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2. 5　精密度试验:取槲皮素、山柰素、异鼠李素对照
品溶液 ,按上述色谱条件及检测方法连续进样 5次 ,
每次 10μL,测定峰面积 ,计算 3种溶液的浓度 ,其
RSD分别为 1. 57% , 2. 89% , 0. 29%。
2. 6　稳定性试验: 分别于 0, 2, 4, 6, 12 h测定同一
胶囊中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量 ,每次进样
10μL,其 RSD分别为 0. 35% , 3. 68% , 0. 54% 。
2. 7　回收率试验:精密称取银杏叶缓释胶囊两份 ,其
中一份按含量测定方法测定其中黄酮醇苷元的含量 ,
另一份定量加入槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品 ,混
匀 ,按含量测定方法测定各自含量 ,计算回收率。结果
平均回收率分别为 100. 40% , 97. 55% , 101. 06% ,
RSD分别为 1. 01% , 2. 25% , 2. 09% (n= 5)。
2. 8　样品测定:分别精密吸取上述 3种对照品溶液
与供试品溶液各 10μL,注入液相色谱仪 ,测定 ,计
算 3种黄酮苷元的含量 ,以下式换算成总黄酮的含
量。测定结果见表 1。
　　总黄酮醇苷含量= (槲皮素含量+ 山柰素含量+ 异鼠李
素含量 )× 2. 51
3　讨论
3. 1　参照《中华人民共和国药典》及大量文献 [3 ] ,用
十八烷基键合硅烷胶为填充剂 ,分别配制甲醇 -
表 1　银杏叶缓释胶囊中总黄酮含量测定结果 (n= 2)
Table 1　 Content of total f lavone in Ginkgo
Sustained-release Capsule (n= 2)
批号 总黄酮含量 /mg
010306 28. 94
010307 29. 62
010308 30. 14
0. 4%磷酸水溶液不同比例的流动相。 以 5∶ 5比例
的出峰时间为 29 min,随着甲醇比例的增加 ,出峰
时间缩短 ,在 7∶ 3比例时出峰时间大约为 7 min,
但在此条件下样品中各种成分不能有效分离。在 6∶
4比例时 ,样品中各种成分能有效分离 ,故流动相选
择甲醇-0. 4%磷酸水溶液 ( 60∶ 40)。
3. 2　同一样品在不同超声时间、不同回流时间测定
各成分峰面积 ,结果超声提取时间为 20 min,水解
时间为 30 min较好。
References:
[1 ]　 Lian F Y, Yang G F, Fu C S. S tudies on active com positi on,
pharmacolog y and clinical application of Ginkgo biloba [ J].
Shandong J Pha rm (山东医药工业 ) , 1999, 18( 4): 14-15.
[2 ]　 Qian T X, Yang S L, Xu L Z. Research dev elopmen t of Gink -
go biloba [J ]. World Phytomed (国外医药· 植物药分册 ) ,
1997, 12( 4): 157-163.
[3 ]　 Lei T Q, Ye X L, Xiang L H, et al . Study on th e determining
meth od on ginkg o-f lavone in Ginkgo biloba [ J ]. Ch in J Pharm
(中国医药工业杂志 ) , 2002, 33( 2): 70-72.
HPLC法测定咳喘平口服液中麻黄碱的含量
谢　辉 1 ,狄留庆 2 , 毛春芹 1
( 1. 南京中医药大学 ,江苏 南京　 210029; 2. 江苏省海洋药物研究开发中心 ,江苏 南京　 210029)
　　咳喘平口服液系根据江苏省中医院儿科名老中
医的经验方生产加工制成 ,处方中含有麻黄、半夏、
鱼腥草、白果、地龙等多味中药 ,临床治疗小儿热哮
证疗效确切。麻黄系方中君药 ,测定其有效成分麻黄
碱的含量对咳喘平口服液的质量控制有重要意义。
文献报道的麻黄碱含量测定方法有薄层扫描法、气
相色谱法、高效液相色谱法 [1 ]等 ,根据现有条件及
HPLC法具有简便、灵敏、专属性强等优点 ,本实验
对 HPLC法测定制剂中麻黄碱的含量进行了研究。
1　仪器及材料
Waters高效液相色谱仪 ,薄层色谱硅胶 G(青
岛海洋化工集团公司 ) ,咳喘平口服液 (本校药剂教
研室提供 ) ,盐酸麻黄碱对照品 (中国药品生物制品
检定所 ) ,乙腈 ( HPLC,江苏淮阴塑料制品厂化工研
究所 ) ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件与系统适用性试验:色谱柱为 Wa-
ters Nova-Pak C18柱 ( 4μm, 3. 9 mm× 150 mm) ,流
动相为乙腈-水 ( 40∶ 60,每 1 000 mL含磷酸二氢钾
3. 4 g及十二烷基硫酸钠 1. 7 g ) ,检测波长为 210
nm;柱温为 25℃ ,流量为 1. 0 m L /min。理论塔板数
按麻黄碱计算不低于 6 000。
·164· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 2期 2004年 2月
收稿日期: 2003-04-03作者简介:谢　辉 ( 1970— ) ,女 ,江苏南京市人 ,硕士 ,讲师 ,主要研究方向:中药制剂。 Tel: ( 025) 86798159
2. 2　供试品溶液及阴性对照的制备: 参照文献方
法 [1 ]进行提取。 精密吸取咳喘平口服液 5 mL,加
0. 5 mol /L盐酸溶液 0. 1 mL和氯化钠 0. 1 g,振摇
使溶解。依次用乙醚 10, 5, 5, 5, 5 mL萃取 ,将乙醚
层合并后 ,用蒸馏水 3 mL洗涤 ,洗涤液与水层合
并 ,加浓氨水 2 mL使呈碱性 ,依次用氯仿 10 , 5, 5,
5, 5 mL萃取 ,合并氯仿液 ,旋转蒸发至干 ,残渣用甲
醇溶解并加至 10 mL。精密吸取 0. 5 mL,用流动相稀
释至 25 m L,即得。同法制备缺麻黄阴性对照溶液。
2. 3　线性关系考察:精密称取盐酸麻黄碱对照品
9. 4 mg ,用甲醇溶解并加至 10 mL,作为储备液。精
密吸取储备液 100μL,用流动相稀释至 5 mL,作为
对照品溶液。精密吸取对照品溶液 0. 5, 1, 5, 10, 15
μL进样 ,按上述色谱条件测定峰面积。 以盐酸麻黄
碱进样量对峰面积绘制标准曲线 ,得回归方程 Y=
1 173. 47X- 1 495. 89, r= 0. 999 7,麻黄碱进样量
在 9. 4～ 282. 0 ng与峰面积呈现良好的线性关系。
2. 4　稳定性试验:精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液
3μL,分别于 0, 0. 5, 1. 0, 2. 0, 4. 0, 30. 0 h进样 ,测
定峰面积。结果盐酸麻黄碱在 30. 0 h内峰面积值保
持稳定 , RSD为 1. 23% 。
2. 5　精密度试验: 精密吸取盐酸麻黄碱对照品 3
μL及供试品溶液 10μL进样 ,分别重复进样 5次 ,
计算盐酸麻黄碱含量 ,结果其 RSD分别为 1. 01% ,
1. 20% 。
2. 6　重现性试验:精密吸取咳喘平口服液 5 m L,共
6份 ,依法制备供试品溶液 ,定容至 10 mL,精密吸
取 0. 5 mL,稀释至 25 mL。吸取 10μL进样 ,测定盐
酸麻黄碱峰面积 ,结果其 RSD为 1. 51% 。
2. 7　加样回收率试验:精密吸取已知含量的咳喘平
口服液 4. 5 mL(含盐酸麻黄碱约 1. 878 mg )共 5
份 ,分别加入盐酸麻黄碱对照品 1. 41 mg (取储备液
1. 5 mL,低温挥尽溶剂 ) ,均按供试品溶液的制备方
法操作 ,定容至 10 mL,精密吸取 50μL,定容至 2
m L,吸取 5μL进样 ,测定盐酸麻黄碱的含量 ,计算
加样回收率 ,结果平均回收率为 96. 73% , RSD为
2. 27% (n= 5)。
2. 8　样品中麻黄碱的含量测定:取咳喘平口服液 ,
按以上方法测定 ,根据标准曲线计算样品中麻黄碱
的含量 ,结果见表 1。 色谱图见图 1。
表 1　咳喘平口服液中麻黄碱含量的测定 (n= 3)
Table 1　 Ephedrine in Ant iasthmatic Oral Liquid (n= 3)
批号 麻黄碱 / ( mg· mL- 1 ) RSD /%
000104 0. 424 1 1. 62
000204 0. 417 3 1. 75
001003 0. 357 6 2. 88
* -麻黄碱
* -eph ed rine
图 1　麻黄碱对照品 ( A)、咳喘平口服液 (B)
和阴性对照 ( C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of ephedrine
( A) , Antiasthmatic Oral Liquid (B) ,
and negative sample ( C)
3　讨论
　　麻黄系方中君药 ,测定其有效成分麻黄碱的含
量对咳喘平口服液的质量控制有重要意义。 试验中
对多种流动相进行了筛选 ,包括 0. 01 mol /L磷酸二
氢钾 -甲醇 ( 95∶ 5)、 0. 01 mo l /L磷酸二氢钾 -甲醇
( 85∶ 15)、乙腈-水 ( 1∶ 1,每 1 000 m L含磷酸二氢
钾 3. 4 g及十二烷基硫酸钠 1. 7 g )等 ,最终确定在
实验中所述色谱条件下麻黄碱与样品中其他组份达
到基线分离 ,并且缺麻黄阴性对照色谱中无干扰峰
出现。实验结果表明 ,采用 HPLC法测定咳喘平口
服液中麻黄碱的含量 ,灵敏度高、专属性强、标准曲
线线性范围宽、回收率稳定 ,因而是完全可行的。
References:
[1 ]　 Liang H X, Yu R X, Yang Q H, et al . Determination of
ephed rine, ps eudoephed rine and st rych nine in Jiufen San by
HPLC [ J] . Acta Pharm S in (药学学报 ) , 1990, 25( 11): 849-
853.
声　明
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《中草药》杂志编辑部
·165·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 2期 2004年 2月