全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·497·
金耳胞外多糖的结构分析
邓云霞，瞿伟菁+，曹群华，牛 伟，泮一峰，顾 媛，李 娟
(华东师范大学生命科学学院，上海200062)
金耳Tremellaaurantialba系银耳科中名贵药
食真菌，具有止咳化痰、补气养心、平肝益胃等功
效n’2]。金耳子实体多糖和菌丝体多糖的结构和药效
均有报道E3-10]，本实验对从发酵液中提取的胞外多
糖进行了分离纯化并对其结构作了初步研究。
1实验部分
1．1 仪器与药品：Biof一2050发酵罐(上海高机实
业总公司生产)；SYNDER—UF402型超滤装置
(SYNDER美国)；KA一1000型台式离心机(上海
安亭科学仪器厂)；玻璃色谱柱(1cm×50cm、
1．5cm×60era)；HL一2恒流泵(Jc海精科实业有
限公司制造)；TH一1000梯度混合仪(上海沪西仪
器厂)；BSA一100自动分部收集器(上海长宁科技
发展公司)；MD200—3电子分析天平；UV—VIS
8500紫外分光光度仪；Nicolet710FI—IR分光光
度计。
菌种：金耳Tremellaauramtialba菌株由中华
全国供销总社昆明食用菌研究所刘正南提供。
DEAE—SephadexA一25、SephadexG一200均为
Pharmacia公司产品，单糖标准品、高碘酸钠、
NaBH。、d一淀粉酶、纤维素酶等均为国产分析纯。
1．2金耳胞外多糖的制备：金耳在50L通气搅拌
反应器中发酵培养。发酵液滤过、离心除去菌丝体，
滤液加3％NaOH40℃水解4h。用2mol／LH。SO。
调节pH10～11过夜。取水解液用0．1肛m膜微滤。
滤液用相对分子质量5000膜截留，截留液用蒸馏水
洗数次至pH中性。浓缩加入4倍酒精沉淀，相继以
无水乙醇、乙醚洗涤数次，真空干燥得褐色粉末状金
耳胞外多糖粗品。
取适量金耳胞外粗多糖，进行DEAE—Sephadex
A-25凝胶柱柱色谱，0～2mol／LNaCl(梯度洗脱，
0．8mL／min，硫酸一蒽酮法检测，收集两个主要洗脱
峰，透析、冷冻干燥得纯化多糖。
1．3纯度鉴定：紫外图谱：取分离纯化后的多糖纯
品组分a、b适量分别配制成1mg／mL的溶液，在
200～400nm扫描。凝胶过滤法：分别取0．2mol／L
(组分a)和0．4mol／L(组分b)NaCl洗脱部分得到
的纯化多糖进行SephadexG一200柱色谱，0．05
mol／LNaCl洗脱，0．2mL／min，硫酸一蒽酮法检测。
1．4金耳胞外多糖组成分析：取金耳胞外纯化多糖
a组分、b组分各20mg，加入1mol／LH2S042mL
置安瓿中封管，90℃水解12h。用BaCo。中和硫
酸，抽滤，收集滤液，备用。硅胶板薄层色谱：展开剂
为正丁醇一醋酸乙酯一异丙醇一醋酸一水一吡啶(35：
100：60：35：30：30)。展层结束后，于通风橱中挥
干溶剂。苯胺一二苯胺显色剂喷雾，80℃放置10min
显色。
1．5 高碘酸氧化和Smith降解[1“：分别称取多糖
样品20mg，加一定量0．015mol／L高碘酸钠溶液，
于4。C下暗处放置，问或振摇。于4、24、48h⋯⋯间
隔时间取样稀释250倍后，使用紫外分光光度仪在
223nm处测定吸光度值，直至达一稳定值，计算高
碘酸钠的消耗量。另取5mL反应液，加乙二醇
1mL，10min后以0．01mol／L氢氧化钠滴定甲酸
的释放量。取经高碘酸钠氧化完全的多糖溶液
10mL，加2mL乙二醇，流水透析48h后，蒸馏水
透析过夜。加8mgNaBH。于暗处还原18～24h；用
0．1mol／LCH。COOH调节pH至5．0，蒸馏水透析
24h后冷冻干燥，得多糖醇。取多糖醇10mg，加
2mol／LH。S04封管水解6h，用BaCO。中和硫酸，
抽滤，收集滤液。薄层色谱鉴定水解产物，展开系统
为正丁醇一醋酸一水(4：1：5，上层)，硝酸银显色剂
显色。
1．6酶法分析
1．6．1 a一淀粉酶酶解：取0．5mL0．5％多糖溶液，
37℃预热20min后加入适当稀释的a一淀粉酶液
(用0．2mol／LpH6．9的磷酸盐缓冲液配制)，
37℃保温1．5h，加入3，5一二硝基水杨酸试剂1
mL，放入沸水中煮沸5min，冷却。稀释5倍后于
540nm测定吸光度值。
收稿日期：2004—06—28
*通讯作者Tel：(021)62232019E—mail：wjqu@bio．ecnu．edu．an
万方数据
·498· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
1．6．2纤维素酶酶解：方法同1．6：1，纤维素酶用
0．1mol／LpH4．8的柠檬酸缓冲液溶解。
1．7红外光谱分析：取金耳胞外多糖纯品，用溴化
钾压片法制样，4000～400cm_1扫描。
2结果
2．1 金耳胞外多糖分离结果：金耳胞外粗多糖，经
DEAE—SephadexA一25柱色谱分离得a、b两组分。
2．2纯度鉴定：多糖纯品组分a、b在200～400nm
区域扫描，在260和280nm无紫外吸收，表明组分
a、b不含蛋白质、多肽和核酸。经SephadexG一200
鉴定二者均为单一峰。
2．3 TLC分析：经薄层色谱可得a、b两个组分均
由半乳糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、岩藻糖
组成，但根据在相同点样量情况下其显色斑点大小
不同分析二者各单糖比例是不同的。
2．4糖苷键分析：多糖组分经高碘酸钠氧化，7d
可反应完全，高碘酸钠消耗达到稳定。计算平均每摩
尔己糖残基消耗高碘酸量及释放甲酸量，数据见表
1。根据高碘酸氧化原则Dz]，以1—2或1—4位键合
的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子
高碘酸，并且无甲酸释放。以1—3位键合的糖基不
被高碘酸氧化，以1—6位键合的糖基或非还原末端
基经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分
子甲酸。因而推知a、b两组分多糖可能含有1—6、
1—2或1—4糖苷键。
表1高碘酸氧化结果
Table1 Resultofperiodateoxidation
Smith降解结果表明，降解产物为赤藓醇、甘
油、葡萄糖、鼠李糖。由此证明分子中存在1—3、
1—4及l一6糖苷键或分枝末端基。
2．5 酶解实验结果：a一淀粉酶不能水解两组分，纤
维素酶水解有还原糖的生成，则进一步证明了两组
分分子中存在B一(1—4)糖苷键。
2．6 红外光谱分析：IR图谱显示：3200～3800
cin_1尖圆的峰是O—H和N—H的伸缩振动，3200～
2800cm_1的一组峰是糖类C—H的伸缩振动，
1400～1200cm叫的一些峰是C—H的变角振动，由
此可初步判断二者均为多糖类化合物，950～1250
cm_1之间的一组强峰是吡喃糖环的醚键和羟基的
吸收峰。836～853cm_1及875～900cml特征吸收
峰为a一端基和p端基差向异构的C—H变角振动；表
明二组分中a一糖苷键和肛糖苷键并存。
3讨论
综合上述分析结果，金耳胞外多糖组分a、均有
半乳糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、岩藻糖组
成，且分子中均在1—3、1—4及1—6糖苷键或分枝
末端基，a一糖苷键和p一糖苷键并存，两组分结构基本
相似。与李晓明等[1妇报道的(TaA由甘露糖和木糖
组成)完全不同，可能因提取方法不同所致。
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万方数据
金耳胞外多糖的结构分析
作者： 邓云霞， 瞿伟菁， 曹群华， 牛伟， 泮一峰， 顾媛， 李娟
作者单位： 华东师范大学,生命科学学院,上海,200062
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)
被引用次数： 3次

参考文献(13条)
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引证文献(3条)
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2.陈志强.金杨.王昌禄 多糖结构分析方法的研究[期刊论文]-饲料工业 2008(6)
3.汪虹 金耳药理活性及其多糖结构研究进展[期刊论文]-食用菌学报 2005(4)


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