全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1159·
芦笋多糖提取、单糖组分分析及定量测定
季宇彬1，陈学军2，汲晨锋1，成秉臣1，李明泽2
(1．哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研发中心，黑龙江哈尔滨150076；2．哈尔滨商业大学药物研究所
博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨150076)
摘要：目的提取芦笋多糖，纯化后分析其单糖组分并测定总糖，为今后芦笋多糖研究提供参考。方法水提醇
沉法提取粗多糖，Sevage法除蛋白，Hzoz脱色，高效毛细管电泳(HPCE)测定单糖组成，苯酚一硫酸法测定多糖。结
果 芦笋粗多糖主要单糖组成为木糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖，其质量分数分别为3．44％、7．92％、
10．52％、17．15％、41．85％。以单糖混合物为对照品测得粗多糖中总糖的质量分数为79．14％。结论高效毛细管
电泳分离度高，可用于单糖组分分析；苯酚一硫酸法实验操作简便，准确可靠，可用于芦笋多糖的测定。
关键词：芦笋；多糖；单糖组成；苯酚一硫酸法
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)08—1159一03
】Ⅵonosaccharidecompositionanalysisanditscontentde ermination
inpolysaccharideext actfromAsparagusofficinalis
JIYu—binl，CHENXue—jun2，JIChen—feng1，CHENGBing—chenl，LIMing—ze2
(1．CenterofResearchandDevelopmentofLifeSciencesandEnvironmentalSciences，HarbinUniversity
ofCommerce，Harbin150076，China；2．PostdoctalProgramme，InstituteofMateriaMedica，
HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveToanalyzethmonosaccharidecompositionnthepolysaccharideextractfrom
Asparagusof靠cinalis，determinethecontentofmonosaccharide，andprovidesomer ferencesforfurther
research．MethodsThem nosaccharidecompositionwasdeterminedbyHPCE．Phenol—sulfuricmethod
wasusedforthedeterminationof hecontentofmonofsaccharide．ResultsThemonosaecharide
compositioninpolysaccharidesfromA．彬；cinalisisXyl，Fru，Rha，Ara，andGal，theircontentswere
3．44％，7．92％，10．52％，17．15％，and41．85％，respectively．Thecontentofp01ysaccharideis
79．14％，takingthemixtureofmonosaccharidecompositionsasreferencesubstances．ConclusionHPCE
canbeusedtoanalyzethmonosaccharidecompositionnthepolysaccharideswithighprecisionof
separationandthemethodofphenol—sulfuricacidissimple，convenient，andreliable．
Keywords：AsparagusofficinalisLinn．；monosaccharidecompos tion；phenol—sulfuricacidmethod
芦笋AsparagusofficinalisLinn．，学名石刁
柏，又名龙须菜、文山竹、索罗罗、细百叶部，是百合
科天门冬属多年生草本植物。其含有皂苷、黄酮、多
种氨基酸、多种维生素、硒、锌、铁及蛋白质、糖等多
种营养成分。芦笋对高血压、心脏病、心动过速、疲
劳、水肿、膀胱炎、排尿困难等症均有一定疗效。有防
止癌细胞扩散的功能，对淋巴瘤、膀胱癌、肺癌、皮肤
癌及肾结石等有疗效[1]。国内外对芦笋的药用研究，
特别是防癌、抗癌研究逐渐增多。本实验对芦笋中的
多糖进行提取纯化、单糖组分分析及定量测定，为芦
笋多糖的开发利用提供参考。
1材料
752分光光度计(上海光谱仪器厂)；高效毛细
管电泳仪(BeckmanMDQ)。
L一(+)鼠李糖(进口分装，北京化学试剂公
司)；无水葡萄糖(AR，中国药品生物制品检定所)；
D一半乳糖(上海伯奥生物科技有限公司)；D一木糖
(国药集团化学试剂有限公司)；D一(一)阿拉伯糖
(AlfaAesar)；果糖(北京益利精细化学品有限公
司)；其他试剂为AR级；绿芦笋购自哈尔滨市透笼
农贸市场。
2方法与结果
2．1芦笋多糖提取纯化
2．1．1粗多糖提取[2]：取新鲜芦笋约1kg，洗净后
收稿日期：2006—03—08
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30400592，30300284)；黑龙江省自然科学基金项目(D2004—02)；哈尔滨市后备带头人基金项目
(2004AFXXJ030)
作者简介：季宇彬(1956一)，男，教授，博士后，博士生导师，从事抗肿瘤药物研究。Tel：(0451)84866001E—mail：JYB@hrbcu．edu．cn
万方数据
·1160· 中草瞒 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
加入95％乙醇1000mL打浆，室温下静置48h，以
除去单糖及其他醇溶性成分(生物碱、色素、苷类)，
药渣充分干燥后加入适量蒸馏水，90℃水煮3次，
每次3h。滤过后合并滤液，减压浓缩后加4倍量
95％乙醇(使醇终体积分数在75％～80％)，静置24
h后抽滤。真空干燥后得芦笋粗多糖。称质量2．9g，
提取率0．29％。
2．1．2多糖纯化c3~5]：取定量的芦笋粗多糖制成一
定质量浓度的多糖水溶液，加入氯仿一正丁醇(4：
1)，剧烈震荡20rain，离心(10rain，5000r／rain)。
取上层水相同法反复除蛋白8次后，氨水调节pH
8，缓慢滴加30％H20。至浅黄色，50℃水浴中放置
30rain。流水透析48h，蒸馏水透析24h，加入4倍
体积95％乙醇，充分搅拌后于4。C静置24h，弃上
清并抽滤，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚多次
洗涤，真空干燥后得淡黄色粉末状精制芦笋多糖。
2．2单糖组成分析
2．2．1衍生试剂的配制：称取cc一萘胺143．2mg和
NaBH。CN35mg，溶于450肛L无水甲醇中，再加入
41弘L冰醋酸，置于冰箱中待用[6J。
2．2．2 单糖的a一萘胺衍生口]：用重蒸水配成20
mg／mL的各种单糖对照品溶液，各取200肚L，加40
弘L衍生试剂置于安瓿管中封管，80℃恒温2h衍生
化。然后各加入三氯甲烷和重蒸水各1mL，反复离
心萃取3次，取上层水相滤过后，冷藏备用。
2．2．3多糖水解液的制备[8圆]：取纯化后的芦笋多
糖20mg，加入1mol／LH2S041 mL，封管100℃恒
温水解8h，冷却后用碳酸钡完全中和，放置过夜，
滤过，取200弘L，同上述单糖的衍生方法进行衍生。
2．2．4电泳条件：电压15kV；压力进样1．03×105
Pa，30S；柱温25℃；检测波长210nm；缓冲液：硼
砂缓冲液75mmol／L(pH10．5)；清洗液：0．1mol／
LHCl，0．1mol／LNaOH，重蒸水。
2．2．5 电泳分析将衍生化的对照品及样品液经
0．45tLm微孔滤膜滤过，然后进行毛细管电泳，分别
平行做3份，每份测3次，根据各吸收峰的峰面积来
计算各单糖组成的质量分数。将6个单糖对照品分
别进行电泳分析，得出各个单糖的出峰时间，与混合
单糖对照品电泳谱图对照，鉴别出混合单糖对照品
电泳谱图中各个单糖对照品的电泳峰。将芦笋多糖
的谱图与混合单糖对照品谱图对照，根据出峰时间
的对应关系，可以确定芦笋多糖的单糖组成，见图
1。结果表明，芦笋多糖以半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、
果糖、木糖为主组成，其质量分数分别为41．85％、
0蔓⋯n一置，k支∥咒
17．15％、10．52％、7．92％、3．44％，还有少量的葡萄
糖和1种未知成分(可能为岩藻糖)。
2．3多糖的测定
2．3．1苯酚溶液的制备：取苯酚50g，加入铝片
0．5g，碳酸氢钠0．025g，常压蒸馏，取182℃馏份。
精密称取5g定容至100mL，充分溶解混匀，置棕
色瓶中放入冰箱备用。
2．3．2样品溶液的制备：精密称取纯化芦笋多糖
100mg，置100mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，放入
冰箱中备用。
2．3．3标准曲线的制备：精密称取105℃干燥至恒
重的木糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖对照品各
50mg，置50mL量瓶中，加蒸馏水至刻度。按芦笋
多糖中单糖组成比例配制单糖混合对照品溶液(质
量浓度1mg／mL)。精密吸取此溶液0、0．5、l、1．5、
2、2．5、3mL，分别置于50mL量瓶中，蒸馏水定容，
摇匀。各精密吸取1mL置干净试管中，各管再加入
5％苯酚1mL，混匀，迅速加入浓硫酸5mL，摇匀，
静置5min后，放入85℃水浴中加热20min，取出
冷却置室温。在49012m处测定吸光度。以质量浓度
(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，
经回归处理得线性回归方程为A一0．0059C一
0．0085，R2—0．9984。
2．3．4精密度试验：精密吸取1mg／mL的混合单
糖对照品溶液2mL，置50mL最瓶中，加蒸馏水至
刻度，吸取此溶液1mL，测定吸光度，连续测定5
次，RSD值为0．2％。
2．3．5 回收率试验：精密称取lmg／mL样品溶液
5mL，置50mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，使质量浓
度为0．1mg／mL，分别吸取此溶液0．5mL于5支
玻璃试管中，再分别吸取对照品溶液(质量浓度分别
为0．01、0．02、0．03、0．04、0．05mg／mL)各0．5mL
于玻璃试管中，加入苯酚和硫酸测吸光度(以蒸馏水
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1161·
1mL为对照)，结果回收率98．65％，RSD值0．6％。
2．3．6样品测定：吸取样品溶液3mL(3份)，分别
置于50mL量瓶中，蒸馏水定容，吸取1mL置于试
管中，各管再加入5％苯酚1mL，混匀，迅速加入浓
硫酸5mL，摇匀，放入85~C中加热20min，取出冷
却置室温。在490nm处测定吸光度。结果见表1。
表I芦笋多糖的测定结果
Table1 DeterminationofpoIysaccharideinA．officinalis
3讨论
本实验先后采用18、16、15、12、5kV不同电压
条件，结果在15kV电压下电泳电流稳定，谱图清
晰，分离效果好。采用HPCE测定芦笋多糖的单糖
组分，其缓冲盐浓度和pH值对单糖组分的分离度
影响较大，选用硼砂作缓冲溶液，分别配制50
mmol／L，pH9．5、pH10、pH10．5；75mmol／L，pH
9．5、pH10、pH10．5；100mmol／L，pH9．5、pH10、
pH10．5的硼砂缓冲液，通过比较发现，75mmol／
L，pH10．5的硼砂缓冲液分离度最好。
本实验采用水提醇沉法提取芦笋粗多糖，运用
Sevage法除蛋白，H。O。脱色，纯化后的多糖以
HPCE分析单糖组成，苯酚一硫酸比色法测定多糖。
通过芦笋多糖和混合单糖的毛细管电泳图谱比较，
可以鉴别出大部分单糖组分。毛细管电泳技术对多
糖组分分离效果清晰、时间短、定量准确、进样量少，
获得了较好的结果。按照各单糖的质量分数制作混
合标准曲线，苯酚一硫酸法测芦笋多糖，测定结果更
接近真实值。
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红花黄色素提取工艺的研究
初 阳1’2，宋洪涛卜，陈大为2，李丹2，罗轶凡2
(1．南京军区福州总医院药学科，福建福州 350025；2．沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳110016)
摘要：目的对红花黄色素的提取工艺进行优化。方法采用单因素试验法和正交试验法，以红花黄色素的提取
率为主要考察指标，以红花黄色素在固形物中的质量分数及总出膏率为参考指标，对提取工艺进行考察。结果红
花黄色素的最佳提取工艺：以12倍量水浸泡30min，70。C下动态提取2次，每次20min。结论该工艺可提高红花
中红花黄色素的提取率。
关键词：红花；红花黄色素；正交试验
中图分类号：R284．2；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)08—1161—04
ExtractingprocessforaffloweryellowinCarthamustinctorius
CHUYan91”，SONGHong—ta01，CHENDa—wei2，LIDan2，LUOYi—fan2
(1．DepartmentofPharmacy，FuzhouGeneralH spitalofNanjingMilitaryRegion，Fuzhou350025，China；
收稿日期：2005—1卜08
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30200363)；辽宁省博士启动基金资助项目(2001102042)
作者简介：初阳(1980一)，女，辽宁沈阳人，2003级硕士研究生。Tel：(024)23986318E—mail：chuyan91980@yahoo．com．cn
*通讯作者宋洪涛Tel：(0591)83707254E—mail：sohoto@sohu．eom
万方数据
芦笋多糖提取、单糖组分分析及定量测定
作者： 季宇彬， 陈学军， 汲晨锋， 成秉臣， 李明泽， JI Yu-bin， CHEN Xue-jun， JI Chen-
feng， CHENG Bing-chen， LI Ming-ze
作者单位： 季宇彬,汲晨锋,成秉臣,JI Yu-bin,JI Chen-feng,CHENG Bing-chen(哈尔滨商业大学,生命
科学与环境科学研发中心,黑龙江,哈尔滨,150076)， 陈学军,李明泽,CHEN Xue-jun,LI
Ming-ze(哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站,黑龙江,哈尔滨,150076)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
被引用次数： 10次
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