全 文 ：·1048· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7,El
(P<0．01)，但未达到正常水平(P<0．05)；0．01～
10tlmol／L前荷叶碱能明显减少细胞凋亡的发生，
与AngⅡ组相比差异有显著性(尸<0．05)，以
l ttmol／L作用最强(P比均未能达到正常水平(P<0．05)。
4讨论
AngⅡ是肾素一血管紧张素一醛固酮(RAS)系统
中主要的生物活性物质，是强有力的血管收缩剂，在
血管内外平衡、内膜的形成及心肌梗死后的重塑中
有重要的作用，可刺激活性氧(ROS)的产生，诱导
血管内皮细胞发生凋亡[3]。而血管内皮细胞凋亡是
动脉粥样硬化等多种心血管疾病发生的始动环节。
AngⅡ在体内能上调黏附分子表达，激活巨噬细胞
趋化因子和纤溶酶原活化因子抑制剂一1(PAI一1)，
促进平滑肌细胞的增殖和迁移，促使内皮功能失调。
它通过促进DNA的氧化，使Serl5和Ser20磷酸
化，从而激活p53，同时激活NADPH氧化酶，产生
大量自由基而触发凋亡[4]。血管紧张素转换酶抑制
剂(ACEI)卡托普利、依那普利等通过增强eNOS
的活性，增加NO的生成，抑制caspase级联反应，
以及恢复和稳定eNOS与热休克蛋白90(HSP90)
之间的关系，进而抑制AngⅡ诱导的内皮细胞
凋亡‘5～7|。
本实验用培养的HUVECs，观察前荷叶碱对
AngⅡ诱导内皮细胞凋亡的影响，及其是否通过增
加NO的生成而起作用。结果发现，AngⅡ可明显降
低ECV304细胞活性，显著诱导内皮细胞发生凋
亡，这与Lin等[51的研究相似。同时还发现AngⅡ降
低tNOS的活性，同时减少HUVECs分泌NO，但
与空白对照组相比差异无显著性，这与Desideri
等[81研究发现AngⅡ可激活内皮细胞NADPH氧
化酶，促使ROS产生，从而削弱NOS的活力，减少
NO的分泌及生物利用度的结果相似。而前荷叶碱
能显著增强tNOS的活性，而对iNoS的活性无明
显影响，从而增加HUVECs分泌No；同时前荷叶
碱能部分拮抗AngⅡ诱导内皮细胞凋亡，上述两种
作用在前荷叶碱浓度为1tzmol／L时最强。说明低
浓度前荷叶碱通过增强tNoS的活性尤其是eNOS
活性来增加HUVECs分泌No，抑制AngⅡ刺激
ROS的产生，从而减少AngⅡ诱导HUVECs凋
亡，发挥其保护内皮细胞的功能。
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甘草黄酮对辣椒索诱导豚鼠咳嗽反射的抑制作用
朱一亮，谢强敏。，陈季强，张水娟
(浙江大学医学院国家食品药品监督管理局呼吸药物实验室，浙江杭州 310031)
摘要：目的观察甘草黄酮的镇咳作用及机制。方法用辣椒素气雾吸入诱导豚鼠咳嗽反射，MedLab生物信号
采集处理系统记录咳嗽次数。结果 甘草黄酮30、100和300mg／kgig给药剂量依赖地抑制辣椒素诱导的豚鼠咳
嗽反射，与模型组比较咳嗽次数分别减少32．7％、49．3％和59．6％(P收稿日期：2005—11—22
基金项目：浙江省科技厅重点攻关项目(2006C23009)
作者简介：朱一亮(1979一)，男，浙江省桐乡市人，浙江大学医学院硕士，研究方向为抗哮喘药物和镇咳药物的研发与理论研究。
Tel：(0571)87230584E—mail：ionejob@126．corn
*通讯作者谢强敏E—mail：xieqm@zju．edu．ca
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1049·
药1、4、6h可显著抑制辣椒素诱导的豚鼠咳嗽反射次数(P(P>o．05)。纳洛酮0．3mg／kg(ip)可部分阻断甘草黄酮的作用，马来酸麦角新碱3mg／kg(ip)或格列本脲20
mg／kg(ip)不能阻断甘草黄酮的作用。结论甘草黄酮呈剂量依赖方式抑制辣椒素引起的豚鼠咳嗽反射，甘草黄
酮(100mg／kg，ig)作用持续时间为6h以上。纳洛酮部分阻断甘草黄酮的作用，表明甘草黄酮可能间接影响内源
性的阿片系统。
关键词：甘草黄酮；镇咳；辣椒素；豚鼠
中图分类号：R286．42 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)07—1048—04
InhibitionofflavonefromGlycyrrhizauralensisoncapsaicin—induced
coughreflexinguineapig
ZHUYi—liang，XIEQiang—min，CHENji—qiang，ZHANGShui—juan
(ZhejiangRespiratoryDrugsResearchLaboratoryofStateFoodandDrugAdministrationofChina，
CollegeofM dicine，ZhejiangUniversity，Hangzhou310031，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheantitussiveactivityandactionsitesofflavonefromGly—
cyrrhizaur lensis(FGU)inguineapig．MethodsC ughreflexwasinducedbycapsaicinaerosolinguinea
pigs．ThecoughnumberoftimeswasrecordedbyMedLabd taadoptionsystem．ResultsFGU30，100，
and300mg／kg(ig)inhibitedcapsaicin—inducedcoughreflexinadose—dependentmanner．Inhibitoryrates
ofcoughreflexwere32．7％，49．3％，and59．60A，respectively．Therewasasignificantlydifferentcorn—
parisonwiththoseofmodelgroup(Pcoughreflexnumberoftimesinducedbycapsaicinat1，4，and6 hafterigadministration(P<0．01，
0．05)，buthadnoeffectat8and12h(P>O．05)．PretreatmentwithN loxone(O．3mg／kg，ip)partly
blockedtheffectsofFGU，butneithermethysergide(3mg／kg，ip)norglibenclamide(20mg／kg，ip)
worked．ConclusionFGUinhibitscapsaicin—inducedcoughreflexinguineapiginadose—dependentman—
ner．FGU(100mg／kg，ig)hadacontinuousantitussiveeffectmorethan6h．Partlyb ockeffectofNalo—
xoneonFGUsuggeststhatFGUmightindirectlyinfluencedogenousopiumsystem．
Keywords：flavonefromGlycyrrhizauralensisFisch．(FGU)；antitussive；capsaicin；guineapig
甘草系豆科多年生草本植物。甘草的镇咳作用
被世人延用千年，至今仍为呼吸系统疾病常用药，但
多以复方配伍使用，单独使用甘草或甘草黄酮的镇
咳药理研究报道很少。Anderson等[11报道甘草酸及
其衍生物具有镇咳活性。俞腾飞等[23报道甘草黄酮、
甘草浸膏及甘草次酸对氨水和二氧化硫诱导的小鼠
咳嗽有抑制作用。吴勇杰[3报道甘草次酸钠抑制氨
水诱导的小鼠咳嗽反应。咳停片是一个含有甘草流
浸膏和甘草浸膏的多成分复方制剂，被证明其对枸
橼酸雾化吸入或电刺激喉上神经引起的豚鼠咳嗽反
射具有明显抑制作用[4]。痰咳宁也是一个含有甘草
成分的复方制剂，它对枸橼酸雾化吸入引起的豚鼠
咳嗽反射以及辣椒素雾化吸入引起的小鼠咳嗽反射
同样具有很强的抑制作用[5]。本实验研究甘草黄酮
(以甘草苷和甘草苷芹糖为主要成分)对辣椒素雾
化吸入引起的豚鼠咳嗽反射的影响，并探讨其作用
机制。
1材料
1．1 药品与试剂：辣椒素，批号123H78341；盐酸纳洛
酮，批号446754／1；马来酸麦角新碱，批号073k1279；
格列本脲，批号123k1062；以上试剂均购于Sigma公
司。可待因，批号220103，青海制药厂。甘草药材购于杭
州中药材公司，经本校药学院生药教研室鉴定为甘草
GlycyrrhizaUralenisiF shc．。
1．2 甘草黄酮的制备：甘草(乌拉尔甘草)，新疆
产，2年以上生长期。取10kg甘草，粉碎，水提两
次，定容为60L，经DiaionHP20柱，然后用40L
水提，再用50％甲醇40L提取，干燥后得250g提
取物，经HPLC测定主要成分为甘草黄酮，含总黄
酮50％以上，不含甘草酸。
1．3辣椒素溶液的配置：称取辣椒素7．5mg，放人
10％乙醇(1mL)和10％聚山梨酯80(1mL)的
混合液中，然后在研钵内研磨至完全溶解，再用生理
盐水稀释至50mL备用。
1．4动物：豚鼠，300～400g，雌雄不拘，购于浙江
大学医学院实验动物中心，合格证号220010014。
1．5仪器：体积描记盒、差压换能器(Motorola)、
计算机(PentiumⅢ，128M／30G)、MedLab生物信
号采集处理系统(MedLabV5．0．0，南京美易公
司)、动物肺机械功能测定仪、Parimaster压缩吸入
万方数据
·1050· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月
机(德国)。
2方法
2．1引咳方法：将豚鼠置于20cm×10cm×10cm
描记盒中，稳定1rain后，用压缩吸入机气雾
0．015％辣椒素溶液(对照组用生理盐水代替)10
rain，生物信号采集处理系统记录自气雾开始到结
束的咳嗽次数。
2．2实验设计
2．2．1量效实验：豚鼠81只，随机分6组，每组动
物数见表1。除模型组和对照组ig生理盐水1rag／
kg外，其余组分别ig甘草黄酮30、100和300mg／
kg，可待因10mg／kg，给药后1h气雾辣椒素引咳。
2．2．2时效实验：豚鼠81只，随机分为7组，每组
动物数见表2。除模型组和对照组ig生理盐水外，
各给药组ig甘草黄酮100mg／kg，分别于给药后
1、4、6、8和12h气雾辣椒素引咳。
2．2．3作用机制分析实验：豚鼠81只，随机分为9
组，每组动物数见表3。分别为对照组、模型组、甘草
黄酮组、纳洛酮+甘草黄酮组、麦角新碱+甘草黄酮
组、格列本脲+甘草黄酮组、可待因组、纳洛酮+可
待因组和麦角新碱+可待因组。甘草黄酮各组在ig
甘草黄酮100mg／kg前30rain(格列本脲+甘草
黄酮为5min)分别ip生理盐水、纳洛酮(o．3rag／
kg)、麦角新碱(3mg／kg)或格列本脲(20rag／
kg)。可待因各组ig可待因10mg／kg前30rain分
别ip生理盐水、纳洛酮(O．3mg／kg)或麦角新碱
(3mg／kg)，对照组和模型组均用生理盐水代替。ig
给药后1h气雾辣椒素引咳。
2．3统计学处理：数据均以z4-_S表示，组间比较采
用丁检验或【，检验。
3 结果
3．1量效关系：对照组豚鼠气雾生理盐水10rain，
未见豚鼠有咳嗽反射；模型组气雾辣椒素10rnin，
平均咳嗽次数达22次。甘草黄酮30、100和300
mg／kg呈剂量依赖方式抑制辣椒素引起的咳嗽反
射，甘草黄酮300mg／kg与可待因10mg／kg镇咳
作用相当，见表1。
3．2时效关系：与模型组比较，甘草黄酮100rag／
kg给药后1、4和6h咳嗽次数明显减少，其中给药
后1h镇咳作用最强，差异显著(P<0．01)，见表2。
3．3受体拮抗剂对甘草黄酮和可待因抑制辣椒素
诱导豚鼠咳嗽反射作用的影响：纳洛酮+甘草黄酮
组与甘草黄酮组比较，抑制率降低，但无统计学差异
(P>0．05)，提示纳洛酮可能部分阻断甘草黄酮的
镇咳作用。麦角新碱和格列本脲对甘草黄酮的抑制
作用则无明显影响。纳洛酮明显降低可待因的抑制
率，且差异非常显著(P能降低可待因的抑制率(P>0．05)，见表3。
表1 不同剂量甘草黄酮对辣椒素诱导豚鼠咳嗽反射的作用
TableEffectofFGUindifferentdosesoncapsaicin—
inducedoughreflexinguineapig
与对照组比较：△△△P与模型组比较：一P△△△P。。P<0．Ol⋯P<0·001口5modelgroup
表2甘草黄酮作用不同时间对辣椒素诱导豚鼠咳嗽
反射作用的影响
Table2 Time·-dependenteffectofFGUoncapsaicin·-
inducedoughreflexinguineapig
组 别 作用时间／h 动物／只咳嗽反射／(次·10min一1)抑制率／％
与对照组比较：△△△P与模型组比较：+P△△△P+P表3受体拮抗剂对甘草黄酮抑制辣椒素诱导豚鼠咳嗽
反射作用的影响
Table3 Influenceofseveraleceptorantagonists
FGUeffectoncapsaicin—inducedcough
reflexinguineapig
组别 ifIlt／(mg·kg一1)动物／只咳嗽反射／(次·10rain一1)抑{}I率／％
与对照组比较：AAAP<0．001；与模型组比较：⋯P<
0．001；与可待因组比较：4
44P△△△P<0．001口5controlgroup；⋯尸<0．001口5model
group；
。44P 万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1051·
4讨论
甘草黄酮类物质具有较强的生物活性，近年发
现甘草黄酮类化合物具有抗HIV、抗肿瘤等药理作
用[6]。本实验研究的甘草黄酮提取物主要成分是黄
酮(含总黄酮50％以上)，并且已经明确甘草苷和
甘草苷芹糖是其中最重要的镇咳成分。
辣椒素是一种C神经纤维的兴奋剂，它与其受
体类香草受体一1(vanilloidreceptor1，VRl)结合
兴奋气道黏膜和肺组织的C纤维导致咳嗽反射，并
可促使C纤维末梢释放速激肽和神经肽进入肺组
织，导致气道平滑肌收缩和黏膜水肿，这一作用也可
间接地导致快适应受体激活而引起咳嗽反射[7]。本
实验结果表明分离获得的甘草黄酮呈剂量依赖性抑
制辣椒素诱导的豚鼠咳嗽反射，与模型组比较咳嗽
次数明显减少，300mg／kg甘草黄酮与10mg／kg
可待因作用强度相当；甘草黄酮100mg／kg一次ig
给药，作用时间可维持6h以上。本实验还采用受体
阻断法，进一步观察甘草黄酮可能的作用机制，结果
发现纳洛酮0．3mg／kg可部分阻断甘草黄酮的镇
咳作用，同样剂量纳洛酮可完全阻断可待因的镇咳
作用，提示甘草黄酮可能不是通过阿片受体，至少不
是完全通过阿片受体起镇咳作用的，而有可能是抑
制了能引起内源性阿片释放的物质，如神经肽(P
物质、神经激肽一1、神经激肽一2和神经激肽一3等)，
因为内源性阿片释放和阿片受体敏感性受神经肽等
递质的调节[8]，并已明确神经肽一1和神经肽一2选择
性拮抗剂可抑制辣椒素诱导的豚鼠咳嗽反射[9]。另
一种可能是甘草黄酮能直接促进内源性阿片的释
放，内源性阿片的增加是否会引起成瘾性尚不清楚，
但中医长期依赖应用甘草迄今尚无成瘾性的报道。
离子通道阻滞剂也是新的镇咳药物研发方
向Do]。周围镇咳药莫吉司坦(moguisteine)呈剂量
依赖方式抑制辣椒素诱导的豚鼠咳嗽反射，这一作
用可被ATP敏感的钾离子通道阻滞剂格列本脲所
阻断，表明莫吉司坦可能通过钾离子通道显示其镇
咳作用[11|。本实验中格列本脲不能阻断甘草黄酮，
提示甘草黄酮的镇咳作用可能不通过ATP敏感的
钾离子通道。
5一羟色胺(5-HT)在咳嗽反射中有调节作用。
对人体，5-HT缓慢静脉滴注可抑制辣椒素诱导的
咳嗽反射[12|，也可抑制辣椒素诱导的豚鼠咳嗽反
射[1引，但Van—wyk等[14]发现用5-HTAl激动药丁螺
环酮不能抑制辣椒素诱导正常志愿者的咳嗽反射，
5一HT，受体拮抗药麦角苄酯和5一HT。受体拮抗药
pisotifen对辣椒素诱导正常志愿者的咳嗽反射也无
任何影响。本实验结果显示麦角新碱(5一HT受体拮
抗药)对甘草黄酮和可待因抑制辣椒素诱导的豚鼠
咳嗽反射无明显阻断作用，至少表明甘草黄酮的镇
咳作用也不是通过5一HT受体调节，尽管5一HT受
体在咳嗽反射中有调节作用尚有争议。
综上结果表明甘草黄酮能很强地抑制辣椒素诱
导的豚鼠咳嗽反射，作用时间可持续6h以上。推测
其作用机制可能是通过直接阻断VRl受体或间接影
响内源性阿片释放，但其具体作用机制仍有待研究。
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甘草黄酮对辣椒素诱导豚鼠咳嗽反射的抑制作用
作者： 朱一亮， 谢强敏， 陈季强， 张水娟， ZHU Yi-liang， XIE Qiang-min， CHEN Ji-qiang
， ZHANG Shui-juan
作者单位： 浙江大学医学院,国家食品药品监督管理局呼吸药物实验室,浙江,杭州,310031
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(7)
被引用次数： 4次

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liang 甘草黄酮对荷瘤(S180)小鼠免疫细胞数量的影响[期刊论文]-中华中医药杂志2007,22(12)
10. 孟彦彬.高晓燕 牛膝中脱皮甾酮的含量测定及促成骨样细胞增殖活性[期刊论文]-承德医学院学报2009,26(4)

引证文献(5条)
1.安士影.孟兆青.景娇.程宁波.贺顺伟.萧伟 不同产地辣椒中辣椒碱、二氢辣椒碱与辣椒红色素的测定[期刊论文]
-中草药 2011(11)
2.管燕.谢强敏 甘草黄酮对肺部炎症小鼠细胞因子表达和氧化反应的调节作用[期刊论文]-中草药 2009(8)
3.胡惠兰 温肺止咳方组分的配比优化及药效研究[期刊论文]-今日药学 2009(3)
4.刘香.曹娟 分光光度法测定不同产地款冬花的总黄酮含量[期刊论文]-贵阳医学院学报 2010(6)
5.刘香.曹娟 分光光度法测定不同产地款冬花的总黄酮含量[期刊论文]-贵阳医学院学报 2010(6)


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