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灰毡毛忍冬的化学成分研究
贾晓东，冯 煦。，赵兴增，王鸣，孙浩，董云发
(江苏省中国科学院植物研究所，南京中山植物园江苏省药用植物研究开发中心，江苏南京210014)
灰毡毛忍冬LoniceramacranthoidesHan ．
-Mazz．为忍冬科忍冬属植物，具有清热解毒、抗菌
消炎的功效，在中医临床及民间广泛应用于痈肿疔
疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温热发病等疾
病的治疗。《中国药典>>2005年版一部将其作为新收
载品种，与红腺忍冬、华南忍冬一同列入新增的山银
花项下。国内外对其化学成分的研究相对较少。本
文报道从灰毡毛忍冬中分离得到的8个化合物：金
圣草素一7-0一pD一吡喃葡萄糖苷(I)、苜蓿素一7一。一p
D一吡喃葡萄糖苷(I)、槲皮素(I)、芦丁(Ⅳ)、槲皮
素一3—0一}D一吡喃葡萄糖苷(V)、绿原酸甲酯(Ⅵ)、
绿原酸(Ⅵ)、3一O—pD一吡喃葡萄糖基(1-3)-a—L一吡
喃鼠李糖基(1—2)一a—L一吡喃阿拉伯糖基一常春藤皂苷
元-28-O—pD一吡喃葡萄糖酯苷(Ⅶ)，其中化合物I
和Ⅶ为首次从忍冬属中分离得到，化合物Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ
为首次从灰毡毛忍冬中得到。
1仪器与材料
核磁共振光谱用BrukerAV一500型核磁共振
光谱仪测定(TMS内标)，熔点用X4型数字显示显
微熔点测定仪测定，ESI—MS在Agilent1100LC／
MSDSL上测定，Labconco(freezedrysyst m／
LYPHLOCK固4．5)冷冻干燥仪。柱色谱材料为硅胶
H(Merck)、RP—C18(YMC，12nm)及SephadexLH一
20(AmershamBioseiences)。灰毡毛忍冬于2003年
6月采自湖南隆回县，经江苏省中国科学院植物研
究所袁昌齐研究员鉴定，标本现存放于江苏省中国
科学院植物研究所药用植物研究开发中心。
2提取与分离
灰毡毛忍冬干燥花蕾38kg用适量90％乙醇回
流提取浓缩得浸膏，取其中一半的浸膏依次用石油
醚、醋酸乙酯萃取。萃取所得醋酸乙酯部分用硅胶柱
分段、脱色，流动相依次为氯仿一甲醇(10：1、4：1、
1 z 1)、甲醇。其中氯仿一甲醇(4：1)部分经反复硅胶
柱分段，反相柱分离及凝胶柱纯化得到单体化合物
I～Ⅶ。
3结构鉴定
化合物I：黄色粉末(丙酮一水)，盐酸一镁粉反应
阳性，Molish反应阳性。ESI—MS(m／z)：485[M+
Na]+，分子式为C22H2：011。IR蜷是(cm．1)：3300
(OH)、1660(C=O)、1600 1495(苯环双键)、
1110(C一0)、1085、840。1H—NMR(DMSO—d。，500
MHz)艿：6．45(1H，d，J一2．18Hz，H一6)，6．87(1H，
d，，=2．14Hz，H一8)，示A环为5，8一二取代；6．98
(1H，S，H一3)，7．59(1H，overlap，H一2’)，6．95(1H，d，
J=8．9Hz，H一57)，7．60(1H，m，H一6’)，示B环为
ABX自旋系统；5．06(1H，d，J=7．40Hz，Glc—H一
1)，12．95(1H，S，5一OH)。”C—NMR(DMSO—d6，125
MHz)dt：164．10(C一2)，103．75(C一3)，181．99(C一4)，
161．04(C一5)，100．01(C一6)，162．93(C一7)，94．98
(C一8)，156．87(C一9)，105．31(C一10)，120．45(C一17)．
11 ． 3(C一27)，150．88(C一37)，148．01(C一4’)，
115．74(C一57)，121．32(C一6’)，99．47(G一1)，73．09
(G一2)，77．21(G一3)，69．59(G一4)，76．43(G一5)。
60．61(G一6)，55．95(OCH。)。综合各光谱数据及与
收稿日期：2008．03—28
摹金项目：江苏省社会发展科技计划项目(BS2001025)
作者简介：贾晓东．(1981一)，女，内蒙古包头市人，2006年毕业于江苏省中国科学院植物研究所，获硕士学位·从事药用植物活性成分的
。通讯作者冯煦Tel／Fax．．(025)84347084E-mail：fengxu@mail．cnbg．net
万方数据
·1636· 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第1I期2008年11月
文献报道[1]对比鉴定化合物为金圣草素一7一O—pD一
吡喃葡萄糖苷。
化合物I：黄色粉末(丙酮一水)，盐酸一镁粉反应
阳性，Molish反应阳性。ESI—MS(m屈)：515CM+
Na]+，分子式为C：。H：．012。IR堆：(cm叫)：3300
(OH)、1660(C=O)、1600 1495(苯环双键)、
1 110(C—O)、1085、840。1H—NMR(DMSO—d6，500
MHz)d：6．46(1H，d，J=2．12Hz，H一6)，6．93(1H，
d，，=2．18Hz，H一8)，示A环为5，7--取代；6．98
(1H，s，H一3)，示3位无取代基；7．36(2H，s，H一2’，
67)，示B环为对称结构；5．06(IH，d，--7．40Hz，
Glc—H一1)，12．95(1H，s，5一OH)。13C—NMR(DMSo一
破，125MHz)3：164．06(C一2)，103．41(C一3)，181．98
(C一4)，161．04(C一5)，100．15(C一6)，162．97(C一7)，
95．27(C一8)，156．82(C一9)，105．34(C一10)，120．17
(C一1’)，104．55(C一27)，148．19(C一3’)，140．07(C一
47)，148．19(C一57)，104．55(C一67)，99．47(G一1)，
73．09(G一2)，77．32(G一3)，69．67(G一4)，76．43(G一
5)，60．51(G一6)，56．35(oCH。×2)。综合各光谱数
据及与文献报道[2]对比鉴定化合物为苜蓿素一7—0一
肛D一吡喃葡萄糖苷。
化合物I：黄色粉末(MeOH)，mp>300℃，盐
酸一镁粉反应阳性。1H—NMR(DMSO—d6，500MHz)
艿：6．18(1H，d，J=2．02Hz，H一6)，6．40(1H，d，J=
2．02Hz，H一8)，示环为5，7一二取代；6．88(1H，d，J=
8．49Hz，H一57)，7．54(IH，dd，J=2．19，8．47Hz，H一
6’)，7．67(1H，d，‘，=2．18Hz，H一2’)，示B环为ABX
自旋系统}9．26，9．31，9．54(3H，s，3×0H)，10．74
(1H，s，7-OH)，12．48(IH，s，5一OH)。1H—NMR数据
与文献报道‘33槲皮素相对照一致，且与槲皮素对照
品Rf值及斑点颜色一致，故鉴定化合物为槲皮素。
化合物Ⅳ：黄色粉末(冻干)，mp185～186℃，
盐酸一镁粉反应和Molish反应均为阳性。该化合物
的理化常数和NMR数据与文献报道“]一致，故鉴
定此化合物为芦丁。
化合物V：黄色粉末(丙酮一水)，mp191～
192℃。1H—NMR(DMSO—d6，500MHz)8：6．19
(1H，d，J=1．62Hz，H一6)，6．39(1H，d，J=1．62
Hz，H一8)，示A环为5，7一二取代；6．84(1H，d，，=
8．97Hz，H一57)，7．57(1H，dd，overlap，H一6’)，7．57
(1H，d，J=1．84Hz，H一27)，示B环为ABX自旋系
统；5．45(1H，d，，=7．14Hz，Glc—H一1)，9．20，9．66
(2H，s，2×OH)，10．80(1H，s，7一OH)，12．63(1H，s，
5—0H)。”C—NMR(DMSO—d。，125MHz)艿：156．14
(C一2)，133．31(C一3)，177．42(C．4)，161．22(C-5)，
98．60(C一6)，164．10(C一7)，93．44(C一8)，156．29(C-
9)。103．94(C一10)，121．55(C—l7)，11 ．16(C-2’)，
144．77(C一3’)，148．42(C一4’)，116．17(C-57)，
121．14(C一67)，100．86(G一1)，77．51(G一2)，76．47
(G一3)，74．05(G一4)，69．90(G一5)，60．94(G一6)。以上
数据与文献报道槲皮素一3—0一pD一吡喃葡萄糖苷[3]
图谱数据一致，故鉴定此化合物为槲皮素一3一D—pD一
吡喃葡萄糖苷(quercetin一3—0一pD-glucopyran—
oside)。
化合物Ⅵ：白色簇晶(石油醚一醋酸乙酯)，mp
90～93℃。1H—NMR(CDCl3，500MHz)艿：6．27(d，
，一15．90Hz)，7．59(d，J=15．65Hz)，显示结构中
有反式烯烃键的存在。13C—NMRdt：(DMSO—d。，125
MHz)艿：73． 1(C一1)，35．11(C一2)，70．97(C一3)，
69．32(C一4)。66．84(C一5)，37．20(C一6)，173．55(C一
7)，51．72(C一8)，165．30(C一17)，113．83(C一2’)，
145．05(C一3’)，125．32(C一47)，114．56(C一5’)，
145．58(C一67)，148．44(C一77)，115．80(C一87)，
121．24(C一97)。该化合物的理化常数和NMR数据与
文献报道的绿原酸甲酯Is]一致，故鉴定此化合物为
绿原酸甲酯。
化合物Ⅶ：淡黄色针晶(石油醚一醋酸乙酯)，mp
207～209℃。该化合物的理化常数和NMR数据与
文献报道的绿原酸[6]一致，故鉴定此化合物为绿
原酸。
化合物Ⅶ：白色片状晶体(冻干)，mp232～
233℃，C53H86022，Liebermann—Burchard反应阳性，
TLC香草醛一硫酸试液加热显紫红色，放置后变蓝。
13C—NMR(C5D5N，125MHz)艿：39．07(C一1)，26．37
(C一2)，81．21(C一3)，43．58(C一4)，47．60(C一5)，
18．13(C一6)，32．56(C一7)，39．95(C一8)，48．21(C一
9)，36．89(C—10)，23．41(C一11)，122．94(C一12)，
144．11(C一13)，42．14(C一14)，28．28(C一15)，23．85
(C一16)，47．00(C一17)，41．72(C一18)，46．16(C一19)，
30．74(C一20)，33．99(C一21)，32．79(C一22)，64．OO
(C一23)，14．15(C一24)，16．17(C一25)，17．52(C一26)，
26．08(C一27)，176．42(C一28)，33．09(C一29)，23．66
(C一30)，104．92(3一A一1)，75．38(A一2)，75．17(A一3)，
69．75(A一4)，66．45(A-5)，101．43(R一1)，71．79(R一
2)，83．06(R一3)，73．04(R-4)，69．79(R一5)，18．44
(R一 )，106．91(G一1)，75．38(G-2)，78．61(G一3)，
a．62(G一4)，78．53(G一5)，62．25(G一6)。95．75(28一
(下转第1720页)
万方数据
·1720· 中草嚆ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
泳道1～15一随机克隆PCR产物M—DL一2000Marker
Lane1—15一PCRProductofrandomclonesM—DL一2000Marker
圈4随机挑取15个克隆的PCR产物检测
Fig．4PCRExaminationofrandomselectedfifteenclones
泳逼1～12-随机噬菌粒M—DL-2000Marker
Lane1—’12一randomplasmidM—DL一2000Marker
圈5 pBluescritSK一噬菌粒双酶切检测
Fig．5Examinationofd gestionw thXhoI。EcoRI
offragmentscontainedpBluecriptSK—phasmids
离。为了进行中药何首鸟次生代谢物的生物合成基
因调控的基础研究，笔者构建了何首乌叶eDNA文
库，在构建文库的过程中，特别注意了以下几点：
(1)mRNA的质量是文库构建成功的最重要的
因素，低质量mRNA(如部分降解)建立的文库容易
丢失大分子mRNA的全长拷贝，以及稀有的转录
本[‘]。因此，在取材上选用新鲜的何苜乌叶片为材
料，这时提取出的mRNA较丰富，质量也相对较高。
(2)cDNA合成的质量除了保证在总RNA和
mRNA提取过程中无RNase污染外，逆转录酶的选
择也很重要。采用了Stratagene公司的基因工程逆
转录酶StrataScript，它是一种新型的无RNaseH活
性的莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV～RT)，
在RNaseH位点的高度保守区发生的点突变导致
RNaseH活性丧失而并不影响其逆转录功能，这种
无核酸酶活性的突变体使其较野生型MMLV—RT
能转录出较高比例的全长eDNA转录本，使eDNA
合成的长度和效率明显增加，这对于一个高质量的
cDNA文库是必需的。
(3)双链eDNA分级分离也是一个不可忽略的
环节。cDNA经XhoI酶切后形成大小不等的片段，
若将这些片段都与载体连接，那些小片段会优先跟
载体相连，使得文库中小片段占有较高的比例，大大
降低了文库的质量Is]。通过SepharoseCL一2B凝胶柱
去掉绝大部分小于400bp的cDNA及酶切反应残留
的DNA小片段，保证了文库中含有较大的cDNA分
子，有利于文库的后续筛选工作[6]。
(4)载体与cDNA连接效率的高低会直接关系
到文库构建是否成功。文库连接与一般的片段克隆
的连接不一样，一般的片段克隆连接是固定长度的
载体与固定长度的目的DNA连接，而文库连接是固
定长度的载体与非固定长度的目的DNA连接，目的
基因cDNA长的有lokb以上，短的只有400bp或
更短。因此，须对两者的连接比例进行摸索。在实验
中，建立了几个平行反应，得出两者的连接比为1
时，文库滴度最高。
cDNA文库的质量一般包括文库滴度、重组率
及插入片段大小。实验表明，所构建的何首乌cDNA
文库初始滴度为1．07×106pfu／mL，重组率为
98．5％，插入片段在0．5～2．0kb，文库的质量满足
随后的EST测序及文库筛选要求，目前，本实验室
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(上接第1636页)
G一1)，74．17(G一2)，79．29(G一3)，71．16(G一4)，78．91
(G一5)，62．57(G-6)。以上数据与文献对比[73鉴定化
合物为3—0一pD一吡喃葡萄糖基(1—3)一a—L一吡喃鼠李
糖基(1—2)-a-L一吡喃阿拉伯糖基一常春藤皂苷元一28—
0一肛D一吡喃葡萄糖酯苷。
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万方数据
灰毡毛忍冬的化学成分研究
作者： 贾晓东， 冯煦， 赵兴增， 王鸣， 孙浩， 董云发
作者单位： 江苏省中国科学院植物研究所,南京中山植物园江苏省药用植物研究开发中心,江苏,南京
,210014
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
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