全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1465·
IRv然(cm_1)：3427，3074，2875，2540，2227，
1653，1587，1498，1410，1340，1309，1255，
1030，858；1H—NMR(Me2CO—d6，400MHz)占：9．75
(1H，S，H一7)，7．60(1H，d，J一2．0Hz H )，7．34
(1H，d，，一2．0Hz，H一6)；”C—NMR(Me2CO—d6，100
MHz)艿：190．2(d，C一7)，150． (s，C一4)，146．7(s，C一
5)，130．8(s，C一1)，128．1(d，C一6)，113．7(d，C一2)，
110．1(s，C一3)。参考文献数据[儿3鉴定化合物x为3一
溴一4，5一二羟基苯甲醛。
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白及多糖硫酸酯化前后理化性质和结构的比较研究
陈景耀h2，张卫明3，芮海云2，陆长梅2，蒋继宏1，昊国荣2。
(1．江苏省药用植物生物技术重点实验室，江苏徐州221116；2．南京师范大学生命科学学院，江苏南京210097；
3．南京野生植物综合利用研究院，江苏南京210042)
多糖的化学修饰对拓展多糖的生物学活性意义
重大，特别是硫酸酯化以后，其保护免疫细胞、减少
艾滋病毒(HIV)感染及抑制乙肝病毒等多种生物学
效应，受到药物研究人员的极大关注[1’2]。在分离、纯
化出白及Bletillastriata(Thunb．)Reichb．f．多
糖的基础上[3]，对白及多糖的硫酸酯化修饰的优选
工艺进行了实验研究，确定了合适的硫酸酯化工
艺[4]。为了进一步阐明白及多糖在酯化后部分理化
性质的变化，本实验通过高效凝胶渗透色谱法、
UV、IR、核磁共振等方法比较测定了白及多糖酯化
修饰后前后相对分子质量及其分布、溶解度及化学
结构的变化，旨在为随后的生物学活性研究及构效
关系的阐述提供理论依据。
1材料和仪器
1．1材料：白及多糖(BSPS)按文献方法[31制备。
1．2 试剂：DEAE一52为Whatman公司产品，
SephadexG一100为Pharmacia公司进1：3分装产品，
标准相对分子质量多糖DextranT系统为Pharma—
cia公司产品，TFA为Fluka公司产品，其他试剂均
为国产分析纯。
1．3仪器：HPlloo高效液相色谱仪，FT—IRNexus
670型红外光谱仪(Nicolet公司)，Lambda17紫外
可见光扫描仪(Perkin—Elmer公司)，BrukerAV一
500核磁共振仪，冷冻干燥器(日本岛津公司)，3k30
低温调整离心机(Sigma公司)。
2 实验方法
2．1 白及多糖硫酸酯的制备与分离纯化：样品按照
文献的优化工艺制备[3．引，经DEAE一52吸附，先用
收稿日期；2005—12—2．5
基金项目：国家科技部科研院所科技开发专项资金(2002EGl63191)；江苏省药用植物生物技术重点实验室开放基金(KJS02118)
作者简介：陈景耀(1974一)，男，江苏泗阳人，硕士研究生，主要从事植物化学及天然活性物质的研究。
Tel：(025)83598216E—mail：musiclike@163．com
*通讯作者吴国荣
万方数据
·1466· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
0．02mol／LNaCI溶液洗脱，硫酸蒽酮法检测，未见
多糖洗脱峰。再以0．02～4mol／LNaCl溶液梯度洗
脱，在洗脱液浓度为1．6mol／L左右得单一多糖洗
脱峰，收集后，再经SephadexG一100色谱，蒸馏水洗
脱，硫酸蒽酮法跟踪检测得单一对称的多糖峰，收
集、透析、冷冻干燥得白及多糖硫酸酯(BSPSS)。浊
度法测定硫酸基取代度[6‘7]。
2．2纯度、相对分子质量及其分布测定[8]：Shodex
0HpakSB一802HQ不锈钢色谱柱(300mmx7．8
mm)；流动相为0．1mol／L磷酸盐缓冲液，pH6．8；
体积流量0．5mL／min，柱温459C；进样量20tLL；
标准品是DextranT一10、DextranT一40、DextranT一
70、DextranT一150、DextranT一500、DextranT一
2000；检测器为HPll00折光示差检测器；HPll00
色谱数据处理工作站。
分别将已知相对分子质量的T系列多糖标准
品和样品BSPS、BSPSS用流动相配制成3mg／mL
的溶液，进样，分别记录下各自的示差色谱图，用分
析软件以标准多糖相对分子质量的对数lgMw对保
留时间tn进行回归处理求出标准曲线，对照标样的
回归曲线，分别算出样品的重均相对分子质量、数均
相对分子质量及相对分子质量分布。
2．3紫外可见光谱分析：称取样品BSPS、BSPSS，
用双蒸水溶解，扫描范围190～500nm。
2．4红外光谱：分别称取BSPS、BSPSS各3mg，
KBr压片，扫描范围4000～400cm_。。
2．5 13C—NMR、1H—NMRill0定：溶剂为重水(D：O)，
测定温度为313K(40℃)，样品质量浓度为40mg／
mI。。
3结果与分析
3．1 BSPS、BSPSS的理化性质：BSPS,BSPSS分别
经柱色谱纯化、冷冻干燥后，皆为白色纤维状固体，
BSPS易溶于热水，略吸潮；BSPSS极易溶于冷水，
暴露空气中一段时间即成液滴。浊度法测定，BSPS
阴性，不含硫酸基，BSPSS的硫酸基取代度为1．31。
硫酸基的取代对多糖一级结构和高级结构皆会产生
较大的影响，影响氢键的形成及电荷的分布，成为聚
阴离子。提高了BSPSS的溶解性，也为其新的生理
活性提供了物质基础。
3．2纯度鉴定：经SephadexG一100、高效液相凝胶
渗透色谱法(HPGPC)测定，BSPS和BSPSS均为单
一对称峰，说明均为纯多糖。
3．3 相对分子质量及相对分子质量分布的测定：经
HPGPC测得BSPS重均相对分子质量为9．9658×
104，相对分子质量分布为2．48，BSPSS相对重均分
子质量为9．0607×104，相对分子质量分布为1．32。
表明酯化过程中多糖有部分降解，相对分子质量变
小，相对分子质量分布变窄，均～度提高。
3．4紫外可见光光谱分析：BSPS在260和280nm
处无吸收峰，表明不含蛋白质和核酸，而其经过酯化
后的BSPSS在262．5nm附近有一新的吸收峰产
生，提示接上了硫酸基团。
3．5 红外光谱分析：BSPS与BSPSS整体谱相似，
二者在3600～3200cm．1为一组较宽的糖的特征
峰，是糖的羟基O—H的伸缩振动吸收峰。810：09及
875．88cm叫附近吸收峰是甘露糖(Man)残基的特
征吸收峰，说明含有Man，757cnl_1附近为D一葡萄
糖(D—Glc)吡喃环对称伸缩振动的吸收峰，与以往
报道白及多糖为葡甘聚糖相符曲]。在896cm_1有明
显的吸收峰，844cm叫附近未见明显吸收峰，可知吡
喃糖的异头碳主要为B型。2929．73cm-1是亚甲基
(一CH：一)的C—H伸缩振动峰，是GIe和Man单元的
C。的特征吸收峰。2888．05cm_1为一CH。的C—H伸
缩振动峰，同时在1380cm“附近也出现了甲基的
C—H变角振动吸收峰，表明含有甲基。1731．43
em_1为羰基的C=O伸缩振动的吸收峰。1150
cm叫是醚键C一0一C的C一0伸缩振动吸收峰。除此
以外BSPSS的红外光谱与BSPS相比，也出现了一
些明显的变化，1255和822．44cm-1为修饰后新产
生的吸收峰，是由一O—SO。二的S—O和C—O—S伸缩振
动产生的。表明BSPS经过酯化反应已经接上了硫
酸基团。
3．6核磁共振(13C—NMR和1H～NMR)谱分析：据参
考文献报道[10~】，BSPS的13C—NMR谱中，艿
102．416和占98．995为D—Glc的异头碳信号，为p—
D—G1c和a～D—Glc，艿i00．085为B—D—Man的异头碳
信号，BSPS的1H—NMR中占5．4944为o【一D—Glc异
头氢的质子峰，d4．754～4．930为B—D—Man的异头
氢的共振峰，艿4．51～4．67处的共振峰是|3一D—GIc
的异头氢质子峰。就构型而言，13C—NMR和1H—NMR
分析的结论是一致的。艿20．3应为乙酰基一COCH。
的振动峰，同时在艿172处可见对应的羰基峰，说明
含有乙酰基，与红外光谱结论一致，具体连接位置有
待进一步确定。根据各相关化学位移值，根据BSPS
的13C—NMR分析，各残基的连接方式为1，6一linked
Glc、1，4-1inkedGlc和l，4-linkedMan，根据目前的
数据尚不能确定是否含有支链，含有较多的1，4一
linkedGlc，l，4-linkedMan；1，6一linkedGlc较少。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年lo月·1467·
比较BSPS和BSPSS的碳谱和氢谱，发现在酯化
后，BSPS碳谱上的化学位移艿60左右的一CH。一共振
峰消失，在BSPSS共振谱上移到了艿66．45～68．8
处，提示。1，4-linkedGlc和1，4-linkedMan的C一6
上的羟基被硫酸基取代，化学位移向低场移动，C一6
位上的羟基空间位阻较小，比较活泼，所以一般硫酸
酯化容易在C一6位发生取代。酯化后异头氢的共振
峰都不同程度的向低场移动，可能是由于酯化后糖
链变得更加舒展，暴露出较多的羟基，容易与溶剂形
成氢键，使得屏蔽效应降低，其中硫酸基起了重要的
作用，同时由于硫酸基的影响，各基团的化学环境的
改变使得其”C—NMR共振谱峰相对较弱，难以详细
解析。
4讨论
‘物质的化学结构是其性质和功能的基础，多糖
的结构测定是比较困难的，但是解析多糖的低级的
空间结构，对于明确多糖的生物学功能具有重要的
意义。
白及多糖酯化后相对分子质量变小，相对分子
质量分布呈现变窄趋势，变得相对均一。通过紫外光
谱除了可以看到多糖的特征吸收在190nm附近，
酯化后还看到增加了硫酸基的吸收峰。对酯化前多
糖的红外吸收谱分析，可以对部分糖残基的种类和
构型进行初步的判断，酯化后也能看出产生了新的
硫酸基吸收峰。通过碳谱和氢谱的分析，初步得出白
及多糖由1，6-linedGlc，1，4-linedGlc和1，4-linked
Man连接而成，酯化后硫酸基接在C一6上。要获取
其更多的结构信息，准确清晰的阐述其更为具体的
结构特征还需采取多种方法进一步研究。通过酯化
前后的比较，发现硫酸酯化引起了白及多糖多种理
化性质及结构的变化，而这些为研究多糖的构效关
系提供了很多基础信息。
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(广西医科大学化学教研室，广西南宁 530021)
水黄皮Pongamiapinnata(L．)Merr．为豆科水黄皮属的半红树植物[¨，是广西5种半红树植物
收稿日期：2005一12—24
基金项目：教育部2003年春晖计划资助项目；广西科学基金资助项目(0342003—4)
作者简介：黄欣碧(1972一)，女，广西德保人，执业药师，主管药师。广西医科大学2002级研究生，主要从事天然药物的研究。
Tel：(0771)3044529E—mail：gxnnhxb930@sohu．corn
*通讯作者龙盛京Tel：(0771)5358827E—mail：shjlong@126．com
万方数据
白及多糖硫酸酯化前后理化性质和结构的比较研究
作者： 陈景耀， 张卫明， 芮海云， 陆长梅， 蒋继宏， 吴国荣
作者单位： 陈景耀(江苏省药用植物生物技术重点实验室,江苏,徐州,221116;南京师范大学生命科学学
院,江苏,南京,210097)， 张卫明(南京野生植物综合利用研究院,江苏,南京,210042)， 芮
海云,陆长梅,吴国荣(南京师范大学生命科学学院,江苏,南京,210097)， 蒋继宏(江苏省药
用植物生物技术重点实验室,江苏,徐州,221116)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(10)

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