材(未说明生产条件：栽培或野生)龙胆苦苷量
随采集时间不同而变化，波动幅度在9．45％～
16．30％；另有报道指出(亦是来自哈尔滨郊区，未说
明生产条件)，随采收期不同龙胆苦苷量在9，45％～
17．34％“]。龙胆苦苷作为一种次生代谢产物，量如
此之高其意义何在呢?同时，野生药材的测定结果也
与前述报道的相去甚远，可见环境差异和采收期不
同可以显著影响龙胆苦苷的积累，但量的差异如此
悬殊值得进一步研究。
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万方数据
不同产地三花龙胆地下器官龙胆苦苷的测定
作者： 马立祥， 肖玮， 王臣
作者单位： 哈尔滨师范大学,生物学系,黑龙江,哈尔滨,150025
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(4)
被引用次数： 2次
参考文献(4条)
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引证文献(2条)
1.曹悦.左代英.刘敬武.孙启时 GAP生产基地龙胆的质量控制及评价[期刊论文]-中草药 2010(5)
2.曹悦.左代英.孟庆龙.刘敬武.孙启时 不同采收期和加工方法对龙胆药材含量的影响[期刊论文]-中国药事
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200604049.aspx