全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1859·
伤的主要成分，在病理状态下，TNF—a可导致血管
内皮细胞、血管平滑肌的损伤。TNF—a在许多疾病
如缺血再灌注、炎症、动脉粥样硬化、脑卒中、神经退
行性病变如阿尔茨海默病、帕金森病的发生发展过
程中起着重要的作用。本研究发现用TNF—a刺激体
外培养的HUVEC诱导其凋亡后，光镜下可见细胞
由梭形变为圆形，继而脱离瓶壁悬浮于培养液中，细
胞核呈固缩、碎裂状，贴壁细胞减少；荧光显微镜可
见凋亡小体形成。而预先使用姜黄素组HUVEC细
胞形态则未见明显改变，凋亡小体明显减少。提示姜
黄素对TNF—oc诱导的内皮细胞凋亡具有保护作用。
在细胞凋亡的信号传递过程中半胱氨酸蛋白酶
(caspase)家族在整个细胞凋亡过程中起中心杀手
作用。在正常的状态下，它们以无活性的酶原形式存
在，凋亡信号刺激其特异性天冬氨酸残基处被剪切
后激活。上游的caspase就能次序地激活其他下游
的caspase，形成caspase级联反应，将凋亡信号传
至凋亡底物，由此引发瀑布式连锁反应，进而激活
caspase一3等，后者成为凋亡信号的最终执行者。本
实验结果显示TNF—a刺激HUVEC细胞凋亡后
caspase一3表达与对照组相比明显增强，而经姜黄素
预处理的HUVECcaspase一3表达明显下降。提示
姜黄素是通过抑制caspase一3的表达而减少细胞凋
亡的，其对HUVEC的保护作用可能与其对凋亡信
号的最终执行者caspase一3的抑制作用有关。
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文冠果果壳乙醇提取物对大鼠学习记忆障碍的改善作用
刘新霞1”，纪雪飞1，陆玲玲1，杨柏珍3，王力华3，邹莉波p
(1．沈阳药科大学生命科学与生物制药学院，辽宁沈阳110016；2．河北大学医学部，河北保定071000；
3．中国科学院沈阳应用生态研究所，辽宁沈阳110016)
摘 要：目的 研究文冠果果壳乙醇提取物(EEHXs)对双侧颈总动脉结扎大鼠学习记忆障碍的改善作用及其作
用机制。方法用DigBehv动物行为分析系统分析大鼠的自发活动，Y迷宫法及Morris水迷宫法测试大鼠的学习
记忆能力，比色法检测大脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、乙酰胆碱酯酶(AchE)的水平，
尼氏染色观察海马组织形态学改变。结果模型组大鼠自发交替反应正确率、空间记忆能力和工作记忆能力显著
降低，SOD活性显著下降，MDA和AchE水平显著升高，海马神经元变性、脱落；EEHxS显著改善大鼠的学习记
忆能力、提高s0D活性、降低MDA和AchE水平，显著抑制海马神经元的变性及脱落。结论EEHXS对双侧颈
收稿日期：2007—04—07
作者简介：刘新霞(1976一)，女，在读硕士，研究方向为神经、精神药理学及中药药理学。
*通讯作者邹莉波Tel：(024)23986260E—mail：libozou@163．com
万方数据
·1860· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
总动脉结扎大鼠的学习障碍有显著的改善作用，其作用机制可能与改善胆碱能神经功能及降低自由基水平有关。
关键词：文冠果；果壳；学习记忆功能障碍
中图分类号：R286．10 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)12—1859—05
ImprovementofethanolextractfromhuskofXanthocerassorbifolia
onratswithlearninga dmemorydysfunction
LIUXin—xial一，JIXue—feil，LULing—lin91，YANGBai—zhen3，WANGLi—hua3，ZOULi-b01
(1．SchoolofLifeScienceandBiopharmacy，ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang110016，China；
2．MedicalDepartmentofHebeiUniversity，Baoding071000，China；3．ShenyangInstitute
ofAppliedEcology，ChineseAcademyofSciences，Shenyang110016，China)
Keywords：XanthocerassorbifoliaBunge；husk；learningandmemorydysfunction
随着社会人口的老龄化，老年性痴呆的发病率
逐年上升，老年性痴呆的核心症状是记忆力、认知力
等方面的障碍，不仅影响病人的生活质量，而且给家
庭和社会带来沉重的负担。因其发病机制尚未完全
阐明，临床尚缺乏理想的防治药物。文冠果
XanthocerassorbifoliaBunge系无患子科文冠果属
的木本油料植物，一属一种，为我国特有，种植面积
广[1]。文冠果具有改善小鼠学习记忆障碍的作
用[2’3]。文冠果种仁与果壳产量比为18：8～10：9，
果壳产量很大，因尚未被研究利用，基本上属废弃
物。本实验研究了文冠果果壳乙醇提取物(ethanol
extractof huskfromXanthocerasso bifolia，
EEHXS)对大鼠学习记忆障碍的影响，并初步探讨
其作用机制。
1材料
1．1 动物：Wistar大鼠，雌性，14月龄，480～520
g，由沈阳药科大学动物中心提供，合格证号：SCXK
(辽)2003—008。
1．2药品与试剂：文冠果果壳乙醇提取物(EE—
HXS，文冠果壳苷质量分数>70％)，中国科学院沈
阳应用生态研究所提供；戊巴比妥钠，国药集团化学
试剂有限公司；CresylVioletacetate，Sigma；超氧
化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乙酰胆碱酯酶
(AchE)试剂盒，均购于南京建成生物技术研究所。
1。3仪器：Morris水迷宫为自动视频数据采集分
析系统，上海吉量软件科技有限公司；自发活动装
置，上海吉量软件科技有限公司；大鼠Y迷路为自
制；CryotomeEAs620冷冻切片机，英国SHAN
DON公司；XDS一1A倒置生物显微镜，重庆光电
仪器总公司；DY89～Ⅱ电动玻璃匀浆机，宁波新芝
生物科技有限公司；SFZl50601215872 可见分光
光度计，上海精密科学仪器有限公司；J2一HS
Centrifuge低温超速离心机，美国Beckman。
2方法
2．1 动物模型的建立、分组及给药：取Wistar大鼠
90只，随机分为5组，+假手术组，模型组，EEHXS
125．7、62．9、31．4mg／kg组。按文献方法[41制备大
鼠双侧颈总动脉结扎大脑永久低灌注模型，手术后
第3天开始ig给药，假手术组、模型组ig蒸馏水，
每天1次，连续10d，10d后进行行为学测试。
2．2 自发活动测试：末次给药1h后，将大鼠放入
自发活动装置中，摄像机拍摄20min内的活动过程
并输入计算机，DigBehv动物行为分析系统自动记
录并分析大鼠的总路程、平均速率、活动次数、活动
时间。
2．3 Y迷宫法Is]：实验装置由3个夹角为120。的
木制支臂组成，分别称为A、B、C臂。实验时将大鼠
放入A臂中，让其自由出入3个臂，记录8min内
每只大鼠进入3个臂的总次数(Ⅳ)及顺序。以连续
进入3个不同的臂为一个正确选择，记录正确选
择次数(以)，计算正确反应率[正确反应率=n／
(Ⅳ一2)×100％]
2．4 Morris水迷宫法[5]：实验装置主要由一只圆
形有机玻璃水池和一个可移动位置的透明有机玻璃
安全台组成。圆池的直径为140cm，高为44cm，安
全台高为25cm，顶端为圆形，直径为10cm。水池
分成均等的4个象限。按实验要求，可任意地将安全
台设置于某一象限的中间。具体分为以下几个试验。
2．4．1定向游泳试验：安全台固定在4个象限中的
任意一个位置不变。将大鼠头朝池壁轻轻地放入水
中，让动物寻找安全台，大鼠爬上安全台后使其停留
15S，然后放入笼中。每天2次，共训练5d，摄像机
拍摄实验全过程，记录动物游泳轨迹，并输入计算
机，经软件分析计算动物总游泳时间和总轨迹长度。
动物总游泳时间为逃避潜伏期，总轨迹长度为游泳
路程。
万方数据
中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1861·
2．4．2空间探索试验：在定向游泳实验结束后，立
即将安全台撤掉，随机选取一个入水点放人大鼠，记
录并分析计算大鼠在原安全台所在象限中的游泳时
间、路程及安全台穿越次数。
2．4．3工作记忆测试：安全台1天换1个位置，大
鼠爬上安全台后使其停留15S，接着训练第2次。每
只大鼠每天训练5次，连续3d。记录大鼠到达安全
台的时间(逃避潜伏期)，此结果作为“工作记忆”的
指标。
2．5 SOD活性和MDA、AchE水平的测定：工作
记忆测试结束后，断头取大脑，用预冷生理盐水冲洗
表面血液，滤纸擦干，以质量体积比1：9加入4℃
生理盐水，制成10％匀浆，3000r／rain低温离心
15min，取上清液，按试剂盒说明，用722分光光度
计测定大脑组织SOD活性和MDA、AchE水平。
2．6脑组织切片制备及尼氏染色法：大鼠在工作记
忆测试结束后，用1％戊巴比妥钠(40mg／kg)ip
麻醉，仰位固定在手术台上，开胸暴露心脏，将灌流
穿刺针从心尖部位插入左心室，同时右心耳剪一小
心耳流出的液体变得无色澄清时，换用300～400
mL4℃4％多聚甲醛灌流直至躯体僵硬。断头取
脑，4℃4％多聚甲醛中固定24h后，置30％蔗糖
溶液中脱水直至标本下沉。用冷冻切片机在
Bregma线一3．14～一3．8mm处做连续冠状切片，
片厚20肛m。贴片后自然晾干，蒸馏水漂洗，37℃烘
干，1％焦油紫溶液中染色30rain，70％、80％、
90％、100％乙醇梯度脱水，二甲苯透明2次，每次
10rain，中性树脂封片。显微镜下观察海马形态学改
变，拍照。
2．7统计方法：实验数据用X土s表示，Morris水
迷宫1～5d定向游泳试验中逃避潜伏期进行two—
wayANOVA检验，应用Bonferroni／Dunn检验对
每次训练的组间差异进行one—wayANOVA检验。
3 结果
3．1 对学习记忆障碍大鼠自发活动的影响：见表1，
与假手术组比较，模型组大鼠的活动总路程、平均速
率、活动次数、活动时问无显著差异；与模型组比较，
EEHXS62．9mg／kg组大鼠的活动总路程、平均速
口，先用约200～300mL4℃生理盐水灌流，待右 率、活动次数、活动时间均显著增加(尸
Table1 EffectofEEHXSonspontaneouslocomotoractivitiesinratswithlearninga dmemorydysfunction(工士s，露=10)
与模型组比较；’P
确率的影响：模型组大鼠自发交替反应正确率显著
降低(P<0．05)，EEHXS125．7mg／kg显著提高
大鼠自发交替反应正确率(P
发交替反应正确率(z士S，砣一10)分别为
(83．78土20．67)％、(53．51士15．49)％、(75．80±
13．07)％、(70．28士19．97)％、(57．08±20．33)％。
3．3对学习记忆障碍大鼠定向游泳试验逃避潜伏
期的影响：与假手术组比较，第4、6、7、8次训练，模
型组大鼠逃避潜伏期均显著延长；与模型组比较，第
4、6、7、8次训练，EEHXS均显著缩短学习记忆障碍
大鼠的逃避潜伏期，见图1。定向游泳试验中，各组
游泳路程无显著差异。
3．4对学习记忆障碍大鼠空间探索试验的影响：与
90
蒜60
$
瘿
捌30
蝈
0
训练次数
1一假手术组2一模型组3～5-EEHXS125．7、
62．9、31．4mg／kg组与假手术组比较：4P
62．9．31．4mg／kggroup4P<0．05wShamgroup
。P<0．05口smodelgroup
图1 EEHXS对学习记忆障碍大鼠定向游泳试验逃避
潜伏期的影响。士s，一一10)
Fig．1EffectofEEHXSonescapelatencyinratswith
learninga dmemorydysfunctionind rectional
swimmingtest(x士s，万一10)
万方数据
·1862· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
假手术组比较，模型组大鼠在原安全台所在象限及
安全台周围10cm范围的游泳时间和游泳距离均
显著缩短，安全台穿越次数显著减少；与模型组比
较，EEHXS显著延长大鼠在原安全台所在象限及
安全台周围10cm范围的游泳时间和游泳距离，增
加安全台穿越次数，见图2～4。
800
基600
警400
蠹
热200
O
口在原安全台所在象限
假手术组模型组 EEHXS组
围
125．7 62．9 31．4mg／kg
与假手术组比较：4P<0．05与模型组比较；。PGO．05
4PG0．05vsShamgroup’PG0．05usmodelgroup
图2 EEHXS对学习记忆障碍大鼠空间探索试验游泳
距离的影响(善土s，开=10)
Fig．2EffectofEEHXSonswimmingd stanceinrats
withlearninga dmemorydysfunctioninpr be
test(；士s。n一10)
50
∞40
墨30
莹20
热
10
O
假手术组模型组 EEHXS组
125，7 62，9 31．4mg／kg
与假手术组比较：4PGO．0544PGO．01
与模型组比较：。P<0．05
。PG0．0544PG0。0173$Shamgroup
。PG0．05usmodelgroup
图3 EEHXS对学习记忆障碍大鼠空间探索试验游泳
时间的影响(；士s，n---10)
Fig．3EffectofEEHXSonswimmingtimeinrats
withlearninga dmemorydysfunction
inprobet st(xis，一一10)
3．5对学习记忆障碍大鼠工作记忆的影响：第1、2
天，模型组大鼠逃避潜伏期显著延长，EEHXS显著
缩短大鼠的逃避潜伏期，见图5。
3．6 对学习记忆障碍大鼠脑组织SOD活性和
MDA、AchE水平的影响：与假手术组比较，模型组
大鼠脑组织SOD活性显著下降，MDA、AchE水平
均显著升高；EEHXS显著升高学习记忆障碍大鼠
脑组织SOD活性，降低MDA、AchE水平，见表2。
3．7对学习记忆障碍大鼠海马组织的影响：模型组
6
巅
薹。
酞
嚣z
讯O
125．7 629 31．4mg／kg
与假手术组比较：4PG0．05
与模型组比较：。PGO．05⋯PG0．001
。PG0．05v Shamgroup
。PG0．05’’’PG0．0017JSmodelgroup
圈4 EEHXS对学习记忆障碍大鼠空间探索试验安全台
穿越次数的影响。土j，n-----10)
Fig．4EffectofEEHxson。numberofacrossplatform
inratswithlearninga dmemorydysfunction
inprobet st(工土s，n=10)
120
芝90
躁
g60
瓣
捌30
斛
O
假手术组模型组 EEH圣墨—缉
125．7 62．9 31．4mg／kg
与假手术组比较：4PG0．05
与模型组比较：。P<0．05一PG0．01
4PG0．05口sShamgroup
’PG0．05‘‘PG0．01USmodelgroup
圈5 EEHXS对学习记忆障碍大鼠工作记忆测试中
逃避潜伏期的影响Q士s，腭一10)
Fig．5EffectofEEHXSonescapelatencyinrats
withlearninga dmemorydysfunctionin
workingmemorytest(，士s，矗=10)
寝2 EEHXS对学习记忆障碍大鼠脑组织SOD活性
和MDA、AchE水平的影响o±j，n一10)
Table2 EffectofEEHXSonactivityofSODand
levelsofMDAandAchEinbraintissue
ofratswithlearninga dmemory
dysfunction
与模型组比较：’P<0．05一PG0．01
4PG0．0544P
天天
¨●■■恹獗¨吖J
第第』
一
口■
一
¨●-。HJ』。●●■
¨上
一。●_一■■
#r●，L
一出
万方数据
中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1863·
海马CA3区神经细胞变性坏死，表现为轴突消失、
胞浆深染、空泡样变，核固缩、胞膜核膜界限不清。
EEHXS各剂量组不同程度改善了CA3区神经细
胞病理改变。
4讨论
随着老龄人口的日益增多，老年性痴呆等老年
性记忆功能障碍的发病率逐年增加，患者主要表现
为近期和远期记忆、认知、语言、行为障碍和人格改
变等临床综合征。从其原因和病理学分析，临床常见
4种类型：阿尔茨海默病(Alzheimerdisease，AD)；
血管性痴呆(vasculardementia，VD)；同时具有
AD和VD特征的混合性痴呆；其他原因引起的痴
呆，如帕金森病、脑外伤等口]。AD和VD是临床上
最常见的老年性痴呆，近年研究表明，这两种痴呆的
发病均与脑缺血有关[7]。永久性结扎大鼠的双侧颈
总动脉，造成一种慢性脑低灌注状态，从而使脑组织
产生缺血缺氧性损害，尤其是一些易损区域(如海
马、大脑皮质等)，是一种稳定、可靠的学习记忆障碍
模型[8]。脑缺血后的损伤与以下因素有关：兴奋性氨
基酸增多；氧自由基的损伤；细胞内Ca2+超负荷；乳
酸中毒及花生四烯酸代谢活性升高。这些因素彼此
交叉共同导致脑缺血后的脑实质损伤[9]。
脑缺血时引起细胞Ca2+超载，并产生大量氧自
由基，最终导致细胞死亡[10。。EEHXS能显著改善脑
缺血大鼠的学习记忆障碍，降低大鼠脑组织中
MDA的量，提高SOD活性，提示其可能通过提高
自由基清除能力对缺血脑组织产生保护作用。
AD患者及模型动物，其大脑皮层和海马区胆
碱能神经元大量丢失，乙酰胆碱(Ach)、胆碱乙酰
基转移酶(ChAT)的量显著降低，而水解Ach的
AchE的量却比同龄对照组高[1¨。Shohami[12]报道
颅脑损伤后大脑皮质和海马CA3区的神经元丢失
伴有AchE的积累。本实验结果与文献报道一致，
EEHXC显著降低大鼠脑组织中AchE活性，抑制
海马CA3区神经元的丢失和变性等，提示EEHXS
改善学习记忆障碍可能与改善中枢胆碱能神经系统
功能障碍有关，其确切机制有待进一步研究。
自发活动结果显示，只有EEHXS中剂量组自
发活动增加，有显著性差异，但无剂量相关性；其他
各组之间均无显著差异，提示双侧颈总动脉结扎没
有造成大鼠运动功能障碍、EEHXS改善学习记忆
障碍的作用并非提高大脑皮层兴奋性的非特异性因
素所致。
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文冠果果壳乙醇提取物对大鼠学习记忆障碍的改善作用
作者： 刘新霞， 纪雪飞， 陆玲玲， 杨柏珍， 王力华， 邹莉波， LIU Xin-xia， JI Xue-fei
， LU Ling-ling， YANG Bai-zhen， WANG Li-hua， ZOU Li-bo
作者单位： 刘新霞,LIU Xin-xia(沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,辽宁,沈阳,110016;河北大学
医学部,河北,保定,071000)， 纪雪飞,陆玲玲,邹莉波,JI Xue-fei,LU Ling-ling,ZOU Li-
bo(沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,辽宁,沈阳,110016)， 杨柏珍,王力华,YANG
Bai-zhen,WANG Li-hua(中国科学院沈阳应用生态研究所,辽宁,沈阳,110016)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
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本文读者也读过(10条)
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2. 刘新霞.杨新爱.屈婵.吴喆.杨柏珍.王力华.邹莉波.LIU Xinxia.YANG Xinai.QU Chan.WU Zhe.YANG Baizhen.
WANG Lihua.ZOU Libo 文冠果果壳提取物对学习记忆障碍的改善作用[期刊论文]-中药新药与临床药理2007,18(1)
3. 杨小娟.高晓黎 文冠果化学成分及药理作用研究进展[期刊论文]-西北药学杂志2004,19(5)
4. 李在留.罗兵.程凡.李凤兰.邹坤.LI Zai-liu.LUO Bing.CHENG Fan.LI Feng-lan.ZOU Kun 文冠果种皮的化学成
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5. 董桂杰.邵海市.陈芳.付玉臣.冯继承 文冠果的化学成分研究进展[期刊论文]-黑龙江医药2009,22(6)
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7. 李占林.李铣.李宁.李文.沙沂.LI Zhan-lin.LI Xian.LI Ning.LI Wen.SHA Yi 文冠果果壳的化学成分[期刊论
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8. 赵志斌.陈莺.江山.苗蓓.曾因明 老年小鼠突触可塑性和记忆功能变化与nNOS表达的关系[期刊论文]-中国老年
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9. 李占林.李铣.张鹏 文冠果化学成分及药理作用研究进展[期刊论文]-沈阳药科大学学报2004,21(6)
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引证文献(9条)
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2.赵燕燕.陈春生.刘新霞.田芳露.崔彦龙.仇鹏 运动训练对亚硝酸钠致记忆障碍模型小鼠学习记忆能力的影响[期
刊论文]-中国康复医学杂志 2009(2)
3.刘新霞.赵燕燕.陈春生.田芳露.崔彦龙.仇鹏 不同运动量对小鼠微循环及耐缺氧能力的影响[期刊论文]-中国康
复医学杂志 2008(9)
4.刘新霞.赵燕燕.刘倩梅.高凤国.陈春生.边静.张秋燕.周艳春.刘丽艳 不同运动量对老年痴呆的防治作用及其机
制研究[期刊论文]-中国中医药现代远程教育 2011(17)
5.赵燕燕.刘新霞.陈春生.田芳露.崔彦龙.仇鹏 运动训练对老年痴呆小鼠的改善作用[期刊论文]-中国老年学杂志
2010(7)
6.尚宏芹 文冠果提取物药理作用研究进展[期刊论文]-动物医学进展 2010(6)
7.张洪梅.周泉城 文冠果壳开发利用研究进展[期刊论文]-中国粮油学报 2012(11)
8.王颖.姜生.孟大利.李宁 文冠果的化学成分与生物活性研究进展[期刊论文]-现代药物与临床 2011(4)
9.戚建华.姚增玉 生物柴油原料树种文冠果的化学成分与综合利用研究进展[期刊论文]-林产化学与工业 2012(2)
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