全 文 ：中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 679·
参考文献：
I-1-1BrownleeM．Biochemistryandmolecularcellbiologyf
diabeticcomplicationsI-J]．Nature，2001，414l 813-820．
123FernandezAM，KimJK，YakarS，eta1．Functional
inactivationoftheIGF一1andinsulinreceptorinskeletal
musclecausestype2 diabetes[J-1．GenesD∞ 2001，15：
1926—1934．
[3-1KimJK，ZismanA，FillmoreJJ，eta1．Glucosetoxicityand
thedevelopmentofdiabetesinmicewithmuscle—specific
inactivationofGLUT4[J]．JClinInvestt2001．108l153．
160．
[4]LeRoithDL，KimH，FernandezAM，eta1．Inactivationof
muscleinsulina dIGF一1receptorsandinsulinrespon—
sivenessD]．CurtOpinClinNutrMetabCare．2002，5：
371—375．
[5]喻嵘．成细华，胡伟，等．骨骼肌特异性胰岛素样生长
因子1及胰岛索双受体功能缺失鼠糖尿病及其相关炎症因子
的变化[J-1．中国组织工程研究与临床康复，2007，11(45)：
9075—9078．
[63喻蝾，陈大舜，邓奕辉，等．左归双降方对葡萄糖、胰岛
素、低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的干预作用
[J-1．中国中医药信息杂志，2005，12(1)：17—19．
[7]吴勇军，喻嵘，胡伟，等．滋阴益气活血解毒组方对
[83
[9]
[10-1
[11]
[12]
[133
MKR转基因2型糖尿病小鼠糖代谢的影响[J]．湖南中医药
大学学报．2007，27(2)：20—23．
FernandezAM，DupontJ，FarrarRP，群a／．Muscle—
specificinactivationoftheIGF—Ireceptorinducesompen．
satoryh perplssiainskeletalmuscle[J]．JClinInvest，
2002，109：347—355．
ToyoshimaY，GavrilovaO，Y karS，eta1．Leptinimproves
insulinresistanceandhyperglycemiainamousemodeloftype
2diabetes[J]．Endocrinology，2005，146(9)：4024—4035．
KimH，PennisiP．ZhaoH．eta1．MKRmiceareresistanto
themetabolicactionsof bothinsulina dadiponectin：
discordancebetweeninsulinresistancedadiponectin
responsiveness[J]．AmJPhysiolEndocrinolMetab，2006，
291(2)：298—305．
BhorVM，RaghuramN，SivakamisS．Oxidativedamage
andalteredantioxidantenzymeactivitiesinthemallintestine
ofstreptozotocin—induceddiabeticrats口]．JBiochonCd
Biol，2004，36：89—97．
喻蝾，陈大舜．左归丸加减方对实验性糖尿病大鼠降糖作
用的实验研究[J]．中国中医药科技，2000，7(3)：157—159．
喻嵘．陈大舜，梅志刚，等．左归双降方对葡萄糖、胰岛
索、低密度脂蛋白诱导损伤的血管内皮细胞ICAM—l、tPA，
PAI的影响[J]．中医药学刊，2005，23(1)；61—63．
大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌相关基因表达的影响
何太平1’2，莫丽儿3，CHENGeorge—gong‘，梁念慈1’3。
(1．广东医学院生物化学与分子生物学研究所，广东湛江524023；2．广东医学院检验学院，广东湛江524023，
3．广东天然药物研究与开发重点实验室，广东湛江524023l4．香港中文大学威尔斯亲王医院外科学系，香港中国)
摘要：目的探讨大黄素对人高转移卵巢癌抗肿瘤的可能作用机制。方法应用肿瘤基因芯片检测大黄素(40
ftmol／L)对人高转移卵巢癌H0·8910PM细胞中癌相关基因表达的影响。并且实时定量PCR和Westernblotting
进行验证。结果共筛选出表达差异基因69个，其中33个基因表达水平上调，36个基因表达水平下调，涉及细胞
凋亡、细胞周期、细胞生长与分化、细胞运动、信号转导、基因转录和细胞代谢等7大类相关基因。结论基因芯片结
果提示大黄素抗肿瘤作用可能与转化生长因子一8(TGF·p)信号转导通路密切相关。
关键词：大黄素l卵巢癌l基因芯片
中圈分类号：R282．71}R963文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1679—06
Effectofemodinoncancer—relatedgeneexpressionjnHO一8910PMcells
HETai—pin91”，MOLi—er3，CHENGeorge—gong‘，LIANGNian-ci
h3
(1．InstituteofBiochemistryandMolecularBiology，GuangdongMedicalC lege，Zhaniiang524023，ChinaI 2．College
ofLaboratoryMedicine，GuangdongMedicalCo lege，Zhanjiang524023，ChinaI3．GuangdongKeyLaboratory
forResearchandDevelopmentofNaturalDrugs，Zhanjiang524023，ChinaI4．DepartmentofSurgery，
PrinceofWalesHospital，TheChin seUniversityofHongKong，HongKongChina)
Abstract：ObjectiveToexplorethmechanismofantitumoreffectofemodinonhighlymetastatic
ovarianc rcinomaHO一8910PMceils．MethodsThecancer—relatedgenexpressionprofilesofHO一
8910PMcellswithandwithoutemodin-treatmentwereanalyzedusinggenechiptechnology．Tovalidate
thegenechipdata，somedifferentialexpressiongenes，includingBRCAl，GDFl5，andNRIDlwere
analyzedbyfluorescentqua itativereal—timePCRandWesternhlottingassay．ResultsSixty—nine
收稿日期：2008—02—17
基金项目：粤港科技合作项目(GHP／022／06)}广东省中医药局课题(1050047)I广东省科技计划项目(20078030702003)
作者简介：何太平(1970一)，男．湖南祁东人，副研究员．硕士生导师．从事中草药活性成分的生化药理学教学及科研工作，发表论文20
余篇，获省、市厅级科研课题共5项。Tel：(0759)2388634—5E—mial：taipinghe@163．corn
·通讯作者粱念慈Tell(0759)2388501E—mailtncliang@gdmc．edu．cn
万方数据
·1680· 中草莠ChineseTraditionalandHerbalDrugs宴1139卷第11期2008年11月
differentlyxpressedgeneswerescreenedout。ofwhichup—anddown—regulatedgeneswere33and36，
respectively．Thesegeneswerer latedtoapoptosis，cellcy le，cellgrowthandifferentiation，cell
motility，signaltra sduction，transcription，andmetabolism．ConclusionTheresultsndicatsthatthe
antitumoreffectofemodinonHO一8910PMcellsi involvedinTGF—betasignalingpathway．
Keywords：emodin；ovariancarcinoma；genechip
大黄素(3一甲基一1，6，8一三羟蒽醌)是从大黄、
虎杖和何首乌等中药中分离出的有效成分之一。研
究表明大黄素在体外对多种肿瘤细胞如食道癌细
胞‘¨、肺腺癌细胞‘z3和肝癌细胞‘33具有明显的抗肿
瘤作用。本课题组前期研究结果表明大黄素还能抑
制高转移卵巢癌细胞转移相关能力[4]，但大黄素抗
肿瘤的作用机制还不完全清楚。因此本实验应用肿
瘤基因芯片检测大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌
相关基因表达的影响，探讨大黄素抗肿瘤的可能作
用机制。
1材料
人肿瘤基因芯片(OHS一802)购自Super
Array公司，芯片上含有440个癌相关基因、3个空
白点和一系列看家基因的寡核苷酸探针。人高转移
卵巢癌H0—8910PM细胞购自上海细胞生物所，由
浙江省肿瘤研究所许沈华等Is]建立。超级小牛血清
购自杭州四季青公司；RPMI一1640培养基购自
Gibco公司；4X上样缓冲液(125mmol／LTris—
HCI，pH6．8，4％SDS，10％p巯基乙醇，20％甘
油，0．04％溴酚蓝)；GDFl5兔多克隆抗体购自
Abgent公司；NRIDl兔多克隆抗体购自Cell
Signaling公司；BRCAl兔多克隆抗体、pactin兔多
克隆抗体购自SantaCruz公司；辣根过氧化物酶标
记抗兔IgG购自北京中山公司。大黄素(质量分数
95％)购自Sigma公司，实验前用DMSO溶解，培
养基稀释，DMSO终体积分数为0．1％(实验证明
该体积分数DMSo对细胞无影响)。
2方法
2．1 用肿瘤基因芯片检测大黄素对HO一8910PM
细胞中基因表达的影响：按常规方法培养HO一
8910PM细胞，用0．1％DMSO和40ttmol／L大黄
素“3分别处理HO一8910PM细胞24h，用Trizol试
剂抽提总RNA，变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA纯
度及完整性。反转录酶合成eDNA，线性RNA扩增
试剂盒扩增，并用Biotin一16一dUTP标记，cRNA纯
化试剂盒纯化cRNA。将芯片装于杂交管中预杂交
2h，弃去预杂交液，加入含有标记的cRNA的样品
杂交液杂交过夜。洗膜后，加入封闭液孵育40min，
弃去封闭液，加入结合缓冲液孵育10min，再次洗
膜后，用化学发光底物孵育2min，用X胶片曝光。
运用GEArray表达分析配套软件分析芯片数据。每
一个点的灰度值跟芯片所有看家基因的平均灰度值
进行标准化处理，得出每一个点的标准值，再与对照
组相应点的标准值进行比较，以差异为两倍(即比
值≥2．0或≤o．5)的标准来确定差异表达基因。
2．2实时定量RT—PCR验证部分基因的表达：设
计引物，p-actin：正向引物5-CCTGTACGC—
CAACACAGTGC一37，反向引物57一ATACTCCT—
GCTTGCTGATCC一37；BRCAl：正向引物5’一
AGGTCCAAAGCGAGCAAGAG一37，反向引物57一
TGCCAAGGGTGAATGATGAA一37；FBN2：正向
引物5-ATCCAGTAGTCGCAATCTCGT一37；反
向引物5’一TTGGCATTACCTTACATTCATC一3’；
FOSL1：正向引物57一CACCCTCCCTAACTCCT—
TTCA一3’，反向引物57一TGCTGCTACTCTTGCG—
ATGA一3’；GDFl5：正向引物57一TGACTTGTT—
AGCCAAAGACTGCC一3’，反向引物5-GAACC—
TTGAGCCCATTCCACA一3’；NRlDl：正向引物
5-GGGCTTCTCCCAGTTTCCA一37，反向引物57一
AGACCATTTAGGGCCTCGTTAT一3’。取2．5pg
总RNA反转录形成cDNA，使用Rotor—Gene3000
Real—timePCR仪进行扩增。扩增条件为t3-actin：
95℃、5min；35个循环(95℃、10s；57℃、15S；
72℃、20S；85．5℃、5S)。BRCAl：95℃、5min；35
个循环(95℃、10S；59℃、15S；72℃、20S；
82．7℃、5s)。FBN2：95℃、5min；35个循环
(95℃、10S；60℃、15S；72℃、20S；84℃、5S)。
FOSLl：95℃、5min；35个循环(95℃、10S；
60℃、15S；72℃、20S；83℃、5s)。GDFl5：95℃、
5min；35个循环(95℃、10s；60℃、15S；72℃、
20S；85℃、5S)。NRlDl：95℃、5min；35个循环
(95℃、10Sf60℃、15S；72℃、20S；85℃、5S)。
72～99℃绘制溶解曲线，然后采用比较阈值法进
行定量分析。
2．3 Westernblotting分析：取对数生长期的HO一
8910PM细胞，稀释成1×106／mL，接种于50mm
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 681·
的培养皿中培养，每皿5mL。细胞贴壁后，分别用40omol／L的大黄素处理HO一8910PM细胞24h
0．1％DMSO和40弘mol／L的大黄素处理HO一后，芯片检测图片见图1。芯片数据分析结果显示大
8910PM细胞24h。收集并裂解细胞，冰浴20min 黄素对69个基因的表达有差异，其中表达下调≥2
后，于4℃，12000Xg离心15min。BCA法测定上倍基因有36个(表1)，表达上调≥2倍基因有33个
清液蛋白质的量。蛋白样品和4×上样缓冲液按 (表2)，并将差异表达基因按照生物学功能进行分类
3：1的比例混合，100℃水中煮沸5min使蛋白质 (表3)。
变性。SDS—PAGE电泳后电转移至PVDF膜上，5％
脱脂牛奶封闭后加入第1抗体于室温孵育2h，用
TBS缓冲液洗涤3次，每次10min，加入第2抗体于
室温孵育2h，再用TBS缓冲液洗涤3次，每次10
min，加入发光试剂(ECL)显色，以p-actin作内
参，用图像分析软件ScionImage进行吸光度积分
值分析。
2．4 统计方法：采用t检验，用软件SPSS11．0
处理。
3 结果 田1基因芯片检测结果
3．1大黄素对HO一8910PM细胞基因表达的影响： Fig·1Testingresultofgenechip
裹1大黄素处理组中下调基因(与对照组比较)
Table1 Down·-regulatedgenesin modin--treatedg oup(comparedwithcontrolgroup)
基因序列 基因名称 信号比
NM001354AIdo—ketoreductasefamily1．memberC2(AKRlC2)0．475
NM000038Adenomatosispolyposiscoli(APC 499
NM000465BRCAlassociatedRINGomain1(BARDl)0．467
NM000386Bleomyeinhydrolase(BLMH)0．404
NM004333V—rafmurinesarcomavir loncogenehomologB1(BRAF)0．20
NM007294Breastcancer1，early set(BRCAl)0．394
NM001753 Caveolin (CAVl)0．4 5
NM001238CyelinE1(CCNEl)0．340
NM013230CD24antigen(CD24)0．260
NM000611CD59antigenp18—20(CD59)0．232
NM004936Cyclin—dependentki aseinhibitor2B(CDKN2B)0．368
NM004859Clathrin，heavypolypeptide(CLTC) O．311
NM004374CytochromecoxidasesubunitVic(COX6C)0．356
NM001905 CTPsynthase(CTPS) ，0．200
NM001814CathepsinC CTSC) ．219
NM001920Decorin(DCN)0．155
NM一004398DEAD(Asp—Glu—Ala—Asp)boxpolype tide10(DDXl0)0．437
NM001949E2Ftranscriptionfact r3(E2F3)0 306
NM006712FASTk ase(FASTK)0．348
NM001999Fibrillin2(FBN2)0．315
NM002005Felinesarcoma ncogene(FES)0．220
NM005252V—losFBJmurineosteosarcomaviraIncogenehomolog(FOS)0．360
NM003468Frizzledhomolog5(FZD5)0． 61
NM003508Frizzledhomolog9 9 247
NM000820Growtharrest—specific6(GAS6)0．339
NM一000182Hydroxyacyl—CocnzymeAdehydrogenase，alphaubunit(HADHA)0．384
NM012484Hyaluronan—mediatedmotili yreceptor(HMMR)0．338
NM000599Insulin—likegrowthfactorbindingprotein5(IGFBPS)0．394
NM048825KIAAl026pro ein(KIAAl026)0．472
NM002266Karyopherinalpha (KPNA2) ．5 0
NM一033018PCTAIREproteink ase1(PCTKl 0 280
NM一002649Phosphoinositide一3一kinase，catalytic，gammapol petide(PIK3CG)0．389
NM002648Pim—loncogene(PIMl)．0．372
NM00561lRetinoblastoma—like2(RBL2)0．488
NM一005066Splicingfactorproline／glutaminerich(polypyrimidinet actbin gproteinassociated)(SFPQ)0．157
型坚；!!!!!!!!!!!!：竺!呈Eg !!!!!!!!!：：!!!!!!!12111111垒兰星垦!! !：!!!
万方数据
·1682· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
裹2大黄素处理组中上调基因(与对照组比较)
Table2 Up-regulatedgenesinemodin-treatedgroup(comparedwithcontrolgroup)
一———————————————————————————————————————————————————————————————————————：—=_■—一
基因序列 基因名称 佰号比
NM000927 ATP—bindingcassette。sub—familyB，member1(ABCBI) 2-37
NM001261
NM001806
NM001319
NM001554
NM182908
NM012181
NM005438
NM004864
NM006389
NM003897
NM000598
NM001571
NM002204
NM030662
NM004990
NM004148
NM021724
NM002607
NM003768
NM002734
NM004162
NM006908
NM006513
NM005067
NM004749
NM003254
NM003258
NM000546
NM003496
NM004223
NM003404
Cyclin—dependentki ase9(CDK9)
CCAAT／enhancerbindingprotein(C／EBP)。gamma(CEBPG)
Caseinkinase1．gamma2(CSNKlG2)
Cysteine—rich，angiogenicinducer，61(CYR61)
Dehydrogenase／reductase(SDRfamily)member2 DHRS2)
FK506bindingprotein8(FKBP8)
FoS—likeantigen1(FOSLl)
Growthdifferentiationfac or15(GDFl5)
Hypoxiaup—regulated1(HYOUl)
Immediatee rlyresponse3(IER3)
Insulin—likegrowthfactorbindingprotein3(IGFBP3)
Interferonregulatoryfactor3(IRF3)
Integrin．alpha3(ITGA3)
Mitogen—activatedproteink asekinase2(MAP2K2)
Methionine—tRNAsynthetase(MARS)
Ninjurin1(NINJl)
Nuclearreceptorsubfamily1，groupD，member1(NRlDl)
Piatelet．derivedgrowthfactoralphapolypeptide(PDGFA)
Phosphoproteinenrichedinastrocytes15(PEAl5)
Proteink ase。cAMP—dependent，regulatory，typeI．alpha(PRKARIA)
RAB5A，memberRASoncogenefamily(RAB5A)
Ras—relatedC3botulinumtoxinsuhstrate1(RACl)
Seryi．tRNAsynthetase(SARS)
Seyeninabsentiahomolog2(SIAH2)
Transforminggrowthfactorbetaregulator4(TBRG4)
Tissueinhibitorofmetalloproteinase1(TIMPl)
Thymidinekinase1．soluble(TKl)
Tumorproteinp53(TP53)
Transformation／transcriptiondomain—associatedprot in(TRRAP)
Ubiquitin—conjugatingenzymeE2L6(UBE2L6)
Tyrosine3-monooxygenase／tryptophan5-monooxygenaseactivationpr tein，betapolypeptide
(YWHAB)
2．94
3．67
2．10
2．Z5
18．97
3．29
3．52
8．86
2．24
2．86
2．14
2．72
Z．04
5．90
2．55
3．47
22．70
3．84
2．90
2．20
2．25
2．00
3．67
4．27
4．21
2．16
2．48
2．44
3．69
2．17
Z．39
型坚=!!!!!!垒!!：!皇!!!竖竺墨!竺!竺!!!型!!!!!!翌!!竺!!!圣垒里!!!一．一————————————-兰尘生一
裹3差异表达基因的生物学功能分类
Table3 Biologicalfunctionclassificationofdifferentialexpressiongenes
功能 上调基因 P棚基凼
IER3PEAl5SIVATP53 BRAFBRCAlFASK细胞拥亡 ， ， ， · ， l
细胞周期
细胞生长与分化
细胞运动
信号转导
基因转录
细胞代谢
其他
CDK9．PDGFA，TBRG4．TP53
CDK9．CYR61．FoSLl，GDFl5，IER3，IGFBP3．PDGFA，
TBRG4．T蹦P1．WNTl
CYR61．ITGA3．T蹦P1
CSNKIG2．FKBP8，PDGFA．PPKARIA，RABSA，RACl-
SIAH2，WNTl，ZAP70
CDK9。CEBPG，FOSLl．IRF3，NRlDl。PRKARIA，SIAH2，
TP53．TRRAP．DHRS2，TKI
DHRS2，TKI
ABCBI．CEBPG，HYOUl，MAP2K2，MARS，NINJl，SARS-
APC。BRCAI，CCNEI，CDKN2B，E2F3，FES，KPNA2．PCTKIt
RBL2
BRAF． OS，GAS6。IGFBP5，PIMl，FES，IGFBP5，PCTKl
DcN，FBN2，GAS6，APC．HMMR
PC．BRAF CD59，FZD5，FZD9．PIK3CG
B CAl．E2F3．FOS 砌lL2
CTP3。HADHA．KPNA2，AKRlC2
BRADl。BLMH．CAVl，CD24，CLTC．COX6c，CTSC．DDXl0，
出差异表达较明显5个基因(BRCAl、FBN2、
FOSLI、GDFl5和NRIDl)进行实时定量RT—PCR
验证。大黄素处理中BRCAl、FBN2、FOSLI、GDFl5
0．03)、(0．36士0．05)、(6．32士0．54)、(10．10士
0．47)、(32．90+0．68)倍(图2和3)，与芯片分析数
据(o．394、0．315、3．52、8．86、22．70)基本吻合。
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 683·
对照 大黄素
与对照组比较t—P
圈2 实时定量PCR验证大黄素对BRCAl、FBNAmRNA
表达的影响(；士，，拜=3)
Fig．2Verificationofem dineffectonexpression
ofBRCAlandFBN2mRNAbyReal-time
PCR(工士$，n=3)
与对照组比较，～P
圈3实时定■PCR验证大黄素对FoSLl、GDFl5
和NRIDlmRNA裹达的影响G士s，露=3)
Fig．3Verificationofem dineffectonexpression
ofFOSLl，GDFl5，andNRIDlmRNA
byReal-timePCRQ士$，n=3)
3．3 Westernblotting验证：选出BRCAI、GDFl5
和NRlDl3个基因用Westernblotting分析其蛋
白表达变化，结果证实大黄紊能升高GDFl5和
NRlDl蛋白表达，降低BRCAl蛋白表达(图4和
表4)。
圈4 Westernblotting验证大黄景对BRCAI、GDFI$
和NRIDl蛋白表达的影响
Fig．4Verificationofemodineffectonexpression
ofBRCAl，GDFl5，andNRlDlproteins
byWesternblotting
4讨论
基因芯片技术作为一种快速的基因分析平台，
可同时对大量基因的表达水平进行量化检测。本实
验用肿瘤相关基因芯片分析大黄素对人高转移卵巢
癌细胞中癌相关基因表达的影响，探讨其抗肿瘤的
作用机制，结果共筛选出表达差异基因69个，其中
36个基因表达水平下调，33个基因表达上调，并对
部分差异表达较明显的基因(如BRCAI、FBN2、
OSLl、GDFl5和NRlDl)用实时定量PCR和
Westernblotting进行验证，发现其表达与芯片检
测结果基本吻合，证明芯片结果可靠。
对表达差异基因按照生物学功能进行分类，大
黄素抗高转移卵巢癌细胞作用涉及细胞凋亡、细胞
裹4 BRCAl、CDFl5和NRIDl蛋白表达半定■结果
Table4 Semi-quantityalysisofexpressionofBRCAl，GDFl5，andNRIDIproteins
周期、细胞生长与分化、细胞运动、信号转导、基因转
录和细胞代谢等7大类相关基因的共同作用。研究
发现大黄素主要影响转化生长因子一p(TGF—p)信号
通路相关基因。早已公认TGF—口信号通路与肿瘤细
胞的侵袭转移能力密切相关。大黄素明显刺激
TGF—p家族的成员GDFl5(又称NAG一1)的表达。
大量文献研究表明GDFl5高表达能在体内外抑制
多种癌细胞的生长增殖、并促进肿瘤细胞凋亡[6’71I
在体外能减少肿瘤细胞一细胞外基质和肿瘤细胞一肿
瘤细胞之间的黏附能力[8]。本研究还发现大黄素能
明显上调TGF—B调节蛋白4(TBRG4)的表达，下
调TGF—p受体3(TGFBR3)的表达，这两个基因也
与抑癌作用密切相关[口J引。另外，大黄素影响TGF—
p信号通路相关基因与以往研究大黄素抑制肿瘤细
胞侵袭转移能力的实验结果[‘]相吻合，但其具体作
用靶点有待更深入研究。
他
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驰
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∞^姆丑强匿麓师v}繁艘僻智霉
万方数据
·1684· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
参考文献：
[1]陈玉英，杨洁，胡庆沈，等．大黄素增强砷剂对食道癌细
胞的促凋亡作用[J]．上海交通大学学报：医学版，2006，26
(11)：1227—1233．
[2]李家宁，吕福祯，肖金玲．大黄素对人肺腺癌细胞Anip973
增殖周期及凋亡基因的影响[J]．中国中西医结合杂志，
2006，26(11)：1015—1017．
[3]刘剑波．高学岗，连涛，等．大黄索在体外诱导人肝癌细
胞HepG2发生凋亡的初步研究口]．癌症，2003，22(12)t
1280一1283．
[4]朱峰．刘新光．粱念慈．大黄素、芹菜素抑制人卵巢癌细胞
侵袭的体外实验研究[J]．癌症，2003，22(4)：358—362．
[5]XusH，QJanLJ，MORHZ．甜a1．Establishmentofa
highlymetastatichumanovariancancercell ine(HO一
8910PM)anditscharacterization[J]．JExpClinCancer
Res，1999，18(2)：233—239．
[6]BackSJ，KimKS，NixonJ B，eta1．Cyclooxygenase
inhibitorsregulatethexpressionofaTGF—betasuperfamily
memberthathasproapoptoticandantitumorigenicactivities
[J]．MolP^口rm“o／，2001。59(4)：901—908．
LimJH，ParkJW。MinDS，eta1．NAG一1up—regulation
mediatedbyEGR一1andp53iscriticalforquercetin—induced
apoptosisinHCTIl6coloncarcinomacells[J]．Apoptosis。
2007，12(2)：41l一421．
。
LiuT．BauskinAR，ZaundersJ，eta1．Macrophage
inhibitorycytokine1 reducesc lladhesionandinduces
apoptosisinprostatecancerells[J]．Cancerms，2003，63
(16)：5034—5040．
TurleyRS。FingerEC．HempelN，甜ad．ThetypeII
transforminggrowthfactor—betar ceptorasanoveltumor
suppressorgeneinprostatecancer[J]．CancerRes，2007-67
(3)：1090—1098．
DongM，HowT．KirkbrideKC。eta1．ThetypeII TGF—
betareceptorsuppressesbr astcancerprogression口]．t，
CZinInvest．2007．117(1)：206—217．
当归多糖对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究
杨 慧，吴 宏
(重庆医科大学干细胞与组织工程研究室，组织胚胎学教研室，重庆400016)
摘 要：目的探讨当归多糖(APS)是否具有恢复脐血造血细胞冷冻损伤的作用及与造血生长因子(HGFs)联
合促进冷冻复苏后脐血单个核细胞(MNC)体外扩增的效应。方法将冷冻30d的脐血MNC复苏后，立即在常
规培养体系中分别加入APS0、50、100、200、400pg／mL，或同时加入HGFs组合，培养24h或1d，采用MNC计
数，台盼蓝拒染实验、MTT法、CFU—Mix集落形成实验以及流式细胞术计数CD34+细胞等方法分别观察APS促
进冷冻损伤的脐血造血细胞恢复的能力以及APS联合HGFs对脐血造血细胞的扩增能力。结果冷冻复苏后加
入一定质量浓度的APS可使脐血MNC数量与台盼蓝拒染率明显增加，造血细胞的增殖能力显著提高，CFU—Mix
集落产率明显提高(P<0．05)。且能明显提高冻存脐血MNC中CD34+细胞率(P
冻损伤的恢复；与HGFs联合可促进冷冻复苏后的脐血MNC体外扩增。
关键词：当归多糖(APS)；脐血；造血细胞I冷冻保存
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1684—05
EffectofAPSonrecoverableabilityfromcryopreserVationdamage
OfUCBhematopoieticcells
YANGHUi．WUHong
(LaboratoryofStemCellandTissueEngineering．DepartmentofHistologyandEmbryology，
ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheffectofangelicapolysaccharides(APS)onrecoverableabi ity
fromcryopreservationdamageofumbilicalcordblood(UCB)hematopoieticcellsandAPSwith
hematopoieticgrowthfactors(HGFs)oninvitroexpansionofUCBmononuclearells(MNC)after
thawing．MethodsT‘ awedUCBMNCwerecultured24hor14dwithvariousconcentrationofAPS(O，
50，100，200，and400pg／mL)orwithAPSandHGFs．TheMNCcountingassay，typanblueexclusion
assay．colorimetricMTTassayforcellproliferation，CFU—Mixcolong—formingassay，andflowcytometry
forCD34+cellrateweredetected．ResultsAfteraddingcertainco centrationAPSinthawedUCBcells，
收稿日期：2008—01—08
作者简介：吴 宏(1963一)，女，浙江义乌人。硕士，教授，主要研究方向为干细胞生物学以及中药有效成分对血细胞发生及调控的影响·
发表相关论文20余篇，研究成果获重庆市人民政府自然科学三等奖和中国中西医结合学会科学技术三等奖．
Tel：(023)68485050E—mail：wuhon96368@126．com
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万方数据
大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌相关基因表达的影响
作者： 何太平， 莫丽儿， CHEN George-gong， 梁念慈， HE Tai-ping， MO Li-er， CHEN
George-gong， LIANG Nian-ci
作者单位： 何太平,HE Tai-ping(广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东,湛江,524023;广东医
学院检验学院,广东,湛江,524023)， 莫丽儿,MO Li-er(广东天然药物研究与开发重点实验
室,广东,湛江,524023)， CHEN George-gong,CHEN George-gong(香港中文大学威尔斯亲王
医院外科学系,香港中国)， 梁念慈,LIANG Nian-ci(广东医学院生物化学与分子生物学研究
所,广东,湛江,524023;广东天然药物研究与开发重点实验室,广东,湛江,524023)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
被引用次数： 3次
参考文献(10条)
1.陈玉英.杨洁.胡庆沈 大黄素增强砷剂对食道癌细胞的促凋亡作用[期刊论文]-上海交通大学学报(医学版)
2006(11)
2.李家宁.吕福祯.肖金玲 大黄素对人肺腺癌细胞Anip 973增殖周期及凋亡基因的影响[期刊论文]-中国中西医结合
杂志 2006(11)
3.刘剑波.高学岗.连涛 大黄索在体外诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡的初步研究[期刊论文]-癌症 2003(12)
4.朱峰.刘新光.梁念慈 大黄素、芹菜素抑制人卵巢癌细胞侵袭的体外实验研究[期刊论文]-癌症 2003(04)
5.XuSH.Qian L J.Mou H Z Establishment of a highly metastatic human ovarian cancer cell line
(HO8910PM) and its characterization 1999(02)
6.Back S].Kim K S.Nixon J B Cyclooxygenase inhibitors regulate the expression of a TGF-beta
superfamily member that has proapoptotic and antitumorigenic activities[外文期刊] 2001(04)
7.Lira J H.Park J W.Min D S NAG-1 up-regulation mediated by EGR-1 and p53 is critical for quercetin-
induced apoptosis in HCT116 colon carcinoma cells 2007(02)
8.Liu T.Bauskin A R.Zaunders J Macrophage inhibitory cytokine 1 reduces cell adhesion and induces
apoptosis in prostate cancer ceils[外文期刊] 2003(16)
9.Turley R S.Finger E C.Hempel N The type Ⅲ transforming growth[actor-beta receptor as a novel
tumor suppressor gene in prostate cancer[外文期刊] 2007(03)
10.Dong M.How T.Kirkbride K C The type Ⅲ TGFbeta receptor suppresses breast cancer progression[外文
期刊] 2007(01)
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1. 田宏伟.王芳.马云涛.郭天康.马建勋.王晓鹏.苏河 大黄素诱导人胃癌细胞MKN45凋亡及其分子机制的研究[期刊
论文]-中华普通外科杂志2011,26(5)
2. 黄以群.林珍辉.许正锯 大黄对实验性肝坏死中肿瘤坏死因子、白细胞介素-6及一氧化氮的影响[期刊论文]-现
代医药卫生2004,20(7)
3. 田晓环.王睿.艾华 大黄(庶虫)丸诱导肿瘤细胞凋亡的形态学研究[期刊论文]-吉林中医药2011,31(3)
4. 张大创.陈艳芬 历代医家痰病观之浅析[期刊论文]-中医研究2003,16(5)
5. 洪阁.沈秀.刘培勋.周则卫.徐文清.李松年 用表达谱芯片研究施普睿达抗肿瘤作用机制[会议论文]-2006
6. 刘婷婷.刘远新.LIU Ting-ting.LIU Yuan-xin 从温胆汤看历代医家对痰病的论治及发挥[期刊论文]-新疆中医
药2009,27(2)
7. 崔可密.蒋继强.魏新梅.王世军.Cui Kemi.Jiang Jiqiang.Wei Xinmei.Wang Shijun 中医药与肿瘤基因表达[期
刊论文]-山东生物医学工程2001,20(1)
8. 柯锋.方林彬.何太平.KE Feng.FANG Linbin.HE Taiping 不同年龄急性心肌梗死47例溶栓疗效观察[期刊论文]-
职业与健康2006,22(1)
9. 苟海昕.詹红生.赵咏芳.王翔.曹月龙.徐宇.石印玉.张若镜.GOU Haixin.ZHAN Hongsheng.ZHAO Yongfang.WANG
Xiang.CAO Yuelong.XU Yu.SHI Yingyu.ZHANG Ruojing 补肾中药对自然衰老雄性大鼠骨髓微环境中Smad1基因表达
的影响[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志2007,15(2)
10. 彭尧.徐在品.高俊波.王清宇.赵伟.王定坤.邓小燕.PENG Yao.XU Zai-pin.GAO Jun-bo.WANG Qing-yu.ZHAO
Wei.WANG Ding-kun.DENG Xiao-yan 紫苏与大黄注射液配伍后的稳定性考察[期刊论文]-时珍国医国药2010,21(10)
引证文献(3条)
1.王春光.刘北忠.金丹婷.王翀.朱丹.吴燕.钟梁 大黄素对裸鼠体内K562细胞移植瘤的抑制作用及其与调控
Caspase-3和Caspase-9表达的关系[期刊论文]-中草药 2010(5)
2.潘虹.张春.周丽 大黄素对人结肠癌Lovo细胞增殖周期影响的实验研究[期刊论文]-齐齐哈尔医学院学报
2012(10)
3.刘岸.邓姿峰.胡金喜.韩邵伟.黄莉莉.柯品妤.林胜璋 大黄素对人胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响[期刊论文
]-中草药 2011(4)
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