全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·591·
林蛙油的指纹图谱
李津明1，许婷2，贾绍华2
(1．东北林业大学，黑龙江哈尔滨150076；2．哈尔滨商业大学药学院，黑龙江哈尔滨150076)
摘 要：目的建立一种稳定、可靠的鉴别和控制林蛙油质最的方法。方法利用高效液相色谱法，测定10批林蛙
油药材建立指纹图谱。色谱条件：DimonsilC。。分析柱(250mm×4．6mm，5肛m)，柱温：25℃，流动相：乙腈一水(50：
50)，分析时间60min。结果测10份不同林蛙油商品完整药材的丙酮提取物的HPLC图谱。结论在本色谱条
件下，可以检出17个相应位置稳定的共有峰，可作为确定鉴定林蛙油的指标峰。
关键词：指纹图谱；高效液相色谱法；林蛙油
中图分类号：R282．710文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)04—0591一05
FingerprintofOviductasRanae
LIJin—min91，XUTin92，JIAShao—hua2
(1．NortheastForestUniversity，Harbin150076，China；2．SchoolofPharmaceuticalScience，
HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：0bjectiveTosetupastableandreliablemethodusedtoidentifyandcontrolthequalityof
OviductasRanae．MethodsUsingHPLCmethodtomeasuretenbatchesofOviductasRanaesamplesin
ordertoestablishthefingerprint．Chromatographiccondition：DimonsilC18 lumn(250mm×4．6mm，
5肚m)，thet mperatureofcolumnis25℃，mobilephase：acetonitrile-H20(50：50)，analyticaltime
60min．ResultsTheHPLCfingerprintsofacetoneextractsweredetectedfromtendifferentOviductas
Ranaem dicinalmaterials．ConclusionUnderthechromatographiccondition，17commonpeaksofcorre—
latedpositionc uldbedetectedanusedtodefinitethindexpeakofOviductasRanae．
Keywords：fingerprint；HPLC；OviductasRanae
林蛙油是两栖纲无尾目蛙科蛙属动物中国林蛙
RanatemporariachensinesisDavid雌蛙的干燥输卵
管[1]，是传统的名贵中药，具有健脾胃、滋阴补肾、润
肺生津之功效[2’3]，对体虚气弱、气血亏损、精力耗
损、记忆力不佳、神经性头痛、神经衰弱均有疗效。林
蛙油的活性成分分为两部分[4’5]：水溶性成分(蛋白
质和氨基酸)和脂溶性成分(脂肪、维生素A、胆固
醇、甾体激素类等)。其能够增加机体的免疫能力，且
有镇咳祛痰作用[6’7]。目前，林蛙属于国家保护动物，
严禁滥捕乱杀，而林蛙油市场需求量不断增加，市场
上林蛙油的价格居高不下，因此出现许多伪品，如中
华大蟾蜍的输卵管、青蛙油等，为此建立一个完整的
质量标准体系是十分必要的。本实验选用不同产地
及不同药店的10种林蛙油完整商品药材，通过
HPLC指纹图谱建立起评价林蛙油质量的方法。
1仪器与试药
Water一515高效液相色谱仪(包括515一HPLC
收稿日期：2004—08—12
泵、Wates双波长紫外检测器、Millog工作站)。甲
醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯、去离子水。参
照物：酪氨酸(中国药品生物制品鉴定所，872—
200205)；lO批林蛙油，来源于不同产地，分别为：黑
龙江省伊春金山林蛙养殖场(1号)、黑龙江省宾具
林蛙养殖场(2号)、黑龙江省中药联营公司(3号)、
黑龙江省药材联营公司(4号)、黑龙江省绥滨林蛙
养殖场(5号)、哈尔滨市世一堂药店(6号)、吉林省
桦甸林蛙养殖场(7号)、吉林省江石林蛙养殖场(8
号)、吉林省二道白河林蛙养殖场(9号)、吉林省百
姓大药房(10号)。经哈尔滨滨商业大学药学院中药
鉴定教研室鉴定均为正品。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱DimonsilC。。分析柱(250
mm×4．6mm，5弘m)；流动相：乙腈一水(50：50)；体
积流量：0．5mL／min；检测波长：280nm；柱温：室温
25℃。
万方数据
·592· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
2．2供试品溶液：取林蛙油粉末1g，用索氏提取器
丙酮提取6h后，减压蒸干丙酮，残留物用色谱甲醇
定容到10mL量瓶中，密封，置冰箱中备用。
2．3精密度试验：取2号林蛙油药材粉末按2．1项
下方法制备供试品，精密取20弘L重复连续进样5
次，检测1h的指纹图谱。结果表明：各峰的相对保
留时间一致，RSD％1％，而各峰的相对面积比值大
体一致，RSD％5％，符合指纹图谱的要求。
2．4稳定性试验：取3号林蛙油粉末按2．1项下方
法制备，取20扯L在1d内进样5次，检测1h指纹
图谱。结果表明：各色谱峰相对保留时间一致，
RSD％1％，各峰相对积分面积大体一致，RSD<
3％。由此可知常温下1d保持较好的稳定性。
2．5 重现性试验：取3号林蛙油粉末5份，按2．1
项下方法平行制备供试品。取20肚L进样，检测1h
的指纹图谱，结果表明：各色谱峰的相对保留时间和
主要峰面积比值大体一致，其RSD<3％。
2．6 林蛙油原药材的HPLC指纹图谱及技术
参数‘8·“。
2．6．1分析方法：精密吸取1～10号林蛙油供试品
各20肛L，在上述色谱条件下进样，记录HPLC色谱
图，计算样品中各色谱峰相对保留时间(RT)及相对
峰面积比值RA，结果见表1、2。
2．6．2共有峰确定：在1～10号林蛙油供试品的
HPLC指纹图谱中由相对保留时间比较稳定的色谱
峰(RSD≤3％)可以确定的主要共有峰有17个，其
平均保留时间在0．6544～6．256，RSD<2．9％。分
别为峰3、4、S、6、7、12、14、15、18、20、21、23、26、27、
28、30、31，林蛙油的HPLC指纹图谱见图1(所标示
出的为共有峰)。共有峰面积比值见表3。
2．7对照指纹图谱的制定[1⋯：本实验不存在超长
样本，因此选用共有模式生成法即平均矢量法。
通过一系列色谱指纹图谱的研究，模拟出对照
指纹图谱或生成对照指纹图谱的数据，即共有模式
生成法，该方法综合了所有样品的指纹图谱信息。
平均矢量法一三望堕』堕三二二坠卫二2垒业
式中，X，，保留时间tR=i时的数据。
表1各样品峰的相对保留时间比值
Table1 Ratioofrelativeretentionmeforeachchromatographicpe ks
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·593·
表2各样品峰的相对峰面积比值
Table1 Ratioofrelativepeakareaforeachchromatographicpe ks
S
—．L———_————————·———————’———L-—一+一L——_-———-——_．———-——^———^_——————4———-——‘—一
0 2 4 6 8 10 12 14 0 5 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
f／min
图1参照物(A)和样品(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCchromatogramsfreferencesubstance(A)andsample(B)
对照指纹图谱的特征峰保留时间和面积比值见 由此，重叠率的计算是以建立的对照指纹图谱
表4、5。
2．8 指纹图谱中色谱峰的重叠率‘n]：峰重叠率是在
两个相互比较样品的各自峰数及两者共有峰数(指a
值相同的峰)的基础上，从质的角度上考虑其相关性。
重叠率一鑫黼稳骅然禚法X100％
为基准，将其出峰数目和欲对比样品的出峰数之
和作分母，两者具有相同的a值之和作分子，以此分
别求出10个样品的重叠率，见表6。从表中可以知
道10批林蛙油的指纹图谱与对照指纹图谱十分
接近。
万方数据
·594· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
表3主要色谱峰的相对峰面积比值
Table3 Ratioofrelativepeakareaformainchromatographicpe ks
表4对照指纹图谱的特征保留时间比值
Table4 Ratioofretentionmeforcharacters
ofcontrastfingerprint
峰号 RT 峰号 RT
1 0．6544 9 2．8047
2 0．8422 10 2．9541
S 1 ll 3．1773
3 1．1806 12 3．9847
4 1．2794 13 4．3186
5 1．8064 14 4．7316
6 1．9379 15 5．3278
7 2．0421 16 6．4837
8 2．5086
表5对照指纹图谱的特征峰面积比值
Table5 Ratioofpeakareaforcharacters
ofcontrastfingerprint
峰号 RA RSD／％ 峰号 RA RSD／％
1 0．667 29．66 9 0．023 43．74
2 0．106 35．34 10 0．036 46．36
S 1 0 11 0．029 37．60
3 0．012 41．53 12 0．019 45．66
4 0．027 45．40 13 0．069 48．32
5 0．012 36．27 14 0．007 48．09
6 0．023 26．79 15 0．015 24．85
7 0．016 37．Z4 16 0．043 33．12
．8 0．53 47．70
表6 10种样品的重叠率
Table6 Repeatabilityoftensamples
样品 重叠率／％ 样品 重叠率／％
1 79．07 6 94．44
2 91．89 7 85．OO
3 87．18 8 95．14
4 80．95 9 89．47
5 80．95 10 87．18
3讨论
对中药复杂体系的质量控制是中药现代化研究的
关键问题，本实验以林蛙油为例应用反相高效液相色
谱技术，建立了林蛙油指纹图谱控制林蛙油的质量。
3．1 流动相的选择：选用了甲醇一水、乙腈一水、
乙腈一水(含二乙胺)等体系进行洗脱，结果以乙腈一
水体系得到的色谱峰形较好，且较稳定。为了得到更
好的分离度，选用乙腈一水(25：75)、乙腈一水(50：
50)、乙腈一水(75：25)3种流动相的组合。结果在
280nm处，乙腈一水(50：50)的系统为最佳，分离度
较好，保留时间适中，因此选用此作为林蛙油HPLC
指纹图谱检测的流动相。
3．2检测波长的选择：本试验选用208、254、280
nm3种波长，在208nm有多个峰出现，但是其属于
末端吸收，溶剂对其有影响；在254nm的峰较少；
在280nm有多个峰出现而且峰形也较好，同时结
合所含主要成分(参照对照品)在280nm处有最大
吸收，因此选用280nm作为林蛙油的HPLC的指
纹图谱检测波长。
3．3参照峰的选择；在指纹图谱中一般选择比较大
的且稳定的峰作为参照峰，其中林蛙油的指纹图谱
中酪氨酸的吸收峰最大而且稳定，因此选择此峰为
林蛙油指纹图谱的参照峰。
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独活种子发芽特性研究
王康才，陈 暄，唐晓清，兰才武
(南京农业大学园艺学院中药材科学系，江苏南京 210095)
摘要：目的探讨独活种子的发芽率低的原因，以及适宜发芽条件，为大田生产奠定基础。方法采用去果皮、清
水以及GA浸种等方法处理种子，在不同的温度和光照条件下，检测种子的发芽情况。结果清水浸种24h可提高
发芽率13．7％，去果皮可提高种子发芽率10．6％；在浸种24h条件下，与暗培养相比，光照可提高发芽率16．6％；
适宜发芽温度为20℃，高温对独活种子萌发具有抑制作用。结论独活种子中存在发芽抑制物质，光照可促进种
子发芽。
关键词：独活；种子；休眠；发芽抑制物质
中图分类号：R282．21 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)04—0595—03
SeedgerminationcharacterofRadixAngelicaPubescentis
WANGKang—cai，CHENXuan，TANGXiao—qing，LANCai—wu
(DepartmentofChineseMateriaMedica。CollegefHorticulture，NanjingAgriculturalU iversity，Nanjing210095，China)
Keywords：RadixAngelicaPubescentis(RAP)；seed；dormancy；germinationinhibitorysubstance
独活的原植物为伞形科多年生草本重齿毛当归
AngelicapubescensMaxim．f．biserrataShanet
Yuan，以根入药，具有祛风除湿、通痹止痛的功效。
重齿毛当归为商品独活的主流品种，以川I独活著称，
品质优，产量大，应用广泛并有出口，市售川独活多
出自四川、湖北两省[1]。目前，生产上主要采用种子
进行有性繁殖，10～11月份采种后，冬播或春播。但
在调查中发现，重齿毛当归出苗率低，影响了独活的
规范化种植。为此，对重齿毛当归种子发芽特性进行
了初步研究，以期为建立其种子质量检测方法奠定
基础，并为生产提供技术支持。
1材料与方法
1．1材料：独活种子由湖北省中药研究所陈平教授
提供。小白菜种子购于江苏省农业科学院。
1．2方法
1．2．1 常规质量检查：依《实用种子检验技术》[2]检
测种子净度、千粒质量。
1．2．2吸水曲线的测定：参考文献的方法[3]，挑选
饱满均匀的独活分生果100粒，置培养皿中，3次重
复，25℃加水浸泡，按一定时间1、2、4、8、12、16、20、
24h间隔取出，快速用滤纸把分生果表面的水分吸
干，称质量，种子吸水百分率=[(吸水后种子质量一
风干种子质量)／风干种子质量]×100％。
1．2．3不同种子处理发芽试验；将生产上应用的种
收稿日期：2004—07—17
作者简介：王康才(1962一)，男，江苏赣榆人，副教授，1985年毕业于吉林农业大学药用植物栽培专业，从事药用植物栽培与生理研究。
Tel：(025)84396125Fax：(025)84396125E—mail：njwkc2002@126．com
万方数据
林蛙油的指纹图谱
作者： 李津明， 许婷， 贾绍华， LI Jin-ming， XU Ting， JIA Shao-hua
作者单位： 李津明,LI Jin-ming(东北林业大学,黑龙江,哈尔滨,150076)， 许婷,贾绍华,XU Ting,JIA
Shao-hua(哈尔滨商业大学药学院,黑龙江,哈尔滨,150076)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)
被引用次数： 4次
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