全 文 ：·874· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
樱桃花青素苷对佐剂性关节炎大鼠免疫功能和炎症因子的影响
何颖辉h3，周 静1，王跃生2’3，肖 诚1，仝 燕2，贾宏伟1，吕 诚1，李小明2，吕爱平1’铲
(1．中国中医研究院基础理论研究所，北京100700；2．中国中医研究院中药研究所，北京100700；
3．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330077)
摘 要：目的 观察樱桃花青素苷对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群、脾细胞增殖及血清IL一6和足爪PGE：水
平的影响。方法将60只SD雄性大鼠随机分为6组，即正常组、模型组、樱桃花青素苷高、中、低剂量(300、150、
75mg／kg)组及雷公藤多苷(8．75mg／kg)治疗组(简称雷公藤组)，除正常组外，用弗氏完全佐剂制备模型。流式
细胞术检测大鼠外周全血中CD3、CD4、CD8T细胞亚群和cD4／CD8值；光镜下观察踝关节组织形态学改变；
MTT法检测脾细胞增殖能力；放免法检测血清IL一6水平与足爪匀浆中PGE：水平。结果与正常组相比，模型组
外周全血中CD3、CD4T细胞下降(P<0．01)，樱桃花青素苷和雷公藤组外周全血中CD3、CD4T细胞升高。光镜
下组织形态观察表明花青素苷高剂量组和雷公藤组能减轻滑膜增生，减少炎性细胞浸润，减轻组织损伤。在ConA
刺激下模型组大鼠脾细胞增殖反应与正常组相比降低，樱桃花青素苷高剂量能使模型大鼠低下的脾细胞增殖反应
恢复至接近正常。模型组血清IL一6水平高于正常组，樱桃花青素苷各剂量组血清IL一6明显降低(P组足爪PGE：水平高于正常组(P<0．01)，樱桃花青素苷高剂量组和雷公藤组PGE：水平比模型组降低(P<
0．01)。结论樱桃花青素苷高剂量对佐剂性关节炎大鼠模型的T淋巴细胞亚群和免疫功能有调节作用，并能显著
降低炎症细胞因子II。一6和足爪PGE：水平，从而减轻模型大鼠的关节炎损伤。
关键词：樱桃；花青素苷；佐剂性关节炎；细胞因子
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)06—0874—05
Effectofanthocyaninsfromcherriesonimmunologicfunction
andcytokinesnadjuvantarthritisrat
HEYinghuil“，ZHOUJin91，WANGYue—shen92～，XIAOChen91，TONGYan2，
JIAHong—weil，LUChen91，LIXiao—min92，LUAi—pin91’3
(1．InstituteofBasicTheory，ChinaAcademyofTraditionalChineseMedicine，Beijing100700，China；2．Institute
ofChineseMeteriaMedica，ChinaAcademyofTraditionalChineseMedicine，Beijing100700，China；
3．NationalPh rmaceuticalEngineeringCentreforHerbalPreparations，Nanchang330077，China)
Abstract：ObjectiveToassessthepotentialimmunologicalactivityofanthocyaninsfromcherrieson
adjuvantar hritis(AA)ratsandobserveth ffectontheratioofT1ymphocytesubpopulationandsplenic
1ymphocyteandthlevelsofIL一6inserumandPGE2inpaws．MethodsSixtymaleSpraqueDauleyrats
wererandomlyal ocatedtOsixgroups，theywerenormalgroup，modelgroup，anthocyanins(300，150，75
mg／kg)一treatedgroups，andpolyglycosidesofTripterygiumwilfordii(TW)一treatedgroup．Arthritiswas
inducedbythecompleteFr und
7
Sadjuvant．TheTlymphocytesubpopulationofCD3，CD4，andCD8and
CD4／CD8valueinperipheralbloodwereassayedbyFACACaliburflowcytometer．Thesplenocyteprolif—
erationwasassessedbymeansofMTTAssays．IL一6levelsin erumandPGE2inpawsweredeterminedby
radioimmunoassay．Resu|tsThemorphologicalchangesinthehindlimbswereconductedunderalight
microscope．CD3andCD4Tcellswerefounddecreased(P<0．01)inmodelgroup，whileincreasedinan—
thocyanindTW—treatedgroupsinAAratsVSnormalgroup．Histologicalexaminationofsections
throughtheindlimbsrevealedthealleviationofsy ovialhyperplasia，inflammatoryreaction，andissue
damageinthejointafterthetreatmentwithanthocyaninsath ghdosagegroupandinTW—treatedgroup．
Theanthocyaninsath ghdosagecouldimprovethesplenoeyteproliferationinducedbyCon—Astimulation
tonormal．BothoftheIL一6andPGE2levelsinmodelgroupwerehigherthanthatinnormalgroup．IL一6
levelsin erumweredecreasedinanthocyaningroups(P收稿日期：2004—09一01
基金项目：科技部“863”计划创新药物和中药现代化重大专项资助(2002AA223231)
作者简介：何颖辉(1978一)，男，陕西省西安市人，现为江西中医学院2002级研究生，研究方向为痹证发病机制及有效药物研究。
Tel：(0791)7119615 E—mail：yiyin9402@163．com
*通讯作者 吕爱平Tel：(010)64067611Fax：(0 0)64013896E—mail：catcm@public．bta．net．ca
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·875·
0．01)atanthocyaninshighdo ageandp01yglycosidesfTW—treatedgroup．ConclusionTheantho—
cyaninscouldalleviatetheinflammatoryreactioninthejoint，themechanismm ghtbeviatheincreaseof
theCD3andCD4ofTcellsubpopulationinperipheralblood，theimprovementofthesplenocyteprolifera—
tionandthedecreaseoftheIL一61evelinserumandPGE2inpaw．Theresultssuggestthatheantho—
cyaninscouldbeoneofthepotentialcandidatesforthealleviationofarthritisofmodelrats．
Keywords：cherry；anthocyanins；adjuvantarthritis(AA)；cytokines
樱桃在我国具有悠久的药用历史，《滇南本革》
载：“治一切虚证，能大补元气，滋润皮肤。浸酒服之，
治左瘫右痪，四肢不仁，风湿腰腿疼痛。”现代药学著
作《中华本草》载：樱桃具有补脾益肾的功效，主治脾
虚泄泻、肾虚遗精、腰腿疼痛、四肢不仁、瘫痪。近年
来，对樱桃提取物以花青素类成分为主的有效部位
的药用价值研究也开始增多。花青素(anthocyani—
din)是一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，
属黄酮类化合物。花青素在自然状态下常与各种单
糖形成糖苷，称为花青素色苷(anthocyanin)，花青
素色苷一词是Marguart1835年首先提出来命名矢
车菊花朵中的蓝色提取物时提出来的，现作为同类
物质的总称。且研究已经发现，樱桃色素提取物具有
强烈的抗氧化活性和抗炎作用。从樱桃中提取的色
素物质具有比维生素E更强的抗氧化活性，与阿司
匹林相比具有更有效的抗炎活性[1]。目前对樱桃花
青素用于类风湿关节炎的研究较少，本实验研究了
樱桃提取物花青素苷对佐剂性关节炎大鼠免疫功能
和炎症相关细胞因子的影响。
1材料
1．1动物：清洁级SD雄性大鼠，体重(200±20)g。
购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
1．2主要试剂：弗氏完全佐剂(Sigma公司)；
CD3、CD4、CD8单克隆抗体：其中CD3由FITC标
记，CD4、CD8由PE标记(Caltag公司产品)；1640
培养液(Gibco公司)；MTT(Fluca公司)；ConA、
LPS(Sigma公司)；白细胞介素一6(IL一6)、前列腺
素E。(PGE。)放免试剂盒(北京北方生物技术研究
所)；雷公藤多苷片(批号2000303)：湖南株洲制药
三厂。
1．3樱桃花青素苷提取液：樱桃洗净，捣烂，用1L
含有0．1％HCl和0．5mol／L枸橼酸的甲醇萃取5
次，滤过，减压浓缩，浓缩液上XAD一7离子交换树
脂柱，先用纯水洗脱，再用含0．1％HCl甲醇洗脱，
留取甲醇洗脱液，真空干燥得花青素粗提物，HPLC
法(520、280nm处检测)分析结果表明花青素色苷
质量分数达到87％。
1．4主要仪器：酶标仪(MultiskanAscent
Finland)、FACSort型流式细胞仪(美国Becton—
Dickson公司)iWIZARDl470型全自动了计数仪
(芬兰)、CD。培养箱(Co一1，Tokiwa公司)、轮式石
蜡切片机(AO公司)、光学显微镜(Olympus)。
2方法
2．1 动物分组：SD大鼠60只，随机分为正常组、
模型组、樱桃花青素苷高、中、低剂量(300、150、75
mg／kg)组和雷公藤多苷组(8．75mg／kg)。
2．2佐剂性关节炎大鼠模型制备及给药：除正常组
外，其余各组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂
(含7．5mg／mL灭活结核杆菌)0．1mL致炎，用足
爪容量仪在注射前和注射12h后测量足爪的肿胀
值(mL)，以后每天观察，隔2天测量足爪肿胀1
次，动物处死前1天再测1次。各组均于造模后ig
给予相应药物，每天1次，给药28d。
2．3 大鼠外周全血T细胞亚群测定：大鼠乙醚麻
醉后眼球后取血，肝素抗凝，每个样本分2份，分别
加入5．5肛LCD3／CD4、CD3／CD8单克隆抗体，放
人4。C冰箱30min，加入红细胞分离液，每管3mL
混匀，1000r／min离心5min，以上操作重复2～3
遍，弃上清液，加入PBS缓冲液4～5mL混匀，
1000r／min，离心5min，以上操作重复2～3遍，弃
上清液，加入PBS恢复体积至1mL，用流式细胞仪
检测T细胞亚群数。
2．4 大鼠踝关节光镜观察：取大鼠的踝关节用
10％福尔马林固定，10％EDTA脱钙，酒精逐级脱
水，二甲苯透明，石蜡包埋，HE常规染色。光镜下观
察滑膜、软骨、骨的病理改变。
2．5 MTT法检测大鼠脾细胞增殖：无菌取脾，在3
mLPBS缓冲液中用眼科剪剪碎，混匀，用200目尼
龙网滤过，滤液加入淋巴细胞分离液，2000r／min
离心20min，取出淋巴细胞层，用1640培养液调整
细胞数为4×106／mL，加入96孔板，每孔200ffL，
然后每孔加入ConA(50ffg／mL)或LPS(25肛g／
mL)20,uL，空白孑L加培养液，于C0。培养箱内培养
72h后，贴壁吸取上清液100弘L弃之，然后加10
万方数据
·876· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
牡LMTT(5mg／mL)，振荡器上振荡1min，继续培
养4h后每孔加入120弘LDMSO终止反应，振荡
器上振荡1min，酶标仪570nm处读板。
2．6放免法检测血清IL一6：取大鼠血清，按照试剂
盒测定说明书操作。
2．7足爪匀浆中PGE。的放免检测：动物处死后取
下足爪，迅速放入液氮保存。用无水乙醇和生理盐水
(1：4)配成匀浆介质，将足爪从液氮中取出，称质
量，研碎，按300mg：1mL加入匀浆介质，4℃放置
2 h，3500r／min离心15rain，取上清液，置一20℃
保存，按照PGE。试剂盒说明书测定。
2．8统计学方法：数据均用z±S表示，采用单因素
方差分析(One—WAYANOVA)。
3 结果
3．1关节肿胀：见表1。模型组和用药组在造模后
24h内注射足爪均肿胀，到第5天时肿胀有所下
降，但用药组和模型组无统计学差异。第14天用药
组和模型组肿胀均有所下降，樱桃花青素苷高剂量
组和雷公藤组肿胀下降较模型组更为明显，有统计
学差异，樱桃花青素苷中、低剂量组与模型组比较差
异不显著。第20天时各组肿胀与前次肿胀无明显改
变，但发现模型组有4只对侧后爪踝关节有继发红
肿，2只仅有前爪指关节红肿；雷公藤组有2只前爪
有红肿，樱桃花青素苷高剂量组有3只前爪有红肿；
中剂量组有3只对侧踝关节有继发红肿，低剂量组
有2只对侧有继发红肿，并有3只前爪红肿。第28
天时，模型组平均关节肿胀加重，共有8只出现继发
关节肿胀；雷公藤和樱桃花青素苷高剂量组无新增
继发关节肿胀的大鼠，关节肿胀与20天时比较无明
显改变；中剂量组共有6只继发踝关节肿胀和(或)
前爪指关节肿胀；低剂量组共有5只继发踝关节肿
胀和(或)前爪指关节肿胀。
3．2 光镜下组织观察：正常组大鼠踝关节关节腔内
干净，滑膜组织无增生，关节软骨表面光滑，软骨基
质及软骨细胞无退行性变；模型大鼠踝关节中出现
滑膜呈乳头状突起增生，细胞排列不规则，滑膜细胞
可见有淋巴细胞、单核细胞及少数散在分布的中性
粒细胞浸润，滑膜组织中血管扩张充血，毛细血管增
生，可见血管翳形成；雷公藤治疗组大鼠滑膜轻度增
生，滑膜组织有少量剥脱，并有纤维化，有部分炎性
细胞浸润，有部分软骨轻微破坏；樱桃花青素苷高剂
量组大鼠滑膜增生不明显，滑膜组织中淋巴细胞浸
润明显减少，胶原纤维沉着局限于滑膜细胞下，成束
排列，结缔组织可见少量淋巴细胞和巨噬细胞分布，
毛细血管基本正常。中、低剂量组可见滑膜细胞增生
明显，呈柱状疏散排列，滑膜下结缔组织中可见淋巴
细胞、单核细胞浸润，并可见纤维母细胞和纤维细胞
增生以及胶原沉着。
3．3大鼠外周全血T细胞亚群测定：见表2。模型
组CD3、CD4T细胞比例降低，与正常组相比差异
表1樱桃花青素苷对佐剂性关节炎大鼠足爪肿胀的影响(；±s，月一10)
Table1 EffectofanthocyaninsfromcherriesonpawswellingofAArats(工±s，n一10)
与正常组比较：△△P△△P表2外周血T细胞亚群检测结果(i±s，n一10)
Table2 DeterminationofTcellsubpopulationinperipheralblood(工±s，厅一10)
与正常组比较：AP△P<0．05△△P 万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·877·
显著，用药组CD3、CD4T细胞较模型组升高，差异
显著(尸<0．05、0．01)。但用药各组CD3、CD4T细
胞与正常组相比，差异无显著性。结果表明，用药后
关节炎大鼠外周血中低下的CD3、cD4T细胞被升
高。用药各组CD8T细胞比例除雷公藤组外均高于
模型组，但差异不显著。从CD4／CD8值来看，各组
之间差异不显著，除樱桃花青素苷低剂量组外，各用
药组CD4／CD8值均有升高的趋势。
3．4脾细胞增殖结果：见表3。ConA刺激的模型组
大鼠脾细胞增殖反应较正常组低，且差异显著，樱桃
花青素苷高剂量组能恢复模型大鼠脾细胞增殖反应
并接近正常组，中、低剂量组和雷公藤组脾细胞增殖
表现出抑制状态。在LPS刺激下正常组、模型组和
樱桃花青素苷高剂量组之间脾细胞增殖反应没有出
现显著性差异。樱桃花青素苷中、低剂量组大鼠脾细
胞增殖率降低。
表3樱桃花青素苷对ConA和LPS诱导的佐剂性
关节炎大鼠脾细胞增殖的影响(；±s，n一5)
Table3 Effectsofanthocyaninsfromcherrieson
splenocyteproliferationinducedbyConA
andLPSinAArats(；+S，辟：：5)
剂量／
组别
(“g．kg一1)
脾细胞增殖率／％
ConA LPS
与正常组比较：oP与模型组比较：’P△P+P3．5 血清中IL一6和足爪匀浆中PGE。测定结果：
见表4。模型组血清IL一6高于正常组，用药组IL一6
水平显著下降(P较雷公藤组低，但差异不显著。模型组足爪匀浆中
PGE。水平高于正常组(P剂量组和雷公藤组比模型组低，差异显著(P<
0．01)，但雷公藤和高剂量组之间差异不显著。其他
用药组PGE。水平与模型组比较差异不显著。结果
表明樱桃花青素苷对佐剂性关节炎大鼠的两种炎症
因子IL一6和PGE。均有不同程度的抑制作用，且樱
桃花青素苷高剂量组较雷公藤组作用明显。
4讨论
佐剂性关节炎是广泛应用于类风湿性关节性
表4樱桃花青素苷对佐剂性关节炎大鼠血清中IL一6
和足爪组织中PGE：水平的影响(；±s)
Table4 Effectsofanthocyaninsfromcherries
onlevelsofIL一6inserumandPGE2
inpawtissue(x士s)
与正常组比较：oo尸△△P<0．01vsnormalgroup：’P<0．05。。P(RA)致病机制及抗炎药物疗效研究的常用模型。
佐剂性关节炎大鼠原发病变主要表现为致炎局部炎
症反应，可观察到明显的关节软骨破坏、纤维化，滑
膜不同程度的充血、水肿及大量炎性细胞浸润和肉
芽组织增生，存在典型的免疫性炎症模型，具有一定
的RA病理特征。实验表明樱桃花青素苷提取物有
很强的抗炎、抗氧化活性[13，黑莓花青素提取物对角
叉菜胶诱导的肺炎大鼠模型有多种保护作用[2]。本
实验结果表明樱桃花青素苷300mg／kg能减轻模
型大鼠滑膜组织的炎症反应及其引起的关节损伤。
模型大鼠外周血中CD4T细胞降低，CD8T
细胞和NK细胞升高[3“]，对ConA诱导的脾细胞
(主要是T细胞)增殖反应能力降低口]。本研究结果
与此相似。说明模型大鼠体内存在T细胞免疫功能
的异常。花青素苷和雷公藤多苷对模型大鼠外周血
T细胞的影响趋势相同。两者都能升高模型大鼠血
中降低的CD3和CD4T细胞，与模型组相比差异
显著。在ConA刺激的脾细胞增殖实验中模型组增
殖率明显低于正常组，差异显著，而只有樱桃花青素
苷高剂量组增殖率接近正常组。花青素对老化小鼠
(SAM)免疫和造血功能不全有调节作用，经花青
素治疗后SAM的T、B淋巴细胞功能均明显提高，
其骨髓造血干细胞增殖活性亦增强[6]。花青素也能
调节喂食甲醇或感染鼠逆转录病毒引起的体液免疫
和细胞免疫的细胞功能和(或)结构紊乱，对小鼠免
疫功能具有动态调节作用[7]，本实验发现樱桃花青
素苷高剂量对模型大鼠也有免疫调节作用。
雷公藤组、花青素苷中、低剂量组与模型组相
似，脾细胞增殖呈现抑制状态。雷公藤组的抑制作用
与报道相似[8]。花青素苷中、低剂量组的免疫抑制状
态提示这两种剂量对模型大鼠脾细胞增殖功能的影
万方数据
·878· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
响有限。尽管花青素苷中、低剂量与雷公藤多苷都对
ConA诱导的脾细胞增殖有抑制作用，但是从病理
和炎症因子来看，中、低剂量又未能缓解病理改变，
这似乎预示雷公藤多苷与樱桃花青素苷对模型大鼠
的免疫影响机制有所不同。樱桃花青素苷不同剂量
对ConA诱导的脾细胞增殖的影响以及这种影响
对病理改变的意义还需进一步研究。
IL一6和PGE。是诱导佐剂性关节炎模型病理改
变的主要细胞因子，与模型大鼠的足爪肿胀和病理
改变正相关口’1⋯。临床中使用抗PGE。疗法能够很好
地缓解RA症状，控制RA进展[11’”]。抗IL一6疗法
也被作为RA的有效治疗方法之一，尤其在RA急
性期，能降低c反应蛋白，缓解病情[13|。已经证明花
青素苷中的cyanidin3一O一8一D—glucoside(C3G)能
抑制酵母聚糖诱导的大鼠炎症，降低IL一6和足爪中
PGE。水平，樱桃花青素苷和雷公藤都能降低血清
IL一6水平，花青素苷高剂量和雷公藤还能降低足爪
中PGE。水平，对这两种炎症因子的抑制作用或许
是它们改善模型大鼠炎症反应的途径之一。
本实验结果表明樱桃花青素苷与雷公藤都能对
大鼠的关节炎症起到保护作用，这一作用可能是通
过调节模型大鼠异常的免疫功能，降低大鼠体内炎
症细胞因子水平而产生的，但樱桃花青素苷对模型
大鼠的免疫调节与雷公藤又有所不同，这可能与花
青素所具有的多种生理作用如调节毛细血管渗透
性、保持细胞完整性，且具有较强的抗氧化等功能有
关[is,J61。因此樱桃花青素苷对佐剂性关节炎大鼠的
作用或许是多途径的，其机制还需进一步研究。
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antiinflammatoryactivitiesfanthocyaninsandtheiraglycon．
⋯～‘⋯。。⋯’⋯。“。’
槲皮素一7，47一二硫酸酯二钠对重组人肌醇磷脂
3一激酶p11013催化亚基活性的影响
刘 文，梁念慈
(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，广东湛江524023)
摘 要：目的 观察槲皮素一7，4r_二硫酸酯二钠(SQDS)对重组人肌醇磷脂3一激酶(P13一K)pllOp催化亚基的直
接作用。方法通过基因工程技术的方法获得P13一KpllOp催化亚基，用Ptdlns(4，5)P：和7_32P]ATP与重组
收稿日期：2004—09—19
基金项目：广东省重点学科基金资助项目(9306)；广东医学院青年基金资助项目(xQ9901)
作者简介：刘文(1970一)，男，广东翁源人，生物化学副教授，医学硕士，研究方向为生化药理学。
Tel：(0759)2388582—4Fax：(0759)2284104E—mail：liuw422@yahoo．corn．cn
万方数据
樱桃花青素苷对佐剂性关节炎大鼠免疫功能和炎症因子的影
响
作者： 何颖辉， 周静， 王跃生， 肖诚， 仝燕， 贾宏伟， 吕诚， 李小明， 吕爱平， HE
Ying-hui， ZHOU Jing， WANG Yue-sheng， Xiao Cheng， TONG Yan， JIA Hong-wei，
LU Cheng， LI Xiao-ming， LU Ai-ping
作者单位： 何颖辉,吕爱平,HE Ying-hui,LU Ai-ping(中国中医研究院基础理论研究所,北京 100700;中
药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西 南昌 330077)， 周静,肖诚,贾宏伟,吕诚
,ZHOU Jing,Xiao Cheng,JIA Hong-wei,LU Cheng(中国中医研究院基础理论研究所,北京
100700)， 王跃生,WANG Yue-sheng(中国中医研究院中药研究所,北京 100700;中药固体制
剂制造技术国家工程研究中心,江西 南昌 330077)， 仝燕,李小明,TONG Yan,LI Xiao-
ming(中国中医研究院中药研究所,北京 100700)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(6)
被引用次数： 4次

参考文献(16条)
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3.伍树松.伍小松.伍应松 花青素应用于动物饮料初探[期刊论文]-饲料工业 2011(21)
4.伍树松.贺喜.伍小松.贺建华.侯德兴 花青素作为饲料添加剂的应用前景[期刊论文]-动物营养学报 2011(12)


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