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RAPD技术在中药材鉴定中的应用进展
朱永宏，李学敏，韩宝玲
(天津天士力集团有眼公司，天津300402)
随机扩增多态性DNA(randomamplifiedpolymorphic
DNA，RAPD)技术是1990年由Williams等发展起来的一
项DNA分子标记技术。RAPD技术是建立在PCR技术的基
础上．用一系列(通常数百个)不嗣的随机排列碱基序列的寡
核苷酸单链(一般为10bp)作为引物，对所研究的基因组
DNA进行单引物扩增。模板DNA经90～94变性解链后在
较低温度(36～37℃)下遇火，这时形成的单链模板会有许
多位点与引物互补配对，在72℃下．通过链延伸，形成双链
结构，完成DNA合成。重复上述过程，即可产生片段大小不
等的扩增产物，通过电泳分离和显色便可得到许多不同的条
带，从中筛选出特征性条带。扩增产物片段的多态性反映了
基因组DNA的多态性。如果基因组在这些区域内发生DNA
片段插人、缺失或碱基突变就可能导致这些特定结合位点的
分布发生相应的变化，而使PCR产物增加、缺少或发生相对
分子质量的改变。因此，通过对PCR产物的检测即可铡出基
因组DNA在这些区域的多态性。进行RAPD分析时，可用
引物的数量很大，虽然对每个引物而言t其检测基因组DNA
多态性韵区域是有限的，但是利用一系列引物尉可以使检测
区域几乎覆盖整个基因组。因此，RAPD可以对整个基周组
DNA进行多态性检测。
目前RAPD技术已经广泛地应用医学、农业，林业、畜
牧水产业等多个领域。根据现代分子生物学的研究，中药材
(除矿物药外)所依赣的生物资源。物种”的多样性是由于其
基因多态性的结果，而基因多态性可在DNA分子诊断技术
水平上捡翻，这比在形态，组织和化学水平上检铡更能代表
其变异类型的遗传标记。这是RAPD技术应用于中药材鉴
定的基础，在这一方面，学者也开展了大量的研究工作，并取
得了很大的成绩。
1药材道地性研究
中药十分讲究道地性，道地药材是传统公认来源于特定
产区的名优正品药材。然而，遭地药材的形态、性状与其他药
材无明显区别，故采用传统方法鉴别困难，具有很大的主观
性。另外，中药道地产区变迁也十分普遍，产生变迁的原因除
对优质药材的进一步认识和有目的的选择外+还有政治、文
化和市场等诸多原因。因而，仅仅根据地域来确定道地药材
也是不可取的。
道地药材从生物学内涵讲是居群，其一个重要特征是遗
传特征，应看成是一个具有共同基因库的由交配和亲缘关系
联系起来的葡一物种的个体群，因此DNA分子标记技术可
以用于道地药材的鉴别和道地性的研究。
Nakai等n]用RAPD技术对淫羊藿属8种植物进行了
DNA分析，结果发现中国特有种箭叶淫羊藿和日本其他7
种淫羊藿属内变异较大，与形态学不符。此后，应用RAPD
技术对药材道地性的研究逐渐增多。王培训等[21对不同产地
的酉洋参采用RAPD技术进行研究，结果表明，各地产酌西
洋参DNA指纹图谱基本一致；胡珊梅婷01运用RAPD技术
研究了金钱莲同种不同产地的遗传变异性；胡珊梅等附对福
建、江西，四川产的泽泻进行RAPD研究．结果发现同种异
地药材所形成的不同居群具有不同的遗传特性}高文远等对
来自不同产地的当归进行分析，结果表明样品地理分布距离
越小．遗传差异越小．反之亦然。顾华荨“1采用RAPD方法
研究了来自山西黎城、长治、平顺、壶关、屯冒及安弹6个地
区11个连翘地方栽培晶系的亲缘关系，并用HPuc方法测
定连翘主要指标成分——连翘昔量的变异情况．结果表明．
箨誓盈嚣：絮：乏轰i嘉5一)，男．捌主任药师，主要从事新药研发臂理和中药国际化研究。 T。l。(022)z67365‘o豇砌n；：巾@协。Iy
com
万方数据
·附8· 中草蒋Chine蚰TraditionalandHerbQlDrugs第3s卷第9期2007年9月
连翘栽培的地方品系问存在骧显的DNA水平上的多样性
变异．并且这种DNA分子多样性差异与化学指标成分量的
差异具有相关性．说明连翘的遗传基础可能对化学指标成分
的形成和积累有显著的影响。李颖等口1对产于广东石牌、高
要、湛江和海南省的广藿香进行了研究，RAPD图谱展示了
这几个产地的广藿香之间的基困组发生了细微的变异，可以
凭RAPD图谱鉴定广藿香的道地性。徐吉银等”1对来自不
同居群(春湾、蟠龙和云南)的阳春砂仁样品进行RAPD分
析，结果得出3个居群阳春砂的聚合树状图，表明春湾和蟠
龙两个居群的亲缘关系较近，云南居群与春湾、蟠龙两居群
的亲缘关系较远。
2药材真伪的鉴定
中药的传统鉴定是利用植物或动物形态分类学和解剖
学特征．从基愿、性状、显微特征，理化等方面进行药材鉴别。
大部分经药材加工、炮制等处理后，往往失去了原来的形态
和解剖特征，甚至显微特征也会发生改变。从而使药材的真
伪优劣难以鉴别。我国中药材品种来源复杂．互混、互代现象
时有发生，特别是对一些故意造假、以次充好的药材更是难
以鉴别。因此假劣药材，混淆品克斥中药材市场的状况一直
未能得到根本改善。
采用RAPD指纹分析技术既可以鉴定一般经典方法能
鉴定的药材，又可以克服经典方法的局限性。Shao等”3率先
将RAPD技术应用于中药材的鉴别，鉴定出人参属的3个
种及4个伪种，效果很好．证明RAPD是一种有效的中药鉴
别方法。此后。更多的研究者将该技术应用于药材鉴定。如对
冬虫夏草及其伪品的鉴定‘”]。人参与假人参的鉴定tit3，对射
干及混淆品共5种原植物的鉴别[1”等，都取得了比较理想
的结果。
3药材基原研究
中药的基原鉴定是中药研究的基础和关键。一些中药，
其基原往往有数种甚至敷十种。如目前用的贯众、独活、厚朴
等中药，就来源于20多种不同种属植物；大青叶各地用的药
材有所不同，有蓼科蓼蓝、十字花科菘蓝、爵床科马蓝、马鞭
草科大青等，药用部分也有用叶及带叶茎枝的不同，而且。同
名异物的现象也很普遍。药材基原品种不同，主要化学成分
或有效成分差异很大，少则数倍，多则几十倍。
Yumazaki等EIS]对4种菊科甘草属植物光果甘草、甘草、
剌毛甘草和刺果甘草进行了RAPD分析，其DNA指纹图谱
表明，光果甘草与甘草遗传非常接近．刺毛甘草和刺果甘草
的遗传关系相距较远，这与植物分类学研究相吻合。对4种
商品甘草药材(新疆甘草、西北甘草、西伯利亚甘草、阿富汗
甘草)采用RAPD方法做遗传距离估算，来对其进行基原鉴
别，逐步证实了阿富汗甘草来源于光果甘草，西伯利亚甘草
来源于甘草，新疆甘草和西北甘草来源于刺果甘草[1“；曹晖
等m3对菊科植物地胆草、白花地胆草和假地艟草以及4种
苦地胆商品药材进行了RAPD研究，获得清晰可靠的DNA
指纹图谱，根据DNA带型差异鉴别出地胆草及其混淆品。
同时通过对DNA指纹图谱的相似度指数值计算，证实4种
苦地胆商品药材的基原为菊科植物地胆草。
4结语
中药材鉴定是一项艰巨的任务。常用的中药材一般是干
品，新鲜材料比较少，有的药材是经过多道工序加工处理，其
内部的遗传物质DNA存在一定程度的损伤，丧失了完整
性。即使新鲜材料也因自身含次生代谢产物，如生物碱、酚类
等物质，获得的基因组DNA质量较差t很难适合其他DNA
分子标记。RAPD技术应用于中药材的鉴定，具有效率高、灵
敏度高、样品用量少、简便易行等优点。然而tRAPD应用于
中药材鉴定时．结果必须具有稳定性与可靠性，才能使不同
实验室的结果具有可比性，实现中药材鉴定标准化。因此，要
使RAPD在中药材鉴别中的结果具有重复性和可靠性，就
应使RAPD技术标准化。相信随着RAPD规范化的不断提
高，RAPD在中药材鉴别中应用会更加广泛。
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万方数据
RAPD技术在中药材鉴定中的应用进展
作者： 朱永宏， 李学敏， 韩宝玲
作者单位： 天津天士力集团有限公司,天津,300402
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(9)
被引用次数： 4次

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引证文献(5条)
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范学院学报（自然科学版） 2010(4)
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