全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
致[8]，故证明该化合物为蒲公英萜醇乙酸酯。
化合物Ⅱ：白色针晶(石油醚)，mp136．0～
137．0℃，Liebermann—Burchard反应呈阳性，10％
硫酸乙醇溶液显紫色。与口一谷甾醇对照品混合后熔
点不下降，Rf值在多种熔剂系统中与对照品一致，
故确定该化合物为p谷甾醇。
化合物Ⅲ：白色粉末(石油醚)，mp245．0～
246．0℃，Liebermann—Burchard反应呈阳性，10％
硫酸乙醇溶液显紫色。1H—NMR和13C—NMR与文献
报道一致o]，故证明该化合物为熊果酸。
化合物Ⅳ：浅黄色液体，三氯化铁一铁氰化钾反
应呈阳性，示有酚羟基存在。1H—NMR(CDCl。)d：
1．25(3H，T，J一7．1Hz，一CH。)，3．53(2H，s，
一CH2一CO一)，4．14(2H，q，J一7．1Hz，一CH2一O一)，
6．78(2H，d，J一8．5Hz，H一37，57)，7．15(2H，d，J一
8．5Hz，H一27，6)。13C—NMR(CDCl。)艿：14．2(一
CH3)，40．5(一CH2一CO一)，60．8(一CH2一O一)，115．4(C一
37，57)，126．4(C一17)， 30．5(C一27，67)，154．6(C一47)。
以上数据与文献报道一致[1州，故证明该化合物为
对一羟基苯醋酸乙酯。
化合物V：无色针晶(石油醚)，mp82．o～84．0
℃，三氯化铁一铁氰化钾反应呈阳性，示有酚羟基存
在；Gibb7s反应显示酚羟基对位有取代基的存在。
1H—NMR(CDCl。)艿：3．98(3H，s，一OCH3)，6．15(1H，
s，一OH)，7．04(1H，d，J一8．5Hz，H一5)，7．42(1H，
br．s，H一2)，7．44(1H，br．d，J一8．5Hz，H一6)，9．83
(1H，s，一CHO)。13C—NMR(CDCl3)艿：56．1(一OCH3)，
108．7(C一2)，114．3(C一5)，127．6(C一6)，129．9(C一
1)，147．1(C一4)，151．6(C一3)，190．9(一CHO)。以上
数据与文献报道一致[11|，故证明化合物为香草醛。
化合物Ⅵ：白色颗粒状结晶(甲醇一氯仿)，mp
294．0～296．0℃，Liebermann—Burchard反应呈阳
性，10％硫酸乙醇溶液显紫色，Molish反应呈阳性。
与胡萝卜苷对照品混合后熔点不下降，Rf值在多种
溶剂系统中与对照品一致，故确定该化合物为胡萝
卜苷。
致谢：NMR谱由本校测试中心测定。
References：
[1]ChP[S]．VolI．2000．
Ez]LinCC，LinCH，ChiuHF，eta1．Thepharmacologicaland
pathologicalstudiesonTaiwanfolkmedicine(Ⅳ)：Theef—
fectsofEchinopsgrijisii[J]．AmJChinMed，1990，18(3—
4)：113—120．
[3]LinCC，YenMH，ChiuHF，eta1．Thepharmacological
andpathologicalstudiesonTaiwanfolkmedicine(Ⅳ)：The
anti—inflamatoryeffectofEchinopsgrijisii[J]．AmJChin
Med，1992，20(2)：127—134．
[4]MarlesRJ，HudsonJB，GrahamEA，eta1．Structure—
activitystudiesofphotoactivatedantiviralandcytotoxic
tricvclicthiophenes[J]．PhotochemPhot biol，1992，56(4)：
479—487．
E5]MaresD，RomagnoliC，RossiR，eta1．Antifungalactivity
ofsome2，2’：5’，2’一terthiophenederivatives[J]．Mycoses，
1994，37(9—10)：377—383．
E6]SharmaA，GoelHC．Somenaturallyoccurringphytophoto—
toxinsfrommosquitocontrol[J]．IndianJExpB ol，1994，
32(10)：745—751．
[7]LuHC，WangSX，ZhuTR．Studiesonthechemical
constituentsofYuzhouLouluI-J]．ChinTraditHerbDrugs
(中草药)，1989，20(11)：2-5．
[8]LouHX，ZuoCX．Studiesonthechemicalomponentsof
Rhodiolahenryi(Diels)Fu[J]．JShenyangCollPharm(沈
阳药学院学报)，1990，7(2)：145—146．
[9]WuzJ．LipidchemicalconstituentsofSalviasochifoliaC．
Y．Wu[J]．ChinaJChiM terMed(中国中药杂志)，
2001，26(4)：264—265．
[10]KisielW，ZielinskaK．Sesquiterpenoidsandphenolicsfrom
Lactucaperennis口]．Fitoterapia，2000，71(1)：86—87．
[11]SongzZ，JiaZJ，ZhuQX．Studiesonthechemicalcompo—
nentsofBupleurumsibiricumVest(i)[J]．ChemJChin
Univ(高等学校化学学报)，1991，12(11)：1469—1472．
姬松茸多糖的分离纯化与理化性质研究
孙培龙1’2，魏红福2，杨开2，吴学谦3，何国庆¨
(1．浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江杭州 310029；2．浙江工业大学生物与环境工程
学院，浙江杭州 310032；3．浙江益圣菌物发展有限公司，浙江丽水323000)
姬松茸AgaricusblazeiMurill又叫巴西蘑菇，
是一种珍贵的药食兼用真菌Ⅲ，其子实体中含有多
种具有高抗肿瘤活性‘2~51和刺激T细胞作用嘲的多
糖。但热水浸提得到的是各种多糖组分的混合物，而
收稿日期：2005—04—24
基金项目：浙江省科技厅重大科技攻关项目(2003c12018)
作者筒介：孙培龙(1964一)，男，教授，浙江衢州人，浙江大学在职博士，主要研究方向为生物活性物质的分离与提取。
Tel：(0571)88320779E—mail：sunpl@zjut．edu．cn
*通讯作者何国庆Tel：(0571)86971166E—mail：gqhe@zjut．edu．ca
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月·191·
不同的多糖的生物活性是不同的，为了研究各种多
糖组分的性质，本研究采用分级醇沉、凝胶色谱等分
离方法从姬松茸子实体水提粗多糖中分离出多种均
一多糖组分，并对其中3个主要组分的理化性质进
行了研究，采用酸水解和光谱法初步研究了其中一
个组分的化学结构。
1材料与方法
1．1材料：姬松茸子实体由浙江省益圣菌物发展有
限公司提供。凝胶柱Sepharose6 fastflow
(2．6cmX60cm)，Superdex200prepgrade(2．6
cmX60cm)，Dextran标准品均为Pharmacia公司
产品；单糖对照品：鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、
半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸均为
Fluka产品，其余试剂均为国产分析纯。仪器设备：
高压液相色谱仪为Agilent1100型配示差检测器，
液相柱为日本Shodex多糖凝胶柱SB804HQ、SB
803HQ，单糖柱为ShodexsugarSP0810，旋光仪为
WZZ—T。投影式自动指示旋光仪，德国Bruker
Vector22傅里叶红外光谱仪，BrukerAM400超导
核磁共振仪。
1．2方法
1．2．1姬松茸多糖的提取：干燥的姬松茸子实体粉
碎后60目过筛，称取一定量的子实体粉末，按料水
比1：30在100℃下浸提3h，离心后上清液减压蒸
馏浓缩至原体积的1／5，然后加入3倍体积的95％
乙醇过夜，离心得到粗多糖[7]。
1．2．2粗多糖脱蛋白：将粗多糖样品溶解于一定量
的蒸馏水中，加入0．2倍体积的Sevag试剂(氯仿一正
丁醇一5：1)振荡均匀后置于分液漏斗中静置分层，
分液除去蛋白质后继续加入Sevag试剂，重复3次，
然后减压蒸馏去除残留的Sevag试剂，冻干备用。
1．2．3多糖分级醇沉：用分级醇沉对粗多糖进行初
步分离，将一定量的多糖样品溶解在蒸馏水中，加入
95％乙醇至质量体积分数为30％，4℃醇析12h，
15000r／rain离心，沉淀为粗多糖，然后依次向上清
液继续加入95％的乙醇至终质量分数分别为40％、
50％、60％、70％和80％，每次操作同前。
1．2．4多糖的凝胶色谱：分级醇沉得到的粗多糖采
用FPLC色谱系统分离，采用Sepharose6fastflow
(2．6cm×60cm)、Superdex200prepgrade(2．6
cm×60cm)等凝胶柱分离，示差检测器检测，蒸馏
水洗脱，体积流量2．0mL／min，示差检测器检测，
分部收集器按峰分部收集。
1．2．5多糖纯度分析：高效液相色谱法分析[8]。
1．2．6多糖组分理化性质分析：多糖组分旋光度测
定：多糖样品配成2．o％的水溶液，用WZZ—T。旋
光仪于室温(25。C)下测定。凝胶滤过法测定多糖相
对分子质量：Aglient1100高压液相色谱仪配SB
804HQ多糖液相柱测定多糖相对分子质量，流动
相为双重纯蒸水，体积流量0．8mL／min，示差检测
器检测，标准品为DextranT一10、T一20、T一40、T一70、
T一500和T一2000。
1．2．7多糖组分结构分析：采用凯氏定氮法[91测定
蛋白质。多糖组成分析：液相色谱法测定多糖组成，
多糖样品20mg，溶于20mL2．0mol／LH2S04，沸
水浴水解6h，经BaCO。中和，抽滤后进行HPLC分
析。Aglient1100液相色谱仪配SHODEXSP一0810
单糖分析柱分析，流动相为双重纯蒸水，体积流量
0．8mL／min，示差检测器检测。红外光谱分析：样品
用溴化钾压片，在BrukerVector22傅里叶红外光
谱仪上测定。核磁共振分析：样品溶解于D：O中，在
BrukerAM400超导核磁共振仪上测定。
2结果与讨论
2．1多糖分级醇沉：在本实验所采用的不同体积分
数的乙醇都有部分多糖沉淀下来。但当乙醇体积分
数低于20％时，没有多糖沉淀出来，当乙醇体积分
数为40％时，沉淀出多糖的量最大。经液相分析各
部分多糖沉淀可知，当乙醇体积分数低于40％或高
于50％时，子实体粗多糖能够被很好地分为两个部
分，30％和40％乙醇沉淀多糖差别很小，从相对分
子质量标准曲线可知，都属于相对分子质量较大的
部分(>50万)，因此可以将这两部分多糖沉淀合并
为一个部分；当乙醇体积分数从50％依次增加时，
各部分多糖沉淀有一些差别，相对分子质量逐渐减
小，但彼此之间不能明显分离开来，因此可以将这几
部分多糖合并为一部分，虽然50％乙醇的多糖沉淀
中有部分与40％乙醇相同，但量很低。
从以上实验结果可以看出，乙醇分级沉淀能够
很好地将粗多糖粗略分为两个部分，本实验将30％
和40％乙醇多糖沉淀合并为一部分，命名为粗多糖
I；将50％～80％乙醇多糖沉淀合并为一部分，命
名为粗多糖Ⅱ，然后用于凝胶色谱分离。
2．2 多糖组分的凝胶色谱：粗多糖I相对分子质量较
大，因此选用排阻较大的凝胶Sepharose6F．F．分
离，收集到2个洗脱峰，纯度检测表明两者都是均一多
糖组分，分别命名为ABM—I和ABM一Ⅱ，紫外检测发
现ABM—I有紫外吸收，估计存在一定量的结合蛋白，
而ABM一Ⅱ不存在结合蛋白。粗多糖Ⅱ相对分子质量
万方数据
·192· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
较小，选用排阻限较小的Superdex200prepgrade分
离，收集到3个洗脱峰，纯度分析表明都是均一多糖组
分，其中第一个洗脱峰物质命名为ABM一Ⅲ，其他2个
组分相对分子质量都小于5000，未作进一步研究，紫
外检测3个组分都没有紫外吸收。
2．3 多糖组分物理性质：ABM—I为白色固体，
ABM一Ⅱ和ABM—Ill为黄色固体，3者都易溶于水、甲
酸、氨水和稀盐溶液等，不溶于乙醇、乙醚和丙酮等有
机溶剂，部分理化性质见表1。
从表1中可以看出，3个组分的碘一碘化钾和咔
表1 ABM—I、ABM一Ⅱ和ABM—Ill的部分理化性质
Table1 PartialphysicochemicalpropertyofABM-I，ABM一Ⅱ·andABM—nl
”+”：阳性，。一”：阴性
“+”：positive，“一”：negative
唑一硫酸反应都为阴性，表明其中不含有淀粉和糖醛
酸；ABM—I有紫外吸收，说明它是一个糖蛋白组
分，蛋白量为1．5％，其相对分子质量超过了标准曲
线的上限(2．0×106)，现有条件不能准确测出其相
对分子质量。
2．4 ABM—I的结构分析
2．4．1组成分析：HPLC分析ABM—I的完全水解
产物可知，水解产物只含有葡萄糖，表明ABM—I是
一个单一多糖组分。
2．4．2 红外光谱解析：ABM—I的红外光谱在
3385．77cm叫处有一强且宽的吸收峰，系多糖上一
O—H形成的分子间、内氢键；2924．89cm_1附近的
肩峰为饱和C—H伸缩振动的信号，中等强度；
1643．83em-1为酰胺羰基特征吸收峰，弱，推测样
品中少量存在的蛋白质可能为糖结合蛋白；在
1300～1250cm叫和1240cm_1处无吸收峰，表明
无磷酸基和磺酸基取代；1154．07、1079．88、
l022．39cm．13个峰为吡喃糖环特征吸收峰，是其
糖苷键C—O—C的非对称振动峰，强；红外光谱在890
cm_1附近无吸收峰，而在850cm-1附近存在吸收峰
表明组成的单糖为a—D一吡喃葡萄糖，另外在875和
810cm_1无吸收峰，表明不含甘露吡喃糖、半乳吡喃
糖，这与完全酸水解产物分析结果一致；在770
cm_1附近为吡喃糖环C—O—C的对称振动峰。
2．4．3核磁共振谱解析：在ABM—I的1H—NMR谱
中，d5．33871处有异头碳C一1上质子的氢位移，表
明这些葡萄糖残基均为a型吡喃糖，这与红外光谱
分析一致。在13C—NMR谱中，艿100．278处化学位移
表明C一1发生取代；艿：77．747，73．773，71．639处化
学位移表明有未发生取代的C一2、C一3、C一4；艿78～
85内无化学位移，表明不存在发生取代的C一2、C一3、
C一4；艿69附近的化学位移表明有发生取代的C一6；
艿：60．987，62．928的化学位移表明还存在未取代的
C一6，因此可能还具有a分支结构，但是由于所测定
组分相对分子质量巨大，以及扫描时间不充分，在艿
78～85没有形成可见峰。
综合以上各项分析可知，ABM—I糖链的主链
结构应为a一(1—6)吡喃型D一葡聚糖，并含有少量结
合蛋白(1．5％)。本研究只对ABM—I的结构进行了
初步研究，要完全阐述其结构还要采用高碘酸氧化、
Smith降解和GCiMS联用等分析方法进一步研究，
ABM一Ⅱ和ABM一Ⅲ结构以及3个组分的药理作用
也有待进一步研究。
References：
E1-]ChenzY，LiQB，WuYM．Them dicalv ueofAgaHcus
blazeiMurillEJ3．EdibFungiChina(中国食用菌)，2001，
20(4)：4—6．
i-23ChenL，ShaoHJ，suYB．CoimmunizationofAgaricus
blazeiMurillextractwi hepatitisBviruscoreprotein
throughDNAvaccinee hancescellularandhumoralimmune
responsesEJ3．IntJImmumopharmacol，2004，4：403—409．
[3]LuX，GuWY，DingXL．Immunologicalcompetenceand
antitumoreffectofpolysaccharidesfromAgaricusblazei
Murillinvitro口]．PharmBiotechnol(药物生物技术)，
2002，9(6)：326—329．
[4]TakeshiT，YoshiyukiK，HiromichiO．Isolationofana ti—
tumorcompoundfromAgaricusblazeiMurillanditsmecha—
nismofactionEJ3．JNutr，2001，131(5)：1409—1413．
r5]YoshiyukiK，TadashiK，TakeshiT，eta1．Isolationofan
anti—angiogenicsubstancefromAgaricusblazeiMurill：Its
antitumorandantimetastaticactions[J]．CancerSci，2004，
95(9)：758—764．
1-63MizunoM，MorimotoM，MinatoK，eta1．Polysaccharides
fromAgaricusblazeistimulateymphocyteT—cellsubsetsin
micel-J3．BiosciBiotechnolBi chem，1998，62(3)：434．
[73YangK．Extraction，Purificationandstruc ureanalysisof
polysaccharidesfromAgaricusblazeiMurill[J]．Dissertation
ofMasterD greeofZhejiangUniversityofTechnology(浙江
工业大学硕士论文)[D]．Hangzhou：ZhejiangUniv rsityof
Technology，2003．
E8]AlsopPM．Determinationofthemolecularweightofclinical
dextranbygelpermeationchromatographyonTSKPWtype
eolums[J]．JChromatogr，1982，246：227．
[93HuangRB，DingCY，LingHY．TheExperimentalGuide
ofBiochemistry(生物化学实验教程)[M]．Beijing：The
WorldPublishingCorporation，1995．
万方数据
姬松茸多糖的分离纯化与理化性质研究
作者： 孙培龙， 魏红福， 杨开， 吴学谦， 何国庆
作者单位： 孙培龙(浙江大学生物系统工程与食品科学学院,浙江,杭州,310029;浙江工业大学生物与环
境工程学院,浙江,杭州,310032)， 魏红福,杨开(浙江工业大学生物与环境工程学院,浙江
,杭州,310032)， 吴学谦(浙江益圣菌物发展有限公司,浙江,丽水,323000)， 何国庆(浙江
大学生物系统工程与食品科学学院,浙江,杭州,310029)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(2)
被引用次数： 7次

参考文献(9条)
1.Chen Z Y;Li Q B;Wu Y M The medical value of Agaricus blazei Murill[期刊论文]-中国食用菌 2001(04)
2.Chen L;Shao H J;Su Y B Coimmunization of Agaricus blazei Murill extract with hepatitis B virus
core protein through DNA vaccine enhances cellular and humoral immune responses 2004
3.Lu L X;Gu W Y;Ding X L Immunological competence and antitumor effect of polysaccharides from
Agaricus blazei Murill in vitro[期刊论文]-药物生物技术 2002(06)
4.Takeshi T;Yoshiyuki K;Hiromichi O Isolation of an antitumor compound from Agaricus blazei Murill
and its mechanism of action 2001(05)
5.Yoshiyuki K;Tadashi K;Takeshi T Isolation of an anti-angiogenic substance from Agaricus blazei
Murill:Its antitumor and antimetastatic actions 2004(09)
6.Mizuno M;Morimoto M;Minato K Polysaccharides from Agaricus blazei stimulate lymphocyte T-cell
subsets in mice 1998(03)
7.Yang K Extraction,Purification and structure analysis of polysaccharides from Agaricus blazei
Murill 2003
8.Alsop P M Determination of the molecular weight of clinical dextran by gel permeation
chromatography on TSK PW type colums 1982
9.Huang R B;Ding C Y;Ling H Y 生物化学实验教程 1995

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1. 贾薇.张劲松.于慧娟.周昌艳.杨焱.白韵琴 姬松茸多糖的提取纯化[会议论文]-2001
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文]-武警医学2007,18(6)
3. 陈慧斌.彭彪.王梅英.CHEN Hui-bin.CHEN Shao-jun.WANG Mei-ying 姬松茸多糖的提取方法及其药理作用研究
进展[期刊论文]-宁德师专学报（自然科学版）2008,20(2)
4. 方建虎.顾顺明.周根华.秦海荣 姬松茸多糖的测定[期刊论文]-食品科学2004,25(7)
5. 唐小俊.张名位.池建伟.张雁.施英.何焕清.张瑞芬.Tang Xiaojun.Zhang Mingwei.Chi Jianwei.Zhang Yan.
Shi Ying.He Huanqing.Zhang Ruifen 姬松茸多糖的微波辅助提取与含量测定[期刊论文]-中国食品学报2006,6(1)
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食用菌2007,26(1)
9. 魏红福.孙培龙.杨开.张坚.徐双阳.WEI Hong-fu.SUN Pei-long.YANG Kai.ZHANG Jian.XU Shuang-yang 姬松茸
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10. 韩永萍.何江川.缪刚.HAN Yong-ping.HE Jiang-chuan.MIAO Gang 姬松茸子实体多糖的分子量分布研究[期刊
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引证文献(7条)
1.张林波.刘翠.吴红珍.李玉 姬松茸多糖的分离纯化及其初步鉴定[期刊论文]-中国现代中药 2009(5)
2.王晋.刘涛.高建萍.罗素琴.徐晓伟.刘乐乐 多叶棘豆中多糖的提取、鉴别及含量测定[期刊论文]-内蒙古医学院
学报 2007(6)
3.林永贤.于海峰.许鹏.董永胜.贾士儒 发菜多糖的提取及性质研究[期刊论文]-现代食品科技 2007(5)
4.胡梅.梁运祥 鸡腿蘑菌丝体水溶性多糖的提取与分离[期刊论文]-西北农林科技大学学报（自然科学版）
2008(4)
5.曾小龙.廖新梅 姬松茸多糖化学组分及其药理作用的研究进展[期刊论文]-中国食用菌 2007(1)
6.王悦.陈阿梅.李秉超 长白楤木根、茎、叶水溶性多糖的纯化及组成分析[期刊论文]-氨基酸和生物资源 2007(2)
7.樊小英.朱越雄.孙海一.曹广力 野生糙皮侧耳多糖的提取、分离纯化和组分分析[期刊论文]-氨基酸和生物资源
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