全 文 ：·690· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
超临界流体萃取结合柱色谱法从废次烟叶中分离纯化茄尼醇的研究
位 华1，宓鹤鸣”，柳正良2
(1．第二军医大学药学院，上海200433；2．上海永吴生物医药研究所，上海200940)
摘 要：目的 建立一种从废次烟叶中提取分离茄尼醇的方法，并考察相关因素对提取分离的影响。方法 采用超
临界CO：萃取法从废次烟叶中提取得到茄尼醇粗品，再用硅胶柱色谱法结合重结晶进行分离纯化。结果超临界
cO。萃取茄尼醇的实验条件为：萃取压力20MPa、萃取温度55℃、萃取时间1．5h、95％乙醇为改性剂，由此得到
质量分数为30％的茄尼醇粗品；硅胶柱色谱用石油醚一乙醚一醋酸乙脂一丙酮(15：5：3：1)进行分离洗脱，收集相关
流份，经重结晶，得到质量分数大于98％的茄尼醇样品。结论本法简便、合理，由此可获得高纯度茄尼醇。
关键词：烟草；茄尼醇；超临界萃取；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)05—0690—03
Extractionandseparationofs lanesolfr mNicotianatob cumbysupercritical
fluidextractionandsilicagelcolumnchromatography
WEIHual，MIHe—ruingH，LIUZheng—lian92
(1．CollegeofPharmacy，SecondMilitaryMe icalUniversity，Shanghai200433，China；
2．ShanghaiYonghaoBiomedicineInstitute，Shanghai200940，China)
Keywords：NicotianatabacumL．；solanesol；supercriticalfluidextraction(SFE)；HPLC
烟叶来源于茄科植物烟草Nicotianat b cum
L．的干燥叶片。性温、味辛，有毒，具有消肿、解毒、
杀虫等功效，主要用于疔疮肿毒、头癣、秃疮、毒蛇咬
伤等症，可治风痰、鹤膝(包括骨结核、慢性化脓性膝
关节炎等)，也可用于灭钉螺、蚊、蝇、老鼠和杀虫等。
其中，茄尼醇(solanes01)是烟草的有效成分之一。现
代研究表明茄尼醇具有脂质抗氧化作用和消除机体
内自由基的功能，它也是合成辅酶Q，。、维生素Kz、
抗溃疡和抗癌药物不可缺少的重要天然原料[1J。从
烟叶中提取分离不同纯度的茄尼醇方法主要有溶剂
法乜3和色谱法，这些方法获得的茄尼醇的质量分数
最高在95％[3~6]，美国Sigma公司提供的化学对照
品质量分数仅保证大于90％，实际检测质量分数为
90．0589％。为此，本实验采用超临界流体萃取
(supercriticalfluidextraction，SFE)技术结合柱色
谱法对烟草中茄尼醇的提取、分离和纯化进行研究，
获得了高纯度的茄尼醇。
1仪器与试药
1L超临界流体萃取设备(江苏华安超临界萃
取有限公司)；Waters高效液相色谱系统(配有515
泵，2487检测器，N2000色谱工作站)。烟叶来源于
山东地区栽培烟草，经宓鹤鸣教授鉴定其原植物为
烟草N．tabacumL．的黄花栽培品系；茄尼醇对照
品(Sigma公司，质量分数为90％，用于定性分析；
自制品，质量分数98．26％，用于定量分析。)；实验
用CO：(上钢气体厂)；硅胶(200～300目，青岛海洋
化工厂)；乙醇、石油醚、乙醚、醋酸乙酯、丙酮为分析
纯，正己烷、异丙醇为色谱纯。
2方法与结果
2．1 SFE萃取方法：取一定量烟叶粉碎过一定数
目筛，50℃烘干。精确称取一定量过筛后的烟叶碎
末，用乙醇浸润过夜后，装入萃取釜中，调节温度、压
力、CO：流速，运行一段时间后，在分离釜出口处收
集萃取液，将萃取液浓缩至浸膏状，得茄尼醇粗品
(I)。
2．2 分离与纯化：取由SFE得到的茄尼醇粗品
(I)10g，溶于石油醚(25mL)中，将此溶液缓缓加
入色谱柱(70cm×4cm，硅胶量350g)，依次用石油
醚、乙醚、醋酸乙酯、丙酮梯度洗脱，分段收集洗脱
液，采用薄层色谱对各洗脱流份进行跟踪检测[石油
醚一醋酸乙酯(25：1)展开，碘熏显色]，并与茄尼醇
对照品对照，归并富含茄尼醇流份，减压回收溶剂，
得到橙黄色浆状茄尼醇粗品(Ⅱ)1．23g，经高效液
相色谱分析茄尼醇质量分数约为79．4％。
收稿日期：2004一10—12
作者简介：位华(1979一)，女，新疆乌鲁木齐人，第二军医大学药物分析专业硕士研究生，主要研究方向为中药现代化与标准化。
Tel：(021)25070389E—mail：wh7975@hotmail．tom
*通讯作者Tel：(021)25070389E—mail：mhml9470718@sina．C01TI
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·691·
对茄尼醇粗品(Ⅱ)再进行一次柱色谱分离操
作，可获得浅黄色到类白色的茄尼醇结晶物，质量分
数达到95．19％，对此结晶进一步在正己烷、丙酮等
试剂组成的混合溶剂中，在不同的时间和温度下放
置，进行反复重结晶，最后获得茄尼醇精制品0．74
g，经高效液相色谱分析茄尼醇质量分数为
98．26％。
2．3茄尼醇的HPLC测定
2．3．1 色谱条件[7|：色谱柱：HypersilSi02柱(250
mm×4．6mm，5弘m)；流动相：正己烷一异丙醇(90：
10)；检测波长：205nm；柱温：室温；体积流量：1
mL／min；进样量：10弘L。在此条件下，样品、对照品
的图谱见图1，表明茄尼醇色谱峰分离良好，达到定
量要求。
0 5 10 150 5 10 150 5 10 15
*一茄尼醇
*一solanesol
图1 Sigma公司茄尼醇对照品(A)、SFE粗提物
(B)和自制品茄尼醇对照品(C)的HPLC图
Fig．1HPLCchromatogramsfsolanesolreference
substancefromSigmaCompany(A)，SFE
extract(B)，andsolanesolreference
substancepurifiedintest(C)
2．3．2对照品溶液的制备：称取茄尼醇对照品约10
mg，精密称定(10．4rag)，置50mL量瓶中，加正己
烷至刻度，摇匀，作为贮备液(0．208mg／mL)，备用。
2．3．3供试品溶液的制备：取SFE萃取的茄尼醇
粗品(I)适量(约30mg)，精密称定，溶于适当溶剂
中，定容，混匀，精密吸取5mL置50mL量瓶中，加
正己烷稀释至刻度，超声混匀后，放至室温，用0．45
弘m微孔滤膜滤过，取10肛L进行高效液相色谱分
析。取重结晶茄尼醇精品适量(约10nag)，精密称
定，置50mL量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，
混匀，备用。
2．3．4线性关系考察：精密量取茄尼醇对照品贮备
液适量，稀释为2．08、4．16、8．32、16．60、33．20、
41．60tLg／mL，依次进样10肛L。以色谱峰面积积分
值对进样量回归，得线性方程Y一3335904X+
41049，，．一0．9998，表明茄尼醇在2．08～41．6肛g／
mL时，质量浓度与峰面积积分值呈良好的线性
关系。
2．4 SFE工艺优化：在SFE萃取中，影响萃取结果
的因素主要是萃取时间、萃取温度、萃取压力和改性
剂，选用正交试验，以茄尼醇的质量分数为指标，考
察4因素在3个水平情况下对萃取的影响。正交试
验安排及分析结果见表1。
表1正交试验方案与结果分析
Table1 Analyticalresultsoforthogonaltest
编号A趸～警鬻袅淼呀
直观分析结果表明，对烟草中茄尼醇提取率的
影响程度大小依次为D>C>A>B，由此得出SFE
最佳工艺条件为A。B：C，D，，即萃取时间1．5h、萃取
温度55℃、萃取压力20MPa、改性剂乙醇体积分数
为95％为最佳提取条件。所得茄尼醇粗品(I)为深
红棕色、黏稠状物质，收率为5．03％，经高效液相色
谱分析该粗品中茄尼醇的质量分数为38．1％。在此
条件下对最佳工艺进行了验证试验，结果粗提物中
茄尼醇的质量分数为34．2％(，z一3)。
3讨论
实验研究结果显示，对茄尼醇这样一种弱极性
化合物，用SFE法提取是可行的，本法与其他方法
比较有一定的优势，如果提取过程可彻底摆脱用正
己烷等价格高且有污染的有机溶剂，仅用少量安全
的常规溶剂乙醇作改性剂即可获得质量分数高达
30％的茄尼醇粗品，而且还有生产周期短，提取效率
高等优点。在SFE法萃取茄尼醇试验的摸索中，同
时设计了不加改性剂的正交实验条件，其结果表明
此条件下所得粗品中茄尼醇普遍低于加入乙醇为改
性剂所得粗品中茄尼醇。本实验中采用优化条件，粗
提物中茄尼醇质量分数为34．2％，而烟叶中茄尼醇
的质量分数仅为0．43％，说明该实验条件能够提取
出含较高茄尼醇的粗品。
。2
3
4
o
6
7
8
9髓＆配h乜b
R
万方数据
·692· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
在茄尼醇粗品(I)硅胶柱色谱分离过程中，考
察了洗脱溶剂的种类和配比，最终确定了上述混合
溶剂为茄尼醇富集洗脱液，可经一次洗脱得到质量
分数约为80％的茄尼醇粗品(Ⅱ)，二次柱色谱分离
结果可以获得质量分数95％的样品，其中硅胶柱的
洗脱连续性及收集流份的体积对茄尼醇柱色谱分离
都有重要的影响。
重结晶被视为取得高纯度茄尼醇的关键，本实
验反复选用正己烷、乙醚、丙酮等为重结晶溶剂，结
果发现采用混合溶剂重结晶能获得质量分数
98．26％的茄尼醇精品，其中结晶溶剂的种类、配比、
用量，以及结晶温度和时间等对茄尼醇结晶的形成
和纯度有重要的影响。
在茄尼醇的测定过程中，粗品试样须经微孔滤
膜滤过，以防堵塞；在分离过程中，考察了不同流动
相配比、不同体积流量、不同柱温等因素对分离的影
响，结果选用正己烷一异丙醇(90：10)为流动相，体
积流量为1mL／min，主峰和杂质峰能清晰地分开，
此时目标化合物茄尼醇的保留时间在9min左右，
分离效果满意。
本实验最终分离纯化得到的茄尼醇样品的质量
分数远较Sigma公司提供的化学对照品要高。因
此，本实验研究工作中除最初定性分析使用Sigma
公司的茄尼醇外，有关定量分析研究均使用自制质
量分数98％以上的茄尼醇制备对照品溶液。
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悬浮聚合法制备咖啡因分子印迹聚合物微球及其性能研究
陈移姣，周兴国，李桂玲+
(华中科技大学同济医学院，湖北武汉430070)
摘要：目的建立一种分析测定中草药的方法，并对生物碱有效成分进行分离。方法 以咖啡因为模板分子，采
用水溶液悬浮聚合法制备了用于色谱分离(作HPLC的固定相)的微米级分子印迹聚合物微球(MIPMs)。结果当
以茶叶碱为竞争分子时，MIPMs对咖啡因有强的吸附和特异性选择识别能力。结论该MIPMs能对茶叶中的咖
啡因进行分离富集。
关键词：咖啡因；悬浮聚合；色谱固定相；分子印迹聚合物微球
中图分类号：R283．6；R286．02文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)05—0692—04
Preparationofmolecularlyimprintedmicrospheresagain tcaffeinebyaqueous
micro—suspensionolymerizationanditsrecognitioncharacterstics
CHENYi—jiao，ZHOUXing-guo，LIGui—ling
(TongjiMedicalCo lege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430070，China)
Keywords：caffeine；aqueousmicro—suspensionolymerization；HPLCstationaryphase；molecularly
imprintedpolymericmicrospheres(MIPMs)
分子印迹技术是结合高分子化学、生物化学、有
机化学等学科发展起来的一门边缘学科。分子印迹
聚合物可在分子水平上对物质进行选择性识别。类
似于酶和底物、抗体和抗原的关系，且具有生物活性
物质无法比拟的稳定性和寿命长等优点。由于其独
特的性能，故在化合物的分离中得到了广泛的应用。
收稿日期：2004—11-08
作者简介：陈移姣(1974～)，女，湖北监利人，华中科技大学硕士研究生，主要从事药物合成及分析。E—mail：cyjailong@163．com
*通讯作者Tel：(027)83650692E—mail：gueilingli@163．net
万方数据
超临界流体萃取结合柱色谱法从废次烟叶中分离纯化茄尼醇
的研究
作者： 位华， 宓鹤鸣， 柳正良， WEI Hua， MI He-ming， LIU Zheng-liang
作者单位： 位华,宓鹤鸣,WEI Hua,MI He-ming(第二军医大学药学院,上海,200433)， 柳正良,LIU
Zheng-liang(上海永吴生物医药研究所,上海,200940)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(5)
被引用次数： 12次

参考文献(7条)
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流体技术在废次烟叶中提取纯化茄尼醇的应用[期刊论文]-中国烟草学报2008,14(5)
3. 王栋良.张雪娟 大孔树脂法纯化茄尼醇的研究[期刊论文]-河北医药2006,28(9)
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3.赵亚梅.胡小玲.管萍.杨峰 夹带剂对超临界CO2萃取茄尼醇的过程强化[期刊论文]-过程工程学报 2007(2)
4.张振 茄尼醇提取分离和测定方法[期刊论文]-贵州化工 2006(2)
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7.杨义芳 中药提取分离的组合与集成优化技术[期刊论文]-中药材 2008(12)
8.邵惠芳.焦桂珍.刘金霞.赵铭钦.黄元炯 超临界CO2萃取技术在烟草中的应用[期刊论文]-安徽农业科学 2008(13)
9.李玉山.徐功奎 废次烟叶中茄尼醇的提取工艺研究[期刊论文]-计算机与应用化学 2010(2)
10.李明.潘扬 烟叶中茄尼醇提取分离纯化与含量测定的研究进展[期刊论文]-医药导报 2006(12)
11.李玉山.徐功奎 废次烟叶中茄尼醇的提取工艺研究[期刊论文]-计算机与应用化学 2010(2)
12.唐磊 从废烟草中提取茄尼醇的研究[学位论文]硕士 2006


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