全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1087·
25．05，r一0．9920，结果表明熊果酸在0．75～3．75
弘g与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2．5稳定性试验：精密吸取对照品溶液1pL，同上
法点样，展开，显色，扫描，每隔半小时进行测定，结
果表明本法在显色后2h内斑点面积值基本稳定。
2．6精密度试验
2．6．1同板精密度试验：精密吸取熊果酸对照品溶液
2肛L，在同一薄层板上点5个点，按标准曲线条件下依
次扫描测定，其面积积分值RSD=2．3％(规一5)。
2．6．2异板精密度试验：精密吸取对照品溶液2
弘L，分别点于5块不同的薄层板上，依法测定，其面
积积分值RSD一3．1％(卵一5)。
2．7重现性试验：精密称取相同量的枇杷叶粗粉5
份，按上述供试品溶液制备方法处理，得供试品溶
液。分别吸取上述溶液2,uL，对照品溶液1、3,uL，点
于同一硅胶GF。。。薄层板上，按上述薄层色谱条件展
开，显色，扫描计算，RSD一2．35％(咒一5)，表明方法
重现性良好。
2．8加样回收率试验：取枇杷叶粉末样品5份，每
份10g，分别精密加入熊果酸对照品2mg，按2．1
项方法制得供试品溶液，依法测定，计算回收率，结
果平均回收率为97．64％，RSD为2．16％(以一5)。
2．9样品测定：精密吸取供试品溶液2肛L，熊果酸
对照品溶液1、3FL分别交叉点于同一硅胶GF纵薄
层板上，展开，晾干，显色，扫描，测定积分值，用外标
两点法计算，结果见表1。熊果酸平均质量分数
0．504％，RSD为1．03％(咒一5)。
表1样品中熊果酸的测定结果
Table1 Determinationofurs lieacidinEriobotrya
leavesbyTLCscaning
样品批号 熊果酸／％ 样品批号 熊果酸／％
1 0．503 4 0．510
2 0．501 5 0．498
3 0．509
3讨论
3．1 多数文献报道，测定熊果酸的展开剂均为环己
烷一氯仿一醋酸乙酯系统，但试验时发现熊果酸的斑
点有一定拖尾，加入适量冰醋酸能明显改善拖尾，使
斑点圆整。 。
3．2本试验结果表明，枇杷叶中熊果酸的量较高。
实验所采用的枇杷叶采自云南红河州云阳县，考虑
到枇杷叶在全国分布较广，产地较多，不同产地与不
同采收期枇杷叶中定有差异。对此，笔者将以后做进
一步研究。
References：
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白藜芦醇及其糖苷在虎杖中的存在形式及测定
刘志杰，李晓峰，万谦宏
(天津大学药物科学与技术学院，天津300072)
白藜芦醇是虎杖中的主要有效成分。具有抗菌、
抗炎、抗氧化、调节血脂的作用，是一种极有前途的
抗癌新药[1矗]。白藜芦醇在自然条件下，以自由态和
糖苷两种形式存在。从化学结构上看，白藜芦醇及其
糖苷还存在顺式和反式两种异构体。有关白藜芦醇
的药理作用和中药中自藜芦醇的色谱分析方法的报
道很多[3“]，但对白藜芦醇及其糖苷的顺、反式两种
结构的药理作用和效价差别尚没有进行系统的比较
与研究。有关白藜芦醇顺、反异构体的互变以及确认
原药材中白藜芦醇及其糖苷的存在形式，未见研究
报道。因此建立一种可同时分离和检测白藜芦醇4
收稿日期：2004—10-12
种单体的分析方法，无论是对中药材的成分分析还
是对药品的质量控制都具有重要意义。本实验首先
研究了白藜芦醇在紫外光照射下的异构化反应，然
后建立了一种可同时检测4种单体的分析方法，最
后将此方法用于实际样品虎杖的分析。
1仪器与试剂
TJ一2000高效液相色谱仪(北京创新通恒科技
有限公司)；HP8543紫外分光光度计(惠普公司)；
ZF一1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；
反式白藜芦醇对照品、反式白藜芦醇糖苷对照品(天
津尖峰天然产物研究开发公司提供，质量分数分别
万方数据
·1088· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
为98．49％、98．32％)；虎杖饮片(购于天津市协和
药店，经天津大学药学院高文远教授鉴定)；水为重
蒸水；甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为实验室自制C，。
(150mmX4．6mm，8肛m)；流动相：甲醇一水(40：
60)；体积流量：1mL／min；检测波长：300nm；柱温：
室温；进样量：10ttL。色谱图见图1。
1一反式自藜芦醇糖苷2一顺式自藜芦醇糖苷
3一反式白藜芦醇4一顺式白藜芦醇
1一trans—piceid2-cis-piceid3-trans—resveratrol
4一cis—resveratrol
图1 白藜芦醇对照品(A)及虎杖样品(B)的
HPLC色谱图
Fig·1HPLCchromatogramoffourisomers
ofresveratrolreferencesubstance(A)
andP．cuspidatum(B)
2．2顺式异构体的制备：由于顺式白藜芦醇和顺式
白藜芦醇糖苷不稳定，无商品供应。顺式白藜芦醇和
顺式白藜芦醇糖苷对照品用配好的对应两种反式对
照品溶液在紫外光(365nm，136／lW／cm2)照射6h
而获得。紫外照射后，白藜芦醇以及白藜芦醇糖苷样
品的最大吸收波长，分别从308、310nm蓝移到
288、286nm。紫外吸收波谱的蓝移是反式结构向顺
式结构转变的典型特征，此最大吸收波长与顺式白
藜芦醇及其糖苷的文献报道值完全一致[5]。因此可
以证明紫外照射后，有对应顺式异构体生成。
2．3供试品溶液的制备：将虎杖饮片粉碎，过40目
筛。取药材粉末0．5g，精密称定，分别用50、30、30
mL甲醇超声提取3次，合并滤液，减压浓缩。置25
mL量瓶中，甲醇定容至刻度。
2．4对照品溶液的配制：分别精密称取一定量的反
式白藜芦醇、反式白藜芦醇糖苷对照龋0甲醇溶解，
配成母液，存于一4℃冰箱避光保存。
2．5线性关系的考察：将对照品溶液稀释释成5个
梯度，进样10弘L。以峰面积为纵坐标，进样量为横
坐标绘制标准曲线。白藜芦醇4种单体的线性回归
结果见表1。
表1 白藜芦醇4种单体的标准曲线如一5)
Table1 Calibrationcurveffourisomers
ofresveratrol(万一5)
2．6精密度试验：取同一供试品溶液，按上述色谱
条件连续进样5次，分别进样10pL，测得反式白藜
芦醇糖苷、顺式白藜芦醇糖苷、反式白藜芦醇和顺式
白藜芦醇的峰面积的RSD分别为0．52％、0．82％、
0．80％、1．02％(咒一5)。
2．7稳定性试验：取供试品溶液分别于0、2、4、6h
进样10肛L，测得样品中反式白藜芦醇糖苷与反式
自藜芦醇峰面积值的RSD分别为0．82％和0．93o／／
(，z一5)。
。
2．8重现性试验：精密称取虎仗样品5份，按上述
方法制成供试品溶液，分别进样10肛L，测得反式白
藜芦醇糖苷、反式白藜芦醇峰面积的RSD分别为
1．02％和1．32％(咒一5)。
2．9 回收率试验：在已知质量分数的样品溶液中，
精密加入白藜芦醇对照品(约为已知样品质量分数
的80oA、100％、120％)，按样品制备方法制得供试
品。再分别按上述色谱条件测定，计算回收率。结果
反式白藜芦醇糖苷与反式白藜芦醇的平均回收率分
别为98．46％和99．12％，RSD分别为0．89％和
1．98％(咒一5)。
2．10样品测定：将上述供试品溶液用微孑L滤膜
(o．45弘m)滤过，按上述色谱条件进样lo弘L分析，
根据标准曲线计算质量分数，结果反式白藜芦醇糖
苷和反式白藜芦醇质量分数分别为15．80、3．38
mg／g，RSD分别为1．12％、1．38％(咒一3)。顺式白
藜芦醇和顺式白藜芦醇糖苷未测出。色谱图见图1。
3讨论
(下转第1114页)
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
得到含不同多不饱和脂肪酸的各级鱼油产品，当蒸馏温度为 ‘93篡。：姜’l盘葚妻i，：≥：曼gA：器：。兰20燕
110|CVA上，蒸馏压力为20Pa以下时，经过3级串联分子蒸嚣荔：鼎文‘篇然5ⅫM“s‘13·AgmF。0d∞Ⅲ’
馏，得到高碳链不饱和脂肪酸质量分数为90．96％的鱼油产 [103KakuS，YunokiS，OhkuraK，et口1．Interactionsofdietary
品瞰3。应用分子蒸馏法提取a—LNA还有待进一步研究。 。fa。tdsLaTndB4p：蒜。oi。n。fba，ttyp娄：：。三芝裟詈芒1：”：群篡器掌
国内外的大量研究结果表明，。一LNA对心血管和癌症 ‘113翥8。shh。Y。i,。三菖：盎。dL：鬟翟匕譬舞墨8篆舞掌怒掣；
等一些重大疾病具有显著预防和治疗作用。然而对a—LNA [，2]；盏篇≮；晕：l：警拿磐，F：譬≈，1墅2jij未篓：。l。。：，。。
的分离纯化，传统或化字万藩应用玟木处小够厩熟)I匿以狄 aetivitiesaredecreasedintheretinaandtheircircadian
得高纯度的a—LNA，且收率也比较低，达不到工业化生产的 fr。hdy‘h。m。s。alphre。d—il芸嚣嚣。‘：蠹尝茹i：ne≯ediep。ine[aJl]?1篡乞；焉：
要求。SFE和分子蒸馏技术的研究和应用可解决上述的问 2000，130(12)：3059—3062．
题，并具有巨大的开发潜力和应用前景。
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BEL一7402humanhepatocarcinomacellJ1．JChinTumour
⋯⋯⋯⋯⋯’ ⋯+
(上接第1088页)
对反式白藜芦醇及其糖苷的紫外异构化进行了
考察。在异构化过程中，紫外照射波长以及照射时间
都是影响转化过程的主要因素。选择254、365nm
两个照射波长照射，结果发现，在365nm波长下异
构化速度较快。固定365nlil的照射波长考察照射
时间对转化过程的影响。当照射时间超过6h后，转
化率基本不随时间变化，这表明转化已达平衡。因此
本实验选择照射波长为365nm，照射时间为6h。
研究结果表明，白藜芦醇及其糖苷在虎仗样品
中是以反式结构存在的。在样品制备过程中如果不
注意避光保存，在色谱图中就会出现顺式白藜芦醇
和顺式白藜芦醇糖苷的峰，说明反式白藜芦醇及其
糖苷发生了异构化反应，所以反式白藜芦醇及其糖
苷应注意避光保存。
与以往测定白藜芦醇的方法相比，本实验实现
了顺、反式两种异构体的分离分析，从而能更有效、
准确地测定和控制样品中自藜芦醇及其糖苷的量。
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万方数据
白藜芦醇及其糖苷在虎杖中的存在形式及测定
作者： 刘志杰， 李晓峰， 万谦宏
作者单位： 天津大学药物科学与技术学院,天津,300072
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(7)
被引用次数： 3次

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条件[期刊论文]-贵州大学学报（自然科学版）2009,26(5)
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2.刘志杰.万谦宏 三种环糊精对白藜芦醇的增溶作用及紫外照射下稳定性的影响[期刊论文]-中国医药工业杂志
2010(9)
3.姜瑞清.黎继烈 白藜芦醇分离纯化及检测技术研究进展[期刊论文]-中药材 2007(3)


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