全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·207·
溶液状态下很不稳定，所以在保存时需要选取一个
合适的条件，比如在高质量浓度、低pH值、低温条
件下基本稳定。
随着丹参酚酸B作为一种具有心脑血管疾病
治疗效果的药物的开发和应用，如何保持其在生产
处理过程中的稳定性是一个越来越急迫的问题。本
实验对影响溶液中丹参酚酸B稳定性的因素进行
了初步探讨，所得结果虽然可满足丹参酚酸B提取
分离过程中的技术要求，但对于其水溶液制剂如何
保持丹参酚酸B的稳定性还需进一步探索。
Reference$：
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药现代研究)[M]．Beijing：BeijingMedicalUn versityand
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大孔吸附树脂法分离纯化虎杖中自藜芦醇的研究
向海艳，周春山‘，杜邵龙
(中南大学化学化工学院，湖南长沙410083)
摘 要：目的 研究大孔吸附树脂分离纯化虎杖中自藜芦醇的工艺条件及参数。方法 以白藜芦醇的吸附量和解
吸率为考察指标，从中筛选树脂，并研究大孔吸附树脂分离纯化白藜芦醇的吸附性能和洗脱参数。结果 NKA一Ⅱ
树脂对白藜芦醇有较好的吸附分离效果，适合于虎杖中白藜芦醇的提纯，经该树脂吸附解吸，饱和吸附量可达31．6
mg／g，解吸率达91．7％。结论通过大孔树脂分离纯化后，终产品中自藜芦醇的纯度可达31．28％，而上柱前粗提
物中自藜芦醇纯度为4．35％。说明采用本法分离纯化虎杖中白藜芦醇是可行的。
关键词：虎杖；自藜芦醇；大孔吸附树脂；分离纯化
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)02—0207—04
SeparationandpurificationofresveratrolfromPolygonumcuspidatum
bymacroporousadsorptionresi
XIANGHai—yan，ZHOUChun—shan+，DUShao—long
(CollegeofChemistryandChemicalEngineering，CertralSouthUniversity，Changsha410083，China)
Keywords：PolygonumcuspidatumSieb．etZucc．；resveratrol；macroporousadsorptionresi ；
isolationandpurification
虎杖系蓼科属多年生草本植物虎杖Polygonum
cuspidatumSieb．etZucc．的干燥根茎和根，收载于
《中华人民共和国药典))2000年版一部，具有祛风利
湿、散瘀定痛、止咳化痰的作用。主要含有蒽醌类和
芪类化合物，其中芪类成分白藜芦醇具有抗菌、抗
癌、抗炎、抗过敏、降血脂和抗氧化等多方面的药理
活性，是目前最有希望的抗癌剂之一[1~3]。
大孔吸附树脂具有吸附快、解吸快、吸附容量
大、易于再生、使用寿命长等优点，现已广泛应用于
天然产物的分离和富集。但虎杖中白藜芦醇的大孔
吸附树脂提取分离方面尚未见报道。有文献报道采
用有机溶剂萃取法纯化虎杖中自藜芦醇[4]，但该法
存在有机试剂和能量消耗大，对环境污染严重等问
题。本实验采用大孔树脂法取代传统的液一液萃取分
离提取工艺，取得了令人满意的效果。
1材料与方法
1．1仪器与试剂：BiotronikBT8100高效液相色谱
仪(德国)；DSY一1—2恒温水浴锅(北京东震科学
仪器厂)；冷冻干燥机(上海)；ZD一2型调速多用振
荡器(江苏)；玻璃色谱柱(280mm×20mm)；树脂
均购自南开大学化工厂；色谱分析用甲醇为色谱纯，
其余试剂为分析纯。白藜芦醇(纯度>98％)对照品
购自美国Sigma公司。虎杖药材购自湖南省九芝堂
药材公司，经鉴定符合《中华人民共和国药典>>2000
收稿日期：2004—06—04
基金项目：湖南省重点科技攻关项目(00NKYl010)
作者简介：向海艳(1974一)，女，土家族，中南大学博士研究生，主要从事天然产物活性成分的提取与分离研究。
*通讯作者Tel：(0731)8879672Fax：(0 31)8879672E—mail：xhaiyan329@21cn．eom
万方数据
·208· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
年版一部虎杖项下规定。
1．2树脂的预处理：将吸附树脂用无水乙醇浸泡
24h，倾倒掉上层乙醇，然后加入吸附柱中；待树脂
装好后，用乙醇2BV／h通过树脂层，至流出液加水
不呈白色浑浊为止，并用水以同样流速洗净乙醇；然
后用2BV0．5％HCl溶液以2．3mL／min通过树
脂层，并浸泡2～4h后用水以同样流速洗至流出液
pH值呈中性；最后用2BV2％NaOH溶液以2．3
mL／min通过树脂层，并浸泡2～4h后，用水以同
样流速洗至流出液pH呈中性。从预处理的树脂中
取少量样品于65℃下真空干燥24h备用。
1．3上柱液的制备：虎杖粗粉用80％乙醇于85℃
下浸提2h，滤出溶液，再加入提取剂提取1h，滤
过，合并两次提取液。减压浓缩，回收溶剂。即得。
1．4分析方法
1．4．1色谱条件：色谱柱：ODSC，。(200mm×4．6
mm，5肛m)；流动相：甲醇一水(41：49)；体积流量：
0．6mL／min；检测波长：303nm；柱温：室温。
1．4．2标准曲线的绘制：精密称取白藜芦醇2．5
mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得
0．10mg／mL白藜芦醇对照品储备液，备用。精密吸
取对照品储备液1．5、2．0、2．5、3．0、3．5mL，置25
mL量瓶中，甲醇稀释至刻度。依次取6pL进样，每
个浓度重复3次。按上述色谱条件测定，以y表示
峰面积积分值，以X(肛g)表示对照品进样量，绘制
标准曲线，并计算回归方程，其线性回归方程及相关
系数为：Y一3618260X一83481．6，，．=0．9998。
结果表明，白藜芦醇在0．036～0．360,ag与峰面积
呈良好的线性关系。
1．5树脂的筛选：测定8种树脂静态吸附量、吸附
率和解吸率，以筛选树脂。在带塞的锥形瓶中，加入
一定量预处理好的大孔吸附树脂和浸出液于室温下
振荡，每隔1h测定吸附前后自藜芦醇浓度的变化，
按下式计算各树脂的静态吸附容量和吸附率，然后
加入60％乙醇水溶液进行洗脱，测定脱附液中白藜
芦醇的含量，按下式计算脱附率。
吸附量(mg／g干树脂)一(co—c。)×VA／W
吸附率一(C。--C。)／co×100％
脱附率一cD×VD／[(C。-c。)×VA]×100％
式中c。为吸附液起始浓度，c。为吸附平衡浓度，n为吸附
液体积，Ⅳ为树脂质量，co为脱附液浓度，y。为脱附液体积
1．6静态吸附实验：吸附动力学曲线：取1g树脂
加入40mL0．80mg／mL白藜芦醇溶液，在不同时
刻取不量溶液分析自藜芦醇质量浓度，绘制吸附动
力学曲线。等温吸附曲线：取1g树脂加入40mL一
系列质量浓度的白藜芦醇溶液，进行吸附试验。测定
吸附前后的溶液中自藜芦醇质量浓度，计算树脂吸
附量，得等温吸附曲线。
1．7洗脱剂及洗脱条件的选择：对已经吸附样品的
树脂进行脱附试验，作出脱附曲线。考察脱附剂的种
类、浓度、流速等因素对树脂脱附性能的影响，确定
最佳的脱附工艺。
1．8产品的制备：将白藜芦醇洗脱液收集浓缩，去
除溶剂，并冷冻干燥，得到白藜芦醇初产品，采用高
效液相色谱法测定其含量，并按下式计算产品纯度。
纯度=W／W。×100％
式中Ⅳ为最终产物中自藜芦醇的量(g)；W。为最终产物的
总质量(g)
2结果与讨论
2．1树脂的筛选结果：在相同试验条件下，测得各
树脂的静态吸附及脱附结果见表1。
表1 8种树脂的物理结构参数及对自藜芦醇的吸附、脱附性能
TableConstructionparameterofeightresinsandtheiradsorptionandesorptionpropertiesonr veratrol
树脂型号 粒径／mm 比表i面gt／(m2·g-1)平均孔径_／nm外观 极性 吸附l／(mg·91)吸附率／％脱附率／％
s一8 0．3～1．25 100～120 28．o～30．0微黄色 极性 30．1 83．4 43．8
聚酰胺0 120～360 白色 极性 21．2 63．2 58．6
NKA一9 0．3--1．25 250～290 15．o～16．5乳白色 极性 27．0 57．9 46．1
NKA—1 0．3～1．25 160～200 14．5～15．5红棕色 极性 31．6 84．3 91．7
AB一8 0．3～1．25 480～520 13．0～14．0乳白色 弱极性 20．4 58．6 50．7
x一5 0．3～1．25 500～600 29．o～30．0乳白色 非极性 22．3 72．1 80．3
D一140 0．1～o．3 490～600 一 白色 非极性 12．7 60．5 83．4
D一101 0．2～o．6 400～600 10．O～12．0白色 非极性 10．6 64．1 79．2
树脂的吸附性能对白藜芦醇的纯化影响很大，
大孔吸附树脂的吸附原理主要是物理吸附，本质是
吸附剂与吸附质问的范德华力。树脂吸附性能的优
劣是由其化学和物理结构决定的，树脂的极性和空
间结构(主要指孔径、比表面积及孔容等)是影响吸
附性能的重要因素。一般来讲，极性稍强的树脂对极
性强的分子有较强的吸附作用；非极性树脂对非极
性分子的吸附作用较强；孑L径较大的树脂易于吸附
分子体积较大的物质；树脂的比表面积越大，其吸附
容量也越大。白藜芦醇分子带有3个酚羟基，具有多
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月‘209‘
酚的结构，显弱极性，可以作为一个良好的氢键供
体，有利于弱极性和极性树脂的吸附。相对来说，非
极性树脂对白藜芦醇的吸附偏小。另外，在某些情况
下，吸附作用力强，解吸起来就会困难，因此，生产上
希望树脂不仅吸附量大，还要求解吸率高，以保证有
效成分最大限度回收。由此可见，解吸率测定是树脂
实验的重要环境。如S一8、NKA一9树脂吸附量大，但
解吸率很低，树脂不易再生，不适用于分离；聚酰胺
树脂不易再生。综合考虑吸附与解吸性能，选用
NKA一Ⅱ树脂来分离纯化虎杖中白藜芦醇。
2．2 NKA一Ⅱ树脂静态吸附速率曲线：取1g树脂
加人40mL0．8mg／mL白藜芦醇溶液，在不同时刻
取少量溶液分析白藜芦醇浓度，绘制吸附动力学曲
线，见图1。可见，NKA一Ⅱ树脂在起始阶段吸附速率
较大，150min开始，吸附量增加缓慢。
，
bD
岛
宣
≮
豳】
莲
§
25
15
100 200 300
时间，／rain
图1 白藜芦醇静态吸附速率曲线
Fig．1Staticadsorptionratecurveofresveratrol
2．3 NKA一Ⅱ树脂吸附等温线：分别配制不同浓度
的白藜芦醇上柱液，称取一定量的NKA一Ⅱ树脂在
常温下作吸附等温线，见图2。可见，随着溶液中自
藜芦醇浓度的增加，树脂的吸附量首先增加很快，但
当浓度达800mg／L后，增长缓慢。
，
h
面
目
≮
Ⅲ脚
莲
督
0 200 400 600 800 l 000
平衡质量浓度／(mg．L。1)
图2 白藜芦醇等温吸附曲线
Fig．2IsothermaladsorptionCurveofresveratrol
2．4洗脱体系的确定：最常用的洗脱剂是水、甲醇、
乙醇、丙酮、醋酸乙酯以及它们的混合液等。实验表
明，采用甲醇一水、乙醇一水、丙酮体系对白藜芦醇均
有较好的洗脱效果。考虑到甲醇的毒性，丙酮的易挥
发性等因素，以及实际工作中的安全、成本等问题，
确定以乙醇一水体系作为洗脱剂。先以大量水洗脱除
去元机盐、蛋白质、多糖等杂质，再用不同体积分数
的乙醇一水进行洗脱。
2．5洗脱剂浓度对NKA一Ⅱ树脂动态脱附性能的
影响：将已吸附好样品的树脂用一系列不同体积分
数的乙醇一水进行洗脱，测洗脱液浓度，计算洗脱率。
结果见表2。可见，10％、30％乙醇洗脱率很低，并且
洗脱剂用量较大；50％乙醇洗脱，洗脱率不高；60％
～95％乙醇的洗脱率较高，且洗脱剂用量少，起到了
浓缩的效果。考虑到随着洗脱剂浓度的增加，洗脱液
洗下脂溶性杂质也会增多，故选择60％乙醇作为洗
脱剂。
表2洗脱剂浓度对动态脱附性能的影响
Table2 Effectsofeluentconcentration
ondynamicalelutionproperty
洗脱剂浓度／％ 10 30 50 60 80 95
床体积 10 9 6 4 4 3
洗脱率／％ 31．9 42．6 65．3 91．7 92．4 93．6
2．6 最佳脱附条件下的洗脱曲线：在常温下，用
60％乙醇作为脱附剂，以0．2mL／min的洗脱速率
对已吸附了样品的树脂进行洗脱，得到洗脱曲线，见
图3。
葫600
蜊400
避
咖】
匿200
盐
器 。
万方数据
·210· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
表3 NKA一Ⅱ树脂使用次数对吸附率的影响
Table3 EffectsofusagetimesofNKA一11resin
onitsadsorptionefficiency
使用次数 吸附率／％
84．3
83．8
83．2
83．0
75．3
72．1
61．4
3 结论
3．1 采用大孔吸附树脂分离提纯虎杖提取液中白
藜芦醇是可行的。NKA～Ⅱ树脂是良好的吸附树脂，
对白藜芦醇的吸附量可达31．6mg／g；4．5倍床体
积的60％乙醇可将吸附在树脂上的样品洗下，解吸
率达91．7％。
3．2吸附树脂用于虎杖中自藜芦醇的分离，省去了
传统溶剂萃取法的烦琐工艺，仅吸附一脱附一步工艺
即可得到高含量的白藜芦醇，并且收率高、成本低
(树脂可再生，溶媒用量少)、操作简便、可推广应用。
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苦芩粉针剂的冷冻干燥工艺研究
程建明，郭 萌+
(南京中医药大学，江苏南京210029)
摘要：目的研究苦芩粉针剂的冷冻干燥制备工艺。方法 以产品的外观、溶化时间、含水量为指标，对预冻方
法、冻干添加剂及其用量、升华温度、解析干燥时间等工艺参数进行优选。结果最佳工艺为采用快冻法，加入6％
羟丙基一p一环糊精(HP—pCD)，升华温度为25℃，解析干燥8h。结论该工艺稳定、可行。
关键词：苦芩粉针剂；冷冻干燥；制备工艺
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)02—0210—03
LyophilizingprocedureofKuqinPowderInjection
CHENGJian—ming，GUOMeng
(NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210029，China)
Keywords：KuqinPowderInjection；lyophilization；preparationpr cedure
苦芩冻干粉针是以苦参、黄芩为主药经提取、分
离、精制而制成的注射用冻干粉针，具有清热燥湿、
保肝降酶作用，临床用于治疗急慢性肝炎。苦芩冻干
粉针采用冷冻干燥法，因此本实验以产品的外观、溶
化时间、含水量为指标，对预冻方法、冻干添加剂及
其用量、升华温度、解析干燥时间等工艺参数进行优
选，并根据结果绘制了产品的冻干曲线图，为日后批
量生产提供了可靠的依据。
1仪器与试剂
美国Labconco公司77530—01型冷冻干燥机，
AET--40SM型十万分之一电子天平。乳糖、甘露
醇、葡萄糖(南京中医药大学植物药研究与新药开发
中心)，羟丙基一p环糊精(HP—pCD)江苏泰兴新鑫
辅料有限公司，批号：010805。
2方法与结果
2．1 冻干添加剂及其用量的选择：由于注射液浓度
偏低，如将注射液直接冷冻干燥，则不易成型，需添
加适宜的赋形剂[1]。根据粉针剂对赋形剂的要求，选
收稿日期：2004—04—04
作者简介；程建明(1966--)，男，江苏淮安人，硕士，助理研究员，主要从事中药制备工艺研究。
Tel：(025)86798393E—mail：min95666@sina．corn
*南京中医药大学中药专业97级实习生
万方数据
大孔吸附树脂法分离纯化虎杖中白藜芦醇的研究
作者： 向海艳， 周春山， 杜邵龙， XIANG Hai-yan， ZHOU Chun-shan， DU Shao-long
作者单位： 中南大学化学化工学院,湖南,长沙,410083
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(2)
被引用次数： 9次

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