全 文 ：·1670· 中草蟊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第捕卷第11期2007年11月
·药理与临床-
石莒蒲及其有效成分a一细辛醚对癫痫幼鼠海马区神经元
Ⅳ一甲基一D一天冬氨酸受体表达的影晌
杨立彬1，李树蕾”，王淑清1，张淑琴3
(1．吉林大学第一医院儿科．吉林长春130021·2．吉林大学基础医学院组胚教研室，吉林长春130021
3．吉林大学第一医院神经科，吉林长春130021)
搞薹：目的探讨在戊四氮(PTZ)诱发的癫痛动物模型中，石菖蒲及其主要成分廿细辛醚对海马区神经元^k
甲基一D-天冬氨酸受体1(NMDARl)mRNA表达水平的影响。方法3周龄Wistar幼鼠ipPTZ60nag／ks建立
癫痫模型。动物模型随机分为模型对照组、石菖蒲组、}细辛醚组，另设正常对照组。各组均ig给药。正常对照组给
予生理盐水1．0mL／d，其余各组分男4给予石菖蒲2350mg／(kg·d)廿细辛醚29mg／(kg·d)，连续7d。次日ip
PTZ50mg／kg，观察动物行为变化．1d后处死动物。取左倒大脑固定用于原位杂交}取右侧海马组织用于半定量
RT—PcR，检测海马CA，、CA；区神经元NMDRAlmRNA的表达情况。结果原位杂交结果显示，阳性染色颗粒定
位于拇马神经元胞质内。石菖蒲和扣细辛醚治疗组海马区神经元阳性细胞数和平均吸光度均明显少于模型对照组
伊<0．05)。半定量RT—PCR结果显示．石菖蒲和}细辛醚治疗组海马组织中NMDARImR A的相对表达量均
较显著低于模型对照组(P而发挥抑制PTZ诱发的幼鼠瘴痫发作。
关键词：石菖蒲；p细辛醚；癫痫；Ⅳ-甲基一DL天冬氨酸受体1(NMDARl)
中圈分类号：R286，16 文献标识码：A 文章缩号：0253—2670(2007)11—1670—04
EffectofAcorusgramimeusanditsactivecomponenta-asaroneonN·。methyl--D-asperate
receptor1ofhippocampneuronsinepilepticyoungrats
YANGLi—binl，LISbu一1ei2，WANGShu—qin91，ZHANGShu-qin3
(1．DepartmemofPediatrics．TheFirstHospitalofJilinUniversityIChangchun130021。China，2．Department
ofHistologyandEmbryology，SchoolofBasicMedicalScience，JilinUniversity·Changchun130021，China
3．DepartmentofN urology，TheFirstHospitalofJilinUniversity·Changchun130021，China)
Abstract：ObjectiveToexploreth ffeCtofAcorusgramimeusanditsmajorcomponentsa-asarone
onN—methyl—D—asperaterecepter1(NMDARl)mRNAlevelsofhippocampneuronsi epilepticanimal
modelsinducedbypentylenetetrazol(PTZ)．MethodsPTZ60mg／kgwasinjectedotheabdominal
cavityofthreew eksWistarratstoprepareepileptican malmodels．Theanimalmodelswererandomly
dividedintothreegroups：epilepsycontrol，A．gramimeusanda-asaroneaswellasthenormalcontr01．
Eachgroupwasadministeredth oughintraperitoneaInjection．BothoftWOcontrolgroupswereinjected
physiologicsal ne1．0mL／d，andtherestgroupswereinjectedA．gramimeus2350mg／(kg·d)orU-
asarone29rag／(kg·d)for7 d，respectively．AllratsweretreatedbyPTZ60mg／kgthrough
intraperitonealnjectionnextday．Atierth irbehaviorswe eobservedfor24h，animalsweresacrificed．
ThexpressionsofNMDARlmRNAinhippocampCAlandCA3ofallratsweredetectedbyinsitu
hybridizationandsemiquantitativeRT—PCR．ResultsTheresultsofinsituhybridizationshowedthat
positivestaininggranulesw relocatedinthecyptoplasmofhippocampneurons．Thenumberofpositive
cellsandaveragebsorbanceofA．gramimeusgroupora-asaronegroupwasmarkedlylessthanthatof
epilepsycontrol(P<0．05)．ThesemiquantitativeRT—PCRresultsshowedthatNMDAR1m NArelative
expressionlevelfhippoeampneuronsi A．gramimeusgro pora-asaronegroupwaslowerremarkably
thanthatinepilepsycontr01(PinimmatureratsinducedbyPTZbydecreasingthexpressionofglutamicacidreceptorNMDARlin
警銎最智；警并善蕃美厅资助项目(z0030430)。吉林省中药管理局责助项目如004079)
尊翥纂弈害5毫鬣誓68，--。)．，,{矗§蛊谭嘉尹毫金盍差!蟪；尽兰等：曼声任医师，硬士生导师，主要从事儿科神经医学·
万方数据
中革蟊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第11期2007年11月·1671·
hippoeampneurons． ．
Keywords：Acrousg amimeusSoland．；a—asarone；epilepsy；N-methyl—D—asperaterec ptor1
(NMDARl)
一
石菖蒲AcorusgramimeusSoland．具有镇静安
神、抗惊厥的作用，在中医治疗癫痫发作中广泛应
用，a一细辛醚是其主要的有效成分““]。但石菖蒲和
n一细辛醚抗癫痫的机制尚不清楚。一般认为，癫痫是
一种以局部神经元反复异常放电所引起的常见中枢
神经系统疾病。研究证实“。]，兴奋性氨基酸，特别是
谷氨酸的过度合成、释放以及Ⅳ一甲基一D一天冬氨酸
受体(N-methyl—D—asperaterec ptor，NMDAR)
兴奋性活性增高与癫痫的发生、发展、维持密切相
关，在动物模型和癫痫患者的脑标本中均发现
NMDAR表达水平增高。因此，有效调控NMDAR
信号传导通路对癫痛的防治具有重要意义。石菖蒲
和a一细辛醚是否通过抑制NMDAR信号传导通路
而发挥抗癫痫作用尚未见文献报道。本实验旨在通
过原位杂交法和半定量RT—PCR法，探讨石菖蒲和
a一细辛醚对戊四氮(PTz)致癜瘸幼鼠海马CA，、
cA，区NMDARl表达水平的影响，探讨其抗癫痫
的机制，以期对癫痫的防治提供有价值的资料。
l材料与方法
1．1动物及材料：3周龄Wistar幼鼠，体重(38士
2)g(长春高新医学动物实验研究中心)。石菖蒲冲
剂(江阴天江药业有限公司，批号0307113，每袋含
石菖蒲干燥根茎粉末6g)；n一细辛醚片剂(沈阳天
维制药厂，批号030219，质量分数99．8％，每片含
q一细辛醚30mg)；PTZ(Sigma)；DEPC、Trizol、Taq
酶、dNTP、OligodT、AMV逆转录酶购自Takara
公司，NMDARlmRNA探针及原位杂交试剂盒
(TBD科技公司)。NMDARl及Ivactin引物由鼎国
生物公司合成，NMDARl引物：上游：CAGTAA—
ACCAGGCCAATAAG，下游：CAGCAGAGCC—
GTCACATTc}肛actin基因引物：上游：CAT—
CCAGGCTGTGTTGTCCC，下游：TTCTCTTTA—
ATGTCACGCACG；扩增片断分别为491bp和
240hp。Olympus光学显微镜(日本)，Lyca切片机
和HPIAS2000型图像分析系统(德国)，PTc～
200型聚合酶链反应扩增仪(美国MJResearch公
司)；GDS--800型凝胶成像系统(美国Bio—Rad)。
l。2 实验分组及给药：幼鼠iPPTzfi0mg／kg，接
Racine分级[”选择癫痈造模成功的动物进行实验。
动物模型随机分为模型对照组、石菖蒲组、a一细辛醚
组，另设正常对照组．每组备10只。根据临床常规
用药剂量以及人和动物药物剂量换算法，采用ig途
径给药，对照组均给予生理盐水0。5mL／次，其余各
组分别给予石菖蒲2350mg／(kg·d)[相当于人
400mg／(kg·d)]，a一细辛醚29mg／(kg-d)[相当
于人5mg／(kg·d)]，每日2次，连续7d。停药后次
日，ipPTZ60mg／kg，观察幼鼠行为变化，第2天处
死动物。
1．3 NMDARlm NA原位杂交组织化学方法检
测：4％多聚甲醛固定液(含0．1％DEPC)固定左
侧大脑．制备矢状面石蜡切片，厚度4pm。按照
NMDARlm NA原位杂交试剂盒说明书操作。每
只动物各取3张切片，所有切片截面积均相似。每张
切片分别观察5个海马cA，、CA。区高倍视野(×
400)，计数CA。、cA。区内平均阳性细胞数，以Nr／
5F表示。同时运用HPIAS2000型图像分析软件分
析所选脑区阳性染色细胞的平均吸光度。
1．4 NMDARl的半定量RT—PCR反应：取右侧海
马组织，按照说明书采用Trizol法提取总RNA。第
1链扩增反应体系：1．0uLOligodT，L0pL10
mmol／LdNTP，0pLRNA，9．5HLDEPC水，
75℃孵育5min；迅速置冰上5min，离心158；加
入5×缓冲液4．0弘L和2．0严LDTT(o．1m0 )，
混匀，加入AMV1．0pL，42℃孵育60rain；迅速
在75℃下灭活15rain，完成反转录。第2链反应：
94℃预变性5min；94℃1rain，55℃1rain，72℃
lrain，循环35次；最后72℃延伸10rain。同时加
入内参引物。PCR扩增产物分别于1．o％琼脂糖凝
胶中电泳。紫外灯下照相，CS29300双渡长色谱扫描
仪上扫描底片曲线下峰面积作为PCR产物的量。
以NMD Rl条带的峰面积}actin条带的峰面积
代表NMDARlm NA的相对量。
1．5统计学分析：采用SPSSl0．0统计软件处理实
验数据，实验结果以z士s表示，F方差分析齐性，组
间比较采用t检验。
2结果
2．1行为变化：给药1周后再次ipPTZ诱发癫痫
发作，各组幼鼠行为变化有显著差异。模型对照组幼
鼠在给予PTZ3min后即可出现眨眼、动须、节奏
性咀嚼、节律性点头、肢体抽搐、跌倒等表现，其中5
万方数据
·1672· 中革蠢ChineseTrtditioeatltmdHerbalDrugs第38卷第11期2007年11月
只出现重型发作(按Racine分组；1～3级为轻型发
作，4～5级为重型)。石莒蒲组，3只出现重型发作；
n一细辛醚组，2只出现重型发作，两组幼鼠出现行为
学改变的潜伏期较长，至少在10rain以上，且相对
安静。
2．2 NMDARlm NA原位杂交结果：海马CAl、
cA。区神经元胞浆内可见棕黄色阳性染色，杂交反
应的强度反映了NMDARlmRNA的表达水平，用
平均吸光度值表示，数值越大颜色越深。石菖蒲和
a一细辛醚组的平均阳性细胞数及其平均吸光度均显
著少于模型对照组。各实验组的平均阳性细胞数、平
均吸光度显著高于正常组，见表l。
寰1备组幼鼠海马神经元阳性细胞数和阳性细胞
平均吸光度(；士j，^=10)
Table1 Numhrandaveragebsorbanceofpositive
cellsofhippocampneuronsindifferent
gr¨psofyoungrats(Nr／bF)(；士f．^=10)
删0芒。 c^1 ％ c^1 仉
正冒 一 “7±98 87,6+103 0-37i0．090 40±O-II
魍 一 1咒4+19．3AA129．6+21．266“82±“18△6O．86+0．1归6
石菖藉 z 350 105．5±1a．7△6q08．8+_17．归6。m51±O．1266。m58：L0．13A6’
}组辛I 约 1039±164△69085±Is2△△’m56±0．15&A。n61±014AA’
与正常组比较，△ap△△P<0Ⅷ01normMgroup-’P2．3半定量RT—PCR反应结果：NMDARl扩增片
段为491bp，}actin扩增片段为240bp(图1)。各
组NMDARl与}actin扩增产物的相对比值见表
2。石菖蒲和p细辛醚组NMDARl与口-actin的平
均相对比值明显低于模型对照组；各实验组
NMDARl与paetin的平均相对比值明显高于正
常组。
M—DL20001-模型组2一石苗蒲组3一十细辛醚组4一正常组
M—DL20001-modelgroup2-A．gramlnurusgroup
3-a-esaroneg up4-nodalgroup
田l NMDARI和争actin的RT-PeR结果
Fig．1RT-PCRResultsofNMDARIandB_aetiu
3讨论
本实验从分子水平检测了给予石菖蒲和n一细
辛醚后t癫痫候选基因NMDARl在PTZ诱发的癫
痫幼鼠海马区的表达水平，初步探讨了石菖蒲和a一
细辛醚的抗癫痫机制。
中枢神经系统内的神经递质可分为兴奋性和抑
囊2各组幼置海马NMDARIm NA的相对量
(i士-。-一10)
Table2 NMDARImRNArelativelevelofhippocamp
indifferentgroupsofyoungratso士，，^=10)
与正常组比较·oP<0．05i与模型组比较I。P<0·0S
ap制性两类，分别以谷氨酸(Glu)和*氨基丁酸
(GABA)为代表。Glu受体分为代谢型Glu受体和
离子型Glu受体，后者分为NMDA受体和非
NMDA受体。大鼠NMDAR蛋白质由NMDARI
和NMDAR2两个亚单位组成，其中NMDARl具
有NMDAR受体的一切药理学和电生理学特性[g]。
因此，本实验选择癫痫候选基因NMDARl为靶
基因。
NMDARlm NA原位杂交结果显示，海马
CA。，CA。区神经元胞浆中可见棕黄色阳性颗粒}石
菖蒲和a一细辛醚组的平均阳性细胞数及其平均吸
光度均显著少于模型对照组；各实验组的平均阳性
细胞数，平均吸光度显著高于正常组。海马组织的
NMDARl半定量RT—PCR结果显示，NMDARl
扩增片段为491hp，pactin扩增片段为240bp{石
菖蒲和n一细辛醚组NMDARl与}actln的平均相
对比值明显低于模型对照组；各实验组NMDARl
与}actln的平均相对比值明显高于正常组。通过观
察动物行为学改变，发现NMDARlmRNA表达水
平与动物癫痫发作严重程度呈正相关性。在制备动
物模型时，ipPTZ后幼鼠大多出现重型癫痫发作，
而经过中药治疗后经PTZ再次诱发的幼鼠仅少数
出现重型发作。
以上结果提示，石菖蒲及其成分n一细辛醚具有
抗癫痫作用。a一细辛醚可能通过降低海马神经元内
NMDARl的表达水平，降低细胞表面NMDARl
密度，和(或)抑制NMDARl的活性，迸一步降低大
脑皮层的兴奋性，提高癫痫发作的阈值，抑制
NMDA引起的兴奋性神经毒性导致的癫痫发生、
发展。
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大豆异黄酮对大鼠心肌肥厚与纤维化的保护作用
周倒1，刘建新2，周
(1．赣南医学院机能实验室，江西赣州341000
青1，熊小琴1，钶蔚2
2．赣南医学院药理教研室，江西赣州341000)
搞要：目前研究大豆异黄酮(daidzein．DD)对大鼠压力负荷性心肌肥厚及纤维化的保护作用及其机镧。方{砉
采用腹主动脉缩窄法制备太鼠心肌肥厚模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、DD(30、60，120mg／kg)组，4周后
处死大鼠，测量大鼠垒心质量指数(HW／BW)和左心室质量指教(LVW／BW，即LVI)，测定心肌纤维直径
(MD)；分别检测，tL,肌组织中脏原木平、血管竖张素t(AngI)、一氧化氯(NO)的量和钙调神经磷酸酶(CAN)、
Na+，K+一ATP酶、Ca件一ATP薛活性。结果模型组大鼠的HW／BW、LVI、MD明显增大f心肌组织caN活性、腔
原水平及AngI的量明显增高；N0水平和Na+，K4-_ATP酶、Ca抖一ATP酶活性显著降低。与横型组比较DD能
显著提高心肌组织N0量和Na+．K+一ATP酶、c一+-ATP酶活性，降低CaN话性I明显抑制心肌组织AngI和胺
原的产生；减轻心脏质量参数(HW／Bw、LVI)及MD，抑制心肌肥厚及纤维化。绪论DD对腹主动脉缩窄所致大
鼠心肌肥厚及纤维化有保护作用，可能与其升高NO量、降低CaN活性、抑制AngI产生有关。
关量词：大豆异黄酮l心肌肥厚I纤维化；NOI血管紧张素I(AngI)·钙词神经磷酸酶(CAN)
中圈分粪号：R286．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)11一1673—04
Protectionofdaidzeinonmyocardialhypertrophyandfibrosisinrats
ZHOULil，L1UJian—xin2，ZHOUQing’，XIONGXiao—qinl，HEWei2
(1．DepartmentofOrganicExperiment，GannanMedicalCo lege·Ganzhou341000，China【I
2．DepartmentofPharmacology．GannanMedicalCo lege，Ganzhou341000，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeff ctsofdaidzein(DD)onmyocardial
hypertrophyandfibrosisinducedbypressureov rloadinratsandtostudyitsmechanism．Methods
Myoeardialhypertrophyandfibrosismodelofratsinducedbypressureov rloadw spreparedby
constrictingabdominalaorta．Theoperatedratswererandomlydividedintoshamoperatedcontrolgroup，
aorta—constrictedmodelgroup，andthreeDDgroups(30，60，and120mg／kg)．Fourweekslater，the
heart—weight(HW)，leftventricularweight(LVW)，theratioofHW／BWandLVW／BW(LVI)，andthe
cardio—myocytediam ters(MD)afterdyingbyHEcolorwerem asured．Thecontentofcollagenandnitric
oxide(NO)，theactivityofcalcineurin(CAN)andNa+，K+一ATPase，Ca”一ATPaseinthe1eftventricle
werequantifiedw thspectrophotometry．TheangiotensionI(A g1)inthe1eftventriclewasmessured
withradioimmunoassay．ResultsInaorta—constrictedmodelgroup，theratioofHW／BW，LVI，andMD
aswellasthecontentofcollagenandAngI。theactivityofCaNintheleftventriclewasignificantly
收稿日期；2007—01—04
幕妻嚣界；焉西省荆卫(1生96厅1--中)暑慧藉詈嚣嚣雯磊昌≤；嚣嚣篷要研究方向为心脑血管药理与中药药理。
Tell(0797)8269773E—mail：zhouli6099@yahoo．corn．ca
万方数据
石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对癫痫幼鼠海马区神经元N-甲
基-D-天冬氨酸受体表达的影响
作者： 杨立彬， 李树蕾， 王淑清， 张淑琴， YANG Li-bin， LI Shu-lei， WANG Shu-qing，
ZHANG Shu-qin
作者单位： 杨立彬,王淑清,YANG Li-bin,WANG Shu-qing(吉林大学第一医院,儿科,吉林,长春,130021)
， 李树蕾,LI Shu-lei(吉林大学基础医学院,组胚教研室,吉林,长春,130021)， 张淑琴
,ZHANG Shu-qin(吉林大学第一医院,神经科,吉林,长春,130021)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(11)
被引用次数： 5次

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