全 文 ：·866· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
药理与临床
奇任醇的抗炎免疫实验研究
信红岭1，毕娟1，刘淼1
(1．北京大学基础医学院中西医结合研究室，北京 100083；
，林文翰2，钱瑞琴p
2．北京大学药学院国家重点实验室，北京 100083)
摘 要：目的 研究奇任醇的抗炎作用及对免疫系统的影响。方法 建立大鼠佐剂性关节炎模型，观察奇任醇对大
鼠足肿胀、脾淋巴细胞增殖、T淋巴细胞亚群的影响；观察奇任醇对小鼠耳廓肿胀、大鼠肉芽肿的抗炎作用；通过碳
粒廓清、小鼠迟发型变态反应和血清溶血素水平实验，评价奇任醇对小鼠非特异性和特异性免疫功能的影响。结果
奇任醇能够抑制佐剂性关节炎大鼠的足肿胀，增强佐剂性关节炎大鼠脾淋巴细胞增殖能力，调节T淋巴细胞亚群
比例；抑制小鼠耳廓肿胀和大鼠肉芽肿增生；抑制正常小鼠特异性免疫功能。结论奇任醇可抑制佐剂性关节炎大
鼠的原发性与继发性足肿胀，抑制急、慢性炎症反应，调节机体免疫功能。
关键词：奇任醇；佐剂性关节炎；抗炎；免疫调节
中图分类号：R285．51 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)06—0866—05
Experimentalstudyonanti-inflammatoryndimmuno—regulatingeffectofkirenol
XINHong—lin91，BIJuanl，LIUMia01，LINWen—han2，QIANRui—qinl
(1．DepartmentofIntegratedTraditionalChinesewithWesternMedicine，SchoolofBasicMedicalSciences，
PekingUniversity，Beijing100083，China；2．StateKeyLaboratory，SchoolofPharmaceuticalScience，
PekingUniversity，Beijing100083，China)
Abstract：ObjectiveTos udytheanti—inflammatoryandimmuno～regulatingeffectofkiren01．
MethodsAdiuvantarthritisratmodelwasmadebymeansofFreund
7
Scompleteadjuvant，thenthe
changesofpawswelling，proliferationofspleniclymphocyteandTlymphocytesubpopulationr ioofad—
juvantar hritisratswereobserved．Theanti—inflammatoryeffectofkirenolwasevaluatedusingearedema
modelinducedbyxyleneandgranulomam delinducedbycottonballs。andfurthertheffectofkirenolon
specificandnon—specificimmuneresponsewasvaluatedbydelayedhypersensitivityofmurineauricle
swellingandserumhemolysin1eveltestandcarbonclearanceratinmice．ResultsKirenolcaninhibit
pawswelling，boostuptheproliferationofspleniclymphocyteofadjuvantarthritisrats，regulateT ym—
phocytesubpopulationr io，andalsocaninhibitearedemainmice，granulomaweightinr ts，andspecific
immuneresponseofnormalmice．ConclusionKirenolcancontroltheprimaryndsecondaryp wswelling
ofadiuvantarthritisrats，inhibitacuteandchronicinflammation，andregulateimmunologicfunction．
Keywords：kirenol；adjuvantarthritis；anti—inflammation；immuno—regulation
奇任醇是一种从稀莶草中提取的单体成分，白
色针状结晶，mpl94～196℃。分子式C。。H。。O。。据
报道[1]，稀莶草活性部位(经HPLC色谱测定，含奇
任醇85％)可减轻佐剂性关节炎大鼠踝关节炎症
病理反应，通过调整机体免疫功能、改善局部病理反
应而达到抗风湿的作用。目前国内外关于奇任醇的
文献报道甚少，本实验就奇任醇的抗炎免疫作用进
行初步研究。
1材料与方法
1．1 药品和试剂：奇任醇(质量分数为99％)由北
京大学医学部药学院提供。可的松注射液：天津金耀
氨基酸有限公司，5mg／mL，批号0302162。强的松：
天津力生制药股份有限公司，每片5mg，批号
0306018。阿司匹林：阿斯特拉(无锡)制药有限公
司，每片0．5g，批号343401。二甲苯、冰醋酸、2，4一
二硝基氯苯、丙酮均为北京化工厂生产。伊文思蓝：
北京化学试剂公司。印度墨汁：北京市西中化工厂。
刀豆蛋白A(ConA)、MTT、弗氏完全佐剂均为
Sigma公司产品。CD4、CD8单抗为BD公司产品。
1．2仪器：分析天平，紫外分光光度计，酶标仪，流
收稿日期：2004—11—02
基金项目：北京市科委基金资助项目(京科条发E200l3538号)
作者简介：信红岭(1978一)，女，河北石家庄人，在读研究生，专业方向为中药免疫药理研究。
*通讯作者钱瑞琴Tel：(010)82801404
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·867·
式细胞仪。
1．3动物：SD大鼠，180～200g，许可证号：SYXK
(京)2002—0002；ICR小鼠，18～22g，许可证号：
SYXK(京)2002—0001，雌雄兼用。均由北京大学医
学部实验动物中心提供。
1．4方法
1．4．1奇任醇剂量与给药方法：参考《中药新药研
究指南》中治疗类风湿性关节炎的主要药效学研究，
佐剂性关节炎实验分预防组(注射佐剂当日开始给
药)和治疗组(第8天开始给药)，奇任醇剂量均为
4mg／kg。其他实验奇任醇分为3个剂量组：1、2、4
mg／kg。均ig给药。
1．4．2佐剂性关节炎大鼠模型制备：雄性SD大
鼠，除正常对照组外，各组均以完全弗氏佐剂0．1
mL注射于右后足跖(肿胀度=致炎后足跖周长一
致炎前足跖周长)。
1．4．3佐剂性关节炎大鼠淋巴细胞增殖：无菌取佐
剂性关节炎大鼠脾细胞，调整细胞浓度为5×106，
每个样品平行设3个复孔，培养44h，每孔加MTT
100弘L，继续培养4h，每孔加盐酸一异丙醇100pL
显色，酶标仪上于570nm波长处测吸光度(A)值。
计算刺激指数(ConA组A值／对照组A值)。
1．4．4佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群测定：
向大鼠脾细胞悬液中加CD4、CD8单抗，孵育，流式
细胞仪检测。
1．4．5二甲苯致小鼠耳廓肿胀：小鼠ig给药1周，
末次给药1h后，小鼠右耳涂0．04mL二甲苯致
炎，40min后，用直径8mm打孔器在同一部位冲
下耳片，称质量。以左、右耳片质量差表示耳肿胀度。
1．4．6棉球肉芽肿增生：大鼠麻醉、消毒，两侧腹股
沟皮下各放人一个20mg灭菌棉球，缝合皮肤。ig
给药10d，末次给药后24h处死，取出棉球，70℃
烘箱中干燥，称质量，取两侧肉芽肿质量的均值。
1．4．7碳粒廓清实验：小鼠ig给药1周，末次给药
1 h后，尾iv印度墨汁0．1mL／10g，分别于注射后
2、10min小鼠眼后静脉丛用毛细玻璃管(肝素抗
凝)取血20弘L，加入10％Na2C033mL中，于680
rim处测定A值。
1．4．8 迟发型变态反应实验：小鼠背部注射
1．25％二硝基氯苯丙酮溶液，每只0．02mL，24h
后ig给药，给药9d后，每只小鼠右耳涂布1．25％二
硝基氯苯丙酮溶液0．03mL，左耳涂布同体积丙酮，
38h后，用直径8mm打孔器冲下两耳片称质量。
1．4．9血清溶血素水平实验：小鼠ig给药第3天
ip10％羊红细胞悬液0．5mL，免疫后4d取血清。
用生理盐水稀释(1：100)。取稀释后血清lmL冰
浴，依次加入10％绵羊红细胞悬液0．5mL，1：10
稀释的豚鼠血清1mL。37℃水浴10min，冰浴终
止反应。上清液于540rim处测定A值。以生理盐
水代替豚鼠血清作为空白对照。
1．5统计方法：数据均以z±S表示，组间比较进行
t检验。
2 结果
2．1对佐剂性关节炎大鼠足肿胀的影响
2．1．1对原发性足肿胀的影响：见表1。模型组在
致炎后右足开始肿胀，3～12d肿胀度增长缓慢，
12～15d肿胀度增加明显，15～21d肿胀趋于平
缓。可的松预防组、可的松治疗组、奇任醇治疗组、奇
任醇预防组与模型组相比均从15d开始抑制右足
的肿胀(尸<0．05、0．001)。
2．1．2对继发性足肿胀的影响：见表2。可的松治
疗组与模型组相比，15d后可抑制左足的肿胀
(P<0．05、0．01、0．001)，可的松预防组、奇任醇治
疗组、奇任醇预防组与模型组相比均从第12d开始
抑制左足的肿胀(P<0．05、0．01、0．001)。
2．2对急、慢性炎症的影响
2．2．1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响：见表3。
阿司匹林组、奇任醇低、中、高剂量组肿胀度明显减
轻(P<0．001、0．05、0．001、0．001)，均能够抑制二
甲苯引起的急性炎症。
表1奇任醇对佐剂性关节炎大鼠原发性足肿胀的影响(i土s)
Table1 Effectofkirenolonprimarypawswellingofadjuvantarthritisrat (x-Z-_s)
与模型组比较：。P”P 万方数据
·868· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
表2奇任醇对佐剂性关节炎大鼠继发性足肿胀的影响(工±s)
Table2 Effectofkirenolonsecondaryp wswellingofadjuvantarthritisrat (；±s)
与模型组比较：’P’P<0．05。’PG0．01⋯P表3奇任醇对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(i±s，雄一10)
Table3 Effectofkirenolonearedemaofmice
inducedbyxylene(；±s，n--10)
与模型组比较：。PG0．05⋯尸G0．001
。PG0．05⋯P2．2．2对大鼠棉球肉芽肿增生的影响：见表4。阿
司匹林组、奇任醇各剂量组与模型组相比均明显减
轻肉芽肿质量(P<0．05、0．01、0．001)。
2．3对免疫功能的影响
2．3．1对佐剂性关节炎大鼠脾淋巴细胞增殖的影
响：见表5。模型对照组大鼠脾淋巴细胞增殖能力低
于正常组(P胞增殖能力低于模型组，但差异并不显著(P>
表4奇任醇对大鼠棉球肉芽肿的影响(J±s)
Table4 Effectofkirenolongranulomaofrats(；±s)
与模型组比较：’PG0．05一PGo．01⋯PGO．001
。PG0．05。’PGO．01⋯PG0．001v5modelgroup
表5奇任醇对佐剂性关节炎大鼠脾淋巴
细胞增殖的影响(；±s)
Table5 Effectofkirenolonproliferationofsple ic
lymphocyteofadjuvantarthritisrats(J±s)
与正常组比较：⋯PG0．001；与模型组比较：”PG0．05
444PGO．001vsnormalgroup；+PGO．05口smodelgroup
0．05)。奇任醇治疗、预防组与模型组相比能够使低
下的大鼠淋巴细胞增殖能力提高(P2．3．2对佐剂性关节炎大鼠脾T淋巴细胞亚群的
影响：见表6。模型组大鼠与正常组相比CD4+细胞
比例上升(P<0．001)，CD8+下降(P<0．001)，
CD4+／CD8+升高(P<0．001)；可的松治疗组可使
模型大鼠CD8+比例升高(P<0．01)，使CD4+／
CD8+下降(P细胞比例下降(P<0．05)，CD8+比例升高(P<
0．001)，使CD4+／CD8+下降(P<0．001)。奇任醇
治疗组和预防组能降低模型大鼠CD4+比例(P<
0．01、0．001)，又能升高CD8+比例(P<0．05、
0．001)，使CD4+／CD8+下降(P<0．001)。
2．3．3对小鼠碳粒廓清速率的影响：见表7。强的
表6奇任醇对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群的影响(；±s)
Table6 EffectofkirenolonTlymphocytesubpopulationr ioofadjuvantarthritisrats(i±s)
与正常组比较：4
44PG0．001．
44“PG0．001usnormalgroup
与模型组比较：’PG0．05’’PG0．01⋯PG0．001
⋯PG0．001vsmodelgroup
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·869·
松组与模型组相比抑制碳粒廓清速率(P奇任醇各剂量组对小鼠腹腔巨噬细胞碳粒廓清速率
无影响(P>0．05)。
2．3．4对小鼠迟发型变态反应的影响：见表8。阿
司匹林组、奇任醇各剂量组与模型组相比均能明显
抑制耳廓肿胀(P<0．01、0．001)。
2．3．5对小鼠血清溶血素水平的影响：见表9。阿司
匹林组与模型组相比呈抑制效应(尸高剂量组能够抑制小鼠血清IgM水平(P<0．01)。
表7奇任醇对小鼠碳粒廓清速率的影响(x±S，咒一10)
Table7 Effectofkirenoloncarbonclearance
rateofmice(；±s，一一10)
与模型组比较：。P’P表8奇任醇对二硝基氯苯所致小鼠迟发型
变态反应的影晌(i±s)
Table8 EffectofkirenolOildelayedallergy
inmiceinducedbyDNCB(J-4-s)
组 别剂量／(mg·kg_1)动物／只肿胀度／mg 抑制率／％
与模型组比较：一P”。P表9奇任醇对小鼠血清溶血素水平的影响(卫±s，n一10)
Table9 Effectofkirenolonhemolysinlevel
ofmice(j±s，n一10)
、与模型组比较：’P’P3讨论
佐剂性关节炎大鼠是目前广泛应用的类风湿性
关节炎模型之一。该模型以多发性关节炎为特征，原
发病变主要是局部急性炎症反应，并于致炎后10～
12d开始出现继发病变，同时出现以细胞免疫变化
为主的免疫功能紊乱[2]。本实验表明致炎后右足即
出现注射部位肿胀，呈现急性炎症反应。肿胀持续至
21d。并于12～15d出现了再度肿胀的现象。12d
后由于继发病变，左足发生肿胀，并持续至21d。奇
任醇预防、治疗组均可明显抑制模型大鼠12d后右
足的再度肿胀及非致炎足的肿胀。表明奇任醇对模
型大鼠的原发和继发病变均有抑制作用。为探讨其
抑制作用的机制，本实验观察了奇任醇对二甲苯致
小鼠耳廓肿胀、大鼠棉球肉芽肿急、慢性炎症的影
响，结果表明各剂量组均有很好的抑制作用。奇任醇
的良好抗炎作用可能是减轻佐剂性关节炎大鼠原发
和继发病变机制之一。
类风湿性关节炎是免疫介导的炎症性疾病，免
疫自稳状态的破坏是其发生、发展的重要因素之一。
免疫失稳后，T细胞免疫功能发生紊乱[3]。近年来证
明细胞免疫在类风湿性关节炎发病中的作用更为突
出，免疫障碍主要是CD4+细胞和CD8+细胞的数量
和功能改变，表现为CD4+细胞增多，CD8+细胞减
少，CD4+／CD8+比值增高，同时CD4+细胞功能增
强，CD8+细胞功能低于正常，由此可导致B淋巴细
胞激活，功能亢进，产生大量的自身抗体及免疫球蛋
白，免疫复合物沉积在关节局部，引起迁延不愈的滑
膜炎，导致关节肿胀[4]。本实验佐剂性关节炎大鼠对
ConA诱导的脾细胞增殖反应能力降低，与文献报
道一致[5~73；CD4+细胞比例上升，CD8+比例下降，
CD4+／CD8+比例失调，说明佐剂性关节炎大鼠出现
了免疫功能紊乱，奇任醇能够提高佐剂性关节炎大
鼠脾淋巴细胞的增殖能力，并调节T淋巴细胞亚群
CD4+和CD8+的比例，降低CD4+细胞的数量，提高
CD8+细胞的数量，佐剂性关节炎大鼠CD4+／CD8+
比例降低，从而调节细胞免疫，抑制B淋巴细胞产
生自身抗体和免疫球蛋白，逐步减轻免疫复合物在
关节局部的沉积，控制病情的发展。在CD4+细胞中
有一类细胞能介导迟发型超敏反应，奇任醇抑制
CD4+细胞，可能是奇任醇能够有效抑制佐剂性关节
炎大鼠继发性左足肿胀的原因之一。以上结果表明
奇任醇可通过调整机体免疫功能，抑制佐剂性关节
炎大鼠的原发和继发性炎症。为进一步探讨奇任醇
对免疫功能的影响，观察了奇任醇对小鼠特异性、非
特异性免疫功能的影响，结果表明奇任醇各剂量组
均能明显抑制小鼠迟发型变态反应，高剂量能够抑
制小鼠血清IgM水平，对小鼠腹腔巨噬细胞碳粒廓
清速率无影响，提示奇任醇对特异性免疫功能有抑
制作用，对非特异性免疫无影响。这对抑制自身免疫
疾病中致病性自身抗体的产生十分有利。
万方数据
·870· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
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HPLC法同时测定灌胃黄芩水煎剂后大鼠血浆中黄芩苷和汉黄芩苷
的质量浓度及药动学研究
路通，宋珏，谢林，王广基，刘晓东+
(中国药科大学药物代谢研究中心，江苏南京210009)
摘要：目的建立大鼠ig黄芩水煎剂后血浆中黄芩苷和汉黄芩苷的HPLC测定方法及药动学研究。方法大鼠
ig黄芩水煎剂后，不同时间眼底静脉丛取血，制备血浆。血浆样品经甲醇沉淀蛋白，HPLC—uV测定血药浓度。色谱
柱为Shim—packODS(250mm×4．6mm，5pm)；流动相采用梯度洗脱，体积流量：1．5mL／min；检测波长：276
nm。结果黄芩苷的线性范围为0．156～10肛g／mL，汉黄芩苷的线性范围为0．109～7pg／mL，定量下限(LLOQ)
分别为0．156和0。109肛g／mL，日内和日间精密度(RSD)均小于15％，准确度(RE)为一6．82％～3．26％。大鼠
ig黄芩水煎剂后，血浆中黄芩苷和汉黄芩苷血药浓度一时间曲线均存在双峰：黄芩苷的t⋯。和tmax2分别为(12．0±
4．5)rain和(7．2±1．79)h；C⋯1和c⋯2分别为(5．29±1．96)和(4．49±2．12)tlg／mL，汉黄芩苷的t⋯l和tmax2分
别为(14．0±9．o)min和(6．8士1．1)h；C⋯l和C～2分别为(1．38-+-0．16)和(1．62±0．71)pg／mL；黄芩苷的
CL／F为(4．72±1．68)L／h，汉黄芩苷的CL／F为(3．04±0．98)L／h。结论该方法经考察符合生物样品的测定
要求，可应用于大鼠体内黄芩苷和汉黄芩苷血药浓度的测定和药动学研究。大鼠ig黄芩水煎剂后血浆中黄芩苷和
汉黄芩苷质量浓度存在双峰现象，黄芩苷的口服清除率大于汉黄芩苷。
关键词：黄芩水煎剂；黄芩苷；汉黄芩苷；HPLC；双峰现象
中图分类号：R285．61 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)06—0870—04
Simultaneousdeterminationofba calinandwogonosidebyHPLCinratplasma
administeredwithHuangqinDecoctionanditspharmacokineticstudy
LUTong，SONGJue，XIELin，WANGGuang—ji，LIUXiao—dong
(CenterofDrugMetabolismandPharmacokinetic，ChinaPharmaceuticalUniversity，Nanjing210009，China)
Abstract：ObjectiveTodevelopanHPLCmethodwithultravioletdet ctionforsimultaneousdeter—
ruinationofbaicalinandwogonosideinratplasmaafterigHuangqinDecoction(HQD)andstudyitsphar—
macokinetics．MethodsRatsweregivenHQDbyig，plasmawerecollecteda designedtimesfromoculi
chorioideavein．Followingproteinprecipitationby hemixtureofm thanolandacetonitrile(1：1)，the
bloodconcentrationw sdeterminedbyHPLC—UV．TheanalyteswereseparatedonaShim—packODS(250
mm×4．6mm，5”m)columnusinga radientmobilephaseconsistingofacetonitrile—phosphatebuffer．
Theflow—ratewasetat1．5mL／mina dtheluentwasdetectedat276nm．ResultsThelinearrange
was0．156—10t*g／mLand0．109—7／19／mLforbaicalinandwogonoside，respectively．Thelowerlimitof
收稿日期：2004—11-17
基金项目：国家“863”资助项目(2003AA22347A)；国家中医药管理局资助项目(02—032P32)
作者简介：路通(1978一)，男(满)，河北唐山人，中国药科大学药理学在读硕士研究生，研究方向为药动学。
*通讯作者刘晓东Tel：(025)83271006E—mail：Xdtiul960@hotmail．com
万方数据
奇任醇的抗炎免疫实验研究
作者： 信红岭， 毕娟， 刘淼， 林文翰， 钱瑞琴， XIN Hong-ling， BI Juan， LIU Miao，
LIN Wen-han， QIAN Rui-qin
作者单位： 信红岭,毕娟,刘淼,钱瑞琴,XIN Hong-ling,BI Juan,LIU Miao,QIAN Rui-qin(北京大学基础
医学院,中西医结合研究室,北京,100083)， 林文翰,LIN Wen-han(北京大学药学院,国家重
点实验室,北京,100083)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(6)
被引用次数： 7次

参考文献(7条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200506030.aspx