全 文 ：风湿关节炎片中麻黄碱的HPLC测定
胡　爽, 李晓妮,葛　新,丁　红

(山西医科大学药学院, 山西 太原　030001)
　　风湿关节炎片是由马钱子、麻黄、当归、苍术、红
花、羌活等组成的中成药,用于治疗风湿性关节炎和
腰腿疼痛等症。方中麻黄属君药,主要成分为多种生
物碱,指标成分左旋麻黄碱( l-ephedrine )除具有松
弛平滑肌、抗菌、抗病毒、发汗解热和平喘作用外,还
能够提高中枢性痛觉阈值,产生镇痛作用[ 1] ,是本方
发挥疗效的重要成分。本实验对麻黄碱进行反相高
效液相色谱分析, 以期为提高、完善风湿关节炎片的
质量标准提供实验依据。
1　仪器与试药
岛津高效液相色谱仪( LC—10A 泵, SPD—10A
紫外可见检测器, C—R6A 数据处理机)。
　　甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。盐酸麻黄
碱对照品(中国药品生物制品检定所, 批号: 0714-
9903) , 伪麻黄碱对照品(大同制药厂,经面积归一化
法测定其纯度不低于 98. 0%) ,风湿关节炎片(山西
华康药业股份有限公司)。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Hyperil BDS C18柱 ( 250
mm×4. 6 mm , 5
m) (大连依利特公司) ; 流动相:
甲醇-0. 05 mol/ L 磷酸二氢钾(三乙胺调节 pH 值为
5. 5) ( 5∶95) ; 体积流量: 1. 5 mL/ min; 检测波长:
210 nm; 柱温: 40 ℃;进样量: 20
L。理论塔板数按
盐酸麻黄碱峰计算不低于 7 000。
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取盐酸麻黄碱对照
品 24. 9 mg ,置 25 mL 量瓶中, 加甲醇溶解, 并加至
刻度,摇匀,即得。
2. 3　供试品溶液的制备:取本品 20 片, 除去糖衣,
精密称定, 研细,精密称取约 0. 8 g , 置具塞锥形瓶
中,加入碱性氯仿[氯仿-氨水( 9∶1) ] 20. 00 mL,称
定质量, 冷浸 24 h, 超声处理 20 m in, 放冷,用碱性
氯仿补足减失的质量,摇匀滤过。精密量取续滤液5
mL 置蒸发皿中,温水浴蒸至近干,残渣用 1～2滴 4
mol / L 盐酸使溶解, 再用 50%甲醇充分洗涤, 转移
至 10 mL 量瓶中, 加 50%甲醇至刻度,摇匀备用。
2. 4　阴性对照溶液的制备:取缺麻黄的其他各味药
材按处方工艺制成阴性对照, 按 2. 3项下方法制成
阴性对照溶液。
2. 5　方法学考察
2. 5. 1　线性关系考察:精密吸取盐酸麻黄碱对照品
溶液 0. 1、0. 3、0. 5、0. 7、0. 9 mL 置 25 mL 量瓶中,
用50%甲醇稀释并加至刻度, 分别进样 20
L。以盐
酸麻黄碱质量浓度(
g/ mL)为横坐标、峰面积为纵
坐标绘制标准曲线, 得回归方程 Y = 16 743 X -
8 678. 4, r= 0. 999 7。表明盐酸麻黄碱在 3. 984～
35. 86
g/ mL 与峰面积线性关系良好。
2. 5. 2　精密度试验:取 19. 92
g/ mL 盐酸麻黄碱
对照品溶液连续进样 6次, 结果盐酸麻黄碱峰面积
的 RSD为 1. 2%
2. 5. 3　重现性试验: 取批号为 20020701样品平行
取样 5份, 配制供试品溶液,测定,结果盐酸麻黄碱
质量分数为 0. 754 4 mg / g , RSD为 3. 2%。
2. 5. 4　稳定性试验: 取批号为 20020701样品的同
一供试品溶液在配制后 0. 5、2、4、6、8 h分别进样测
定, 结果盐酸麻黄碱峰面积的 RSD 为 1. 8% , 表明
样品溶液在 8 h 内稳定。
2. 5. 5　回收率试验:取已知质量分数的样品(批号:
20020701) 0. 5 g ,分别加入约 0. 996 mg / mL 盐酸
麻黄碱对照品溶液 0. 1、0. 3、0. 5 mL,平行 2 份, 制
备供试品溶液, 按上述色谱法测定,结果平均回收率
为 95. 1%, RSD 为 1. 6%。
2. 6　样品测定:采用外标法测定 3批样品中麻黄碱
的质量分数。结果见表 1, 色谱图见图 1。
表 1　风湿关节炎片中麻黄碱的测定结果 ( n= 3)
Table 1　Ephedrine in Fengshi Guanjieyan Tablet ( n= 3)
批　号 盐酸麻黄碱/ ( mg·g- 1)
20020601 0. 625 7
20020701 0. 716 1
20020702 0. 692 7
3　讨论
3. 1　麻黄碱差向异构体的分离是本实验的关键, 文
·62· 中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 36 卷第 1 期 2005年 1月

收稿日期: 2004-04-13
* 通讯作者
1-麻黄碱　2-伪麻黄碱
1-ephedrine　2-pseudoeph edrine
图 1　麻黄碱对照品(A)、风湿关节炎片( B)
和阴性液(C)的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of ephedrine (A) ,
Fengshi Guanj ieyan Tablet (B) ,
and negative sample (C)
献报道的 RP-HPLC方法较多[ 2～4]。实验曾选用甲
醇-0. 01 mol/ L 磷酸二氢钾(以磷酸调至 pH 2. 5)、
十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-磷酸作为流动相, 前者
pH值较小、使用一段时间后造成柱效明显降低,而
离子对色谱平衡时间长、在所选波长处噪音大、难清
洗。本实验选择的色谱条件下麻黄碱和伪麻黄碱分
离度较好,适合企业常规质控。
3. 2　未对制剂中的伪麻黄碱定量分析,但实验中精
密称取伪麻黄碱对照品 2. 3 mg, 用甲醇溶解定容至
5 mL,稀释 10倍后在上述色谱条件下进样,以确定
此色谱条件下图谱中伪麻黄碱的位置。
3. 3　采用碱性氯仿较酸水-有机溶剂提取更为简
便,提取效率较高。
References:
[1]　Zha L H, Su Z G, Zhang G Z, e t al . Appl icat ion and research
on Ep hedr a res ourse [ J] . Chin Bul l Bot (植物学通报) , 2002,
19( 4) : 396-405.
[2]　Liang H X, Yu R G, Yang Q H, et al . U se of the Pow el l
m ethod to opt imize th e compos it ion of HPLC mobile p has e —
the separat ion of ephed rine and pseudoephedrine [ J ] . Ac ta
P harm S in (药学学报) , 1991, 26( 1) : 49-52.
[3]　Liang H, Li W Y, Chen Y. Determinat ion of eph edrine in
Qin gxuan Preparat ions b y HPLC [ J ] . Chin J P harm A nal (药
物分析杂志) , 1999, 19( 4) : 276-277.
[4]　Kazuhiko S, Keiichi S , Yuji I, et al. Determinat ion of
alk aloids in Ep hedr a h erb by high-performance l iquid
chromatog raph y [J ] . Iy akuhin K enkyu (医药品研究) , 1996,
27( 5) : 255-261.
均匀设计与正交设计联用筛选复方银杏的最佳配比
唐春红1, 2 ,蔡绍皙1,王伯初1

( 1. 重庆大学生物工程学院 生物力学与组织工程教育部重点实验室,重庆　400044;
2. 重庆工商大学环境与生物工程学院, 重庆　400033)
　　正交设计是在中药复方筛选试验中使用最多的
一种设计方法,均匀设计由于其试验次数少,优化效
率高的优点也开始用于中药复方的筛选[ 1]。本实验
采用均匀设计联用正交设计的方法,以内皮细胞为
作用对象,以细胞释放的一氧化氮和细胞生长状态
作为观察指标,对以葛根素、银杏提取物和精氨酸为
主效药的复方银杏进行最佳配比的筛选, 为以后的
深入研究奠定基础。
1　材料与方法
1. 1　材料: 银杏提取物 GBE-828w 由贵州大学生
化中试基地惠赠。葛根素由陕西正平制药公司惠赠。
人脐静脉血管内皮细胞株 ECV -304(中国科学院上
海细胞生物研究所) ,干粉型 DMEM / F 12培养基(美
国 Hyclone公司) ,水合联胺(重庆东方试剂厂)。
1. 2　仪器: CO 2培养箱(美国 SHELL LAB 公司) ,
WD800ASL—4(格兰仕)不锈钢型微波炉, 倒置显微
镜(日本Olympus 公司) , 3599型 96孔培养板(美国
Cor ning Inco rpo rated公司) , BIO—RAD酶标仪。
1. 3　NO 的测定: Gr iess Reagent Kit ( Beyot ime
Biotechnology )在 1～100
mol/ L 有很好的线性关
系。在 96孔培养板内分别依次加入 50
L 培养液、
Griess Reagent Ⅰ和Ⅱ,用酶标仪在 540 nm 下测定
吸光度,与标准曲线比较,计算 NO 浓度。
1. 4　各药物最佳质量浓度范围的确定:将人脐静脉
内皮细胞株 ECV-304 传代于 50 mL 培养瓶中, 待
细胞均匀铺满瓶底, 消化细胞 DMEM-F12 培养液
吹打制成细胞悬液, 接种于 96孔培养板中, 每孔
0. 1 mL, 含 1×105个细胞, 培养 24 h 后, 弃上清液
·63·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 36 卷第 1 期 2005年 1月

收稿日期: 2004-03-16作者简介:唐春红( 1965—) ,女,四川三台县人,副教授,现在重庆大学攻读博士学位,研究方向为保健食品加工与天然产物制药。