全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1253·
Ⅳ区(保留时间约为49．2～67．7rain)：峰15～20，
构成5+6+3+6的图谱结构，主要共有峰集中在
I、11区。I区为一组排列较紧密的强吸收峰群，1
号峰最强，峰值比例大约为峰1>峰4>峰2≈
峰3≈峰5。Ⅱ区为一组排列较疏，分离较佳的强吸
收峰群，峰10最为突出，为共有峰的第一大峰，峰
10、8、6相对比值较稳定，峰值比例大约为峰10>峰
8>峰6>峰11≈峰7≈峰9。Ⅲ区为一组峰值比例
较稳定的3峰群，经对照品对照峰13为槲皮苷峰，
峰值比例大约为峰13>峰12>峰14。Ⅳ区为一组
分离度较差的弱峰群。
2．5．3指纹峰相似度分析：采用国家药典委员会中
药指纹图谱相似度软件2004A计算均值相似度，结
果见表3。表明不同批次的阳春砂仁相似度较高。
表3阳春砂仁药材指纹图谱相似度结果
Table3 SimilarityofHPLCfingerprint
offruitsofA．villosum
编号 相似度 编号 相似度
1 0．937 10 0．947
2 0．977 11 0．954
3 O．950 12 0．967
4 0．960 13 0．943
5 0．962 14 0．994
6 0，979 15 0．993
7 0．994 16 0．975
8 0．980 17 0．995
9 0．945 18 0．986
3讨论
试验用甲醇一水，甲醇一2％醋酸，甲醇一0．05％磷
酸的梯度洗脱作为流动相，结果甲醇一2％醋酸系统
分离效果较好。用不同的检测波长检测及用光二极
管阵列检测器分析，在260nm波长处指纹峰较多，
响应值均较大，而且基线较平稳，故选择260nm作
为指纹图谱检测波长。
供试品溶液的制备采用不同含水量的甲醇溶液
作为提取溶媒，结果含一定量水的甲醇液对极性较
大的组分提取效果较好，但供试品溶液杂质较多，较
黏稠，不利于浓缩。经试验用甲醇提取杂质较少，提
取3次，可基本提取完全，提取的药液可浓缩后进
样，某些相对质量分数较小的组分能在指纹图谱中
显示出来，体现阳春砂仁的总体指纹特征面貌。通过
比较回流提取及超声处理方法，超声处理方法简便，
提取效果较好。通过比较样品直接用甲醇提取及先
用石油醚(60～90℃)去脂后再用甲醇提取的方法，
结果石油醚(60～90℃)去脂对指纹峰基本无影响，
为操作方便，采用样品直接用甲醇提取的方法。
本试验测定了18批阳春砂仁的甲醇提取物，
共有20个主要特征峰，总共有峰峰面积平均值为
(90．58±3．59)％，各批样品间主要共有峰的相对保
留时间较稳定，峰值比例较稳定，以20个共有峰作
为指标，精密度、稳定性、重现性试验良好，因此可初
步拟订为阳春砂仁的甲醇提取物成分指标成分群。
相似度分析结果表明，广东省阳春市产的18批阳
春砂仁HPLC指纹图谱相似度较高，达到0．943～
0．995，表明阳春砂仁甲醇提取物的HPLC图谱，具
有指纹图谱的特征意义，为阳春砂仁药材的质量亦
积累了一些的数据，具有一定的参考意义。
本研究初步建立了阳春砂仁HPLC指纹图谱
研究方法，对不同品种的砂仁(阳春砂、绿壳砂、海南
砂)、不同产地及不同采收时期砂仁HPLC指纹图
谱特征性的区别，还有待于进一步的深入研究。
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HPLC法测定鱼腥草不同生长季节、不同药用部位中黄酮类成分
黄琴伟1，张文婷2，赵维良2+
(1．浙江中医药大学药学院，浙江杭州 310053；2．浙江省药品检验所，浙江杭州310004)
摘要：目的 以芦丁、金丝桃苷、槲皮苷为指标成分，建立了RP—HPLC法对鱼腥草中黄酮类成分进行定量测定，
并考察鱼腥草不同生长季节、不同药用部位黄酮类成分的量。方法 利用高效液相色谱法梯度洗脱。色谱条件：
收稿日期：2006—12-21
作者简介：黄琴伟(1983一)，女，浙江省温州市人，浙江中医药大学生药学硕士。Tel：(0571)86459414E—mail：qingwei_h@163．com
*通讯作者赵维良
万方数据
·1254· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38·卷第8期2007年8月
AgilentZORBAXSB—C，8分析柱(250mm×4．6mm，5肛m)，柱温25℃，流动相为乙腈一0．4％磷酸溶液梯度洗
脱，体积流量1．0mL／min，检测波长256nm。结果芦丁、金丝桃苷、槲皮苷质量浓度与峰面积呈良好线性关系，
线性范围分别是：芦丁0．033440．5344弘g，r一1(n一6)；金丝桃苷0．166O～2． 560／lg，r一1(，z一6)；槲皮苷
0．3805～6．0880“g，r一1(n一6)；回收率芦丁为103．3％，金丝桃苷为106．6％，槲皮苷为107．6％(∞=9)。结论
本方法分离度好，稳定，适合于作为鱼腥草的质量控制方法。黄酮类成分的量高低是：花>叶>果实>地上茎，地下
部分基本无黄酮类成分。花期各成分的量相对高于果实期。
关键词：鱼腥草药材；黄酮；芦丁；金丝桃苷；槲皮苷；药用部位；高效液相色谱法
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)08—1253—03
DeterminationofflavonoidsindifferentfractionsofHerbaHouttuyniae
collectedinvariousseasonsbyHPLC
HUANGQin—wei1，ZHANGWen—tin92，ZHAOWei—lian92
(1．CollegeofPharmacy，ZhejiangUniversityofTraditionalChineseMedicine，Hangzhou310053，China；
2．ZheiiangProvincialInstituteforDrugControl，Hangzhou310004，China)
Keywords：HerbaHouttuyniae；flavonoids；rutin；hyperin；quercitrin；medicalfractions；HPLC
鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia
cordataThunb．的新鲜全草或干燥地上部分r1]。花
期5～8月，果期7～8月，全草供药用，清热解毒、
利尿消肿。鱼腥草中含槲皮素、槲皮苷、芦丁、金丝桃
苷等黄酮类成分。黄酮具有抗肿瘤、抗过敏等多种疗
效。因此对鱼腥草中的黄酮类成分进行研究具有重
大意义。目前鱼腥草中黄酮类成分的测定方法主要
是高效液相色谱法口~5]，并且不同季节、不同组织部
位黄酮类成分量的比较分析尚未见报道。本实验首
次建立了HPLC法同时测定鱼腥草中芦丁、金丝桃
苷和槲皮苷的测定方法，并首次考察了鱼腥草不同
生长季节、不同药用部位上述3种黄酮类成分的量，
为鱼腥草的合理采收提供依据。
1仪器与试药
1．1 仪器：Agilent1100系列高效液相色谱仪：
G1379A脱气机，G1311A四元泵，G1313A自动进
样仪，G1316A柱温箱，Chemstation色谱工作站；
TU一1901型紫外一可见分光光度计(JL京普析通用
公司)；SIGMANSKl—15K型高速冷冻离心机(德
国Sigma公司)。
1．2 试剂、样品：芦丁对照品(供定量测定用，批
号：0080—9705，P。O。减压干燥24h)中国药品生物制
品检定所提供。金丝桃苷对照品(供定量测定用，批
号：1521—200001，P。05减压干燥24h)中国药品生
物制品检定所提供。槲皮苷对照品(供定量测定用，
批号：111538—200403，P：0。减压干燥24h)中国药
品生物制品检定所提供。鱼腥草为浙江省药品检验
所人工栽培品并经笔者鉴定为三白草科植物蕺菜
Houttuyniacord taThunb．的新鲜全草。乙腈为色
谱纯，磷酸、甲醇均为分析纯。
2方法
2．1 色谱条件：AgilentZORBAXSB—C18(250
mm×4．6mm，5弘m)色谱柱；柱温25^C；体积流
量1．0mL／min；检测波长：256nm；流动相A为乙
腈，流动相B为0．4％磷酸溶液；进样量：20弘L；梯
度洗脱条件：O～35min，流动相A为85％，35～55
min，流动相A为85％一78％，55～60min，流动相
A为78％．60～70min，流动相A为78％一20％，
70--75min，流动相A为20％一85％，75～80min，
流动相A为85％。
2．2 混合对照品的制备：精密称取芦丁对照品
13．36mg于100mL的量瓶中，用50％甲醇溶解
并定容至刻度。精密称取金丝桃苷对照品13．28mg
于100mL的量瓶中，用50％甲醇溶解并定容至刻
度。精密称取槲皮苷对照品15．22mg于100mL的
量瓶中，再分别精密加入上述芦丁对照品溶液、金丝
桃苷对照品溶液10、50mL，用50％甲醇定容至刻
度即得芦丁、金丝桃苷、槲皮苷质量浓度分别为
13．36、66．4、152．2>g／mL的混合对照品溶液。
2．3供试品的制备：鱼腥草全草阴干后碾碎，精密
称取生药0．5g，加入50％甲醇25mL，称定质量，
水浴回流45min，取出，放冷，再称定质量，用50％
甲醇补足减失的质量，摇匀，离心，取上清液，即得。
2．4线性关系考察：精密吸取2．2项下的混合对照
品溶液2．5、5、10、20、30、40肛L进样，以色谱峰面
积(y)对进样量(X)进行回归，计算回归方程，芦
丁、金丝桃苷与槲皮苷的线性方程分别为Y=
1 901．1X一0．7631，r一1，线性范围为0．0334～
0．5344／29；y一27 7X+1．7554，r一1，线性范围
为0。166～2。656／ag；Y一2737．2X+19．139，
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1255·
r一1，线性范围为0．3805～6．0880_ug。
2．5精密度试验：精密吸取2．2项下的混合对照
品溶液20pL，在上述色谱条件下，重复进样6次，
分别计算芦丁、金丝桃苷、槲皮苷的峰面积RSD
值，芦丁RSD为0．12％、金丝桃苷RSD为
0．10％、槲皮苷RSD为0．08％，表明仪器进样精密
度良好。
2．6 重现性试验：精密称取果实期鱼腥草全草6
份，每份0．5g，照供试品溶液制备方法进行提取处
理后，精密吸取20肛L在上述色谱条件下进行分
析，计算峰面积的RSD值，芦丁RSD为1．87％、金
丝桃苷RSD为1．79％、槲皮苷RSD为2．55％，结
果表明使用该法处理样品的重现性良好。
．k。丘．1；
1一声】 2一金丝桃苷3槲皮苷
1-rutin2-hyperrin3一quercitrin
图1 对照品(A)和鱼腥草叶(B)色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsfreferencesubstance(A)
andleavesofHerbaHouttuyniae(B)
2．7稳定性试验：果实期鱼腥草全草制备后，分别
在0、5、9、16、20、24h测定芦丁、金丝桃苷、槲皮苷
的峰面积，结果表明芦丁、金丝桃苷、槲皮苷在24h
内稳定性良好，RSD分别为2．02％，2．46％，
1．92％。
2．8加样回收率试验：精密称取果实期鱼腥草全草
9份，每份0．25g，3份为一水平，分别精密加入2．2
项下的混合对照品溶液5、10、15mL混合对照品，
用50％甲醇补足至25mL。按供试品溶液制备项
下处理，在上述色谱条件下进行分析，结果芦丁平均
回收率103．3％，RSD为3．27％。金丝桃苷平均回
收率106．6％，RSD为3．85％。槲皮苷平均回收率
107．6％，RSD为2．77％。
2．9不同季节、不同药用部位样品测定：收集不同
生长季节鱼腥草的地下部分、地上茎、叶、花、果实，
按供试品溶液制备项下处理，在上述色谱条件下进
行分析，用外标法计算鱼腥草不同药用部位的芦丁、
金丝桃苷、槲皮苷的量，结果见表1。
3讨论
3．1实验通过对鱼腥草分别采用甲醇回流和50％
甲醇回流，结果50％甲醇溶出率更高而且峰形更
对称。对溶剂体积和回流时间进行考察优化，选用供
试品精密加入50％甲醇25mL，回流45rain。
表1不同季节、不同药用部位样品鱼腥草黄酮类成分
测定结果(咒一2)
Table1 Determinationofflavonoidsindifferentfractions
ofHerbaHouttuyniaecollectedindifferent
seasons(一一2)
3．2在选择流动相时，用甲醇～0．4％磷酸溶液进
行梯度洗脱，由于芦丁和金丝桃苷极性相似，分离效
果不佳，换成乙腈一0．4％磷酸溶液为流动相进行梯
度洗脱后，芦丁和金丝桃苷能获得较好的分离度。
3．3实验同时也对鱼腥草中的槲皮素的量进行测
定，因为样品未水解，所以基本测不出槲皮素，故取消
了对槲皮素的测定，只测芦丁、金丝桃苷和槲皮苷。
3．4本实验分别在5、7、8、10月采集鱼腥草，主要
比较了花期(5月)和果实期(7、8月)以及各药用部
位黄酮类成分的量。从本实验的结果看出：地下部分
基本无黄酮类成分，黄酮类成分量高低是：花>叶>
果实>地上茎。花期各成分量相对高于果实期。尤
其是花中的金丝桃苷和花期叶中的槲皮苷的量最
高。7月份采的果实是幼果，8月份采的果实是成熟
果，从实验结果来看：幼果的量高于成熟果。从上述
多条规律可以得出花期采集的鱼腥草植株黄酮类量
最高，其次是果实期。从黄酮类成分考虑，花期为最
佳采收季节。
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万方数据
HPLC法测定鱼腥草不同生长季节、不同药用部位中黄酮类成
分
作者： 黄琴伟， 张文婷， 赵维良， HUANG Qin-wei， ZHANG Wen-ting， ZHAO Wei-liang
作者单位： 黄琴伟,HUANG Qin-wei(浙江中医药大学药学院,浙江,杭州,310053)， 张文婷,赵维良
,ZHANG Wen-ting,ZHAO Wei-liang(浙江省药品检验所,浙江,杭州,310004)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(8)
被引用次数： 6次

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