全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·521·
质有生理盐水、适宜体积分数的乙醇和聚乙二醇等，
本研究考虑到木兰脂素的溶解性能，选择40％乙醇
作为接受介质，获得了不同皮肤模型的差异性试验
结果。有关40％乙醇作为接受介质的适宜性有待进
一步研究。
动物去毛时需仔细剪除并不破坏到皮肤，皮肤
用手术刀小心剥离后置15倍放大镜下观察有无破
损或病变。实验用皮肤最好现取现用，若需保存，则
要展平，用10％的甘油浸润，可以防止冰晶形成，保
护皮肤细胞完整。再置密封性好的塑封袋内，于一20
℃以下冰箱中保存备用。临用前取出，放置时间不宜
过长，一般不超过1个月。
以8种皮肤作为透皮实验材料对穴贴定喘膏的
透皮吸收进行研究，发现其体外释药为一线性递增
过程，符合零级释放。
硝酸纤维素膜是一种亲水性膜，肉豆蔻酸异丙
酯作为一种亲脂性成分用来浸渍硝酸纤维素膜，增
加脂质结构，尽可能模拟角质层限速。经肉豆蔻酸异
丙酯浸渍的硝酸纤维素膜渗透性远大于其他皮肤，
其垂现性好、易操作，可用于含亲脂性成分中药透皮
贴剂基质处方的预筛选，能否作为中药经皮给药制
剂的体外扩散试验评价体系最合适的皮肤模型，有
待进一步的实验验证。
References：
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HPLC法测定侧柏叶及其制剂侧柏V号胶囊和异海松酸胶囊中异海松酸
程立方1，崔秀君2，马海勇3
(1．山东省中医药研究院，山东济南250014；2．济南市妇幼保健院，山东济南250001；
3．南京中医药大学，江苏南京210046)
摘要：目的建立异海松酸的HPLC测定方法，控制侧柏叶及其制剂侧柏V号胶囊和异海松酸胶囊的质量。方法
采用高效液相色谱法。色谱条件：KromasilC18柱(200mm×4．6mm，5Mm)；流动相：甲醇一水一冰醋酸(60l 37：3)；
体积流量：1mL／min；柱温：25℃f检测波长：231nm，迸样量：10gL。采用外标法计算样品中异海松酸的质量分
数。结果 异海松酸的线性关系范围为1．25～10．00Mg，回归方程为Y一66214X+2487．9，r一1．000。平均回收
率为95．8％，RSD为2．7％(挖一5)。侧柏叶药材中异海松酸的测定结果分别为3．09、3．20、3．56mg／g，侧柏V号胶
囊的测定结果分别为10．39、9．67、10．99mg／g，异海松酸胶囊的测定结果分别为553．89、541．50、528．83mg／g。结
论该方法简便、准确、分离效果好、无干扰，可用于侧柏及其胶囊的质量评价。
关麓词：侧柏l侧柏V号胶囊|异海松酸胶囊；异海松酸；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2007)04—0521—03
DeterminationofisopimaricacidnleavesofPlatyd!adusorientalisndtspreparations
C：ebaiNO．VCapsulaandlsopimaricAc dCapsulabyHPLC
CHENGLi—fan91，CUIXiu—jun2，MAHai—yon93
(1．ShandongAcademyofTraditionalChineseMedicine，Jinan250014，China；2．JinanMaternityandChildrenHealth
Hospital，Jinan250001，China；3．NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210046，China)
Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofisopimariecidnthe
leavesofP／atycladusorientalisndtspreparationsCebaiNo．VCapsulaandIsopimaricAc dCapsulato
evaluatethequalityofthem．MethodsHPLCMethodwaseveloped．KromasilC】8(200mm×4．6mm，
5肛m)columnwasusedandthemobilephase：methylalcohol—water—aceticacid(60：37：3)，float
收稿日期：2006—07—12
基金项目：山东省中医管理局科技计划项目(ZYl9981018)
作者简介：程立方(1965一)，男，山东济南人，副研究员，从事中药及复方活性成分与质量控制研究工作。
Tel：(0531)86671401E-mail：clf01@163．com
万方数据
·522· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月
rate：1mL／min，temperature：25℃，wavelength：231nm，injectedvolume：10弘L．Contentofisopimaric
acidinsampleswacalculatedbyexternalstandard．ResultsThelinearityelationshipofiso imaricacid
wasgoodintherangeof1．25—10．00弘g．Theequationofstandardcurve：Y=66214X+2487．9，r一
1．000．Theav ragerecoverywas95．8％，RSD一2．7％(，z一5)．Thedeterminationresultsofisopimaric
acidinthreebatchesofP．orientaliswere3．09，3．20，and3．56mg／g；threebatchesofCebaiNo．VCap—
sulawere10．39，9．67，and10．99mg／g；threebatchesofIsopimaricAc dCapsulawere553．89，541．50，
and528．83mg／g．ConclusionThemethodisreliable，simple，andprecise，whichcouldbeusedforthe
qualitycontrolofP．orientalisanditcapsules．
Keywords：Platycladusorientalis(L．)Franco；CebaiNo．VCapsula；IsopimaricAc dCapsula；isopi—
marieacid；HPLC
侧柏叶为中医常用止血药，具有凉血止血、生发
乌发之功效。曾在临床上用于治疗肺结核，共总结
300例疗效较好。本课题组完成了侧柏叶抗结核成
分的化学与药理研究，分离出侧柏V号结晶。该物
质对结核标准菌株和3种耐药菌株均有抑制作用，
而且急性毒性试验表明毒性较小。从侧柏叶醇浸膏
中分离的抗结核活性成分异海松酸即为侧柏叶及其
制剂的指标成分，可用于控制其质量[1]。因此本实验
探讨建立HPLC法测定侧柏叶及其制剂侧柏V号
胶囊和异海松酸胶囊中该成分。
1仪器与材料
WatersHPLC系统：Waters600E泵，7725i定
量进样阀，996二级管阵列检测器，M32色谱工作
站。甲醇为一级色谱纯，天津市四友生物医学技术有
限公司；其他试剂为分析纯。
异海松酸对照品由本课题组制备。熔点161～
164℃；元素分析C：。H。。0：实测值C79．75％，H
10．10％；紫外光谱入胖(nm)：231nm；红外光谱
v。KB；r(cm一1)：2859、2728～1667、1449、1370、1266、
1176、127、940、902；质谱：m／z302(M+)、287、
257；核磁共振谱艿：0．82(单峰CH。一)、1．00(单峰
CH3一)、1．18(单峰CH3一)、4．73～4．93(四重峰
CH。CH=CH：)，与文献报道[2]的异海松酸完全一
致。采用HPLC法测试其质量分数为98．82％。
侧柏叶采自济南市燕子山，晾干，经鉴定为侧柏
Platy·cladusorientalis(L．)Franeo的叶，粉碎过1
号筛。侧柏V号胶囊由采集的侧柏叶经85％乙醇提
取制备，由山东省中医药研究院制剂室与山东中医
药大学药厂制备，塑料袋密封包装，规格为每粒胶囊
装量0．45g，含0．3g侧柏叶提取物。异海松酸胶囊
由山东省中医药研究院制剂室制备，主要辅料为淀
粉，按一定工艺制成，装入胶囊，规格为每粒胶囊装
量0．3g。
2方法与结果
2．1对照品溶液的制备：取异海松酸对照品适量，
精密称定，以甲醇制成0．5mg／mL的对照品溶液。
2．2供试品溶液的制备：取侧柏叶药材粉碎过3号
筛，取粉末约1g，精密称定，置烧瓶中加30mL乙
醇回流提取2h，滤过，洗涤滤纸，残渣加30mL乙
醇回流提取1h，滤过，洗涤滤纸，合并滤液并水浴
蒸干，残渣加0．1mol／L氢氧化钠溶液15mL分次
溶解，转入分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次15
mL，弃去氯仿溶液，碱水溶液加5mol／L盐酸调pH
值为2，加氯仿萃取4次，每次15mL，合并氯仿溶
液，水浴蒸干，残渣加甲醇分次溶解，转移至10mL
量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进样前用0．45弘m滤
膜滤过，作为侧柏叶药材供试品溶液。
取侧柏V号胶囊内容物研细，约取0．5g，精密
称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇30mL，精密称
定，加热回流0．5h，放冷，再精密称定，用甲醇补足
损失的质量，滤过，取续滤液20mL，水浴蒸干，残渣
加0一mol／L氢氧化钠溶液15mL分次溶解，同侧
柏叶药材供试品的制备方法操作，转移至10mL量
瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为侧柏V号胶囊供试品
溶液。
取异海松酸胶囊内部物约0．05g，精密称定，加
甲醇50mL振摇提取15min，滤过，取续滤液10
mL置量瓶中，作为异海松酸胶囊供试品溶液。
2．3检测波长的选择：取异海松酸对照品溶液在岛
津UV一265FW分光光度仪上190～700n,m波长
扫描，得最大吸收峰为234nm。在HPLC系统检测
器上扫描验证为231nm。选择检测波长231nm。
2．4 色谱条件：KromasilC18柱(200mm×4．6
mm，5弘m)[先德(天津)科技仪器有限公司]；流动
相：甲醇一水一冰醋酸(60：37：3)；体积流量：1mL／
min；柱温：25℃；检测波长：231nm；进样量：10
扯L。色谱图见图1。
2．5标准曲线的制备：分别精密吸取0．5mg／mL
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·523·
—jL√L
0 4 8 12 1604 8 12 160 4 8 12 16
t／min
*一异海松酸
*一isopimaricacid
图1异海松酸对照品(A)、侧柏叶(B)和侧柏V号胶
囊(c)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsflsopimaricacid
referencesubstance(A)，P．orientalis
leaves(B)，andCeb iNo．VCapsula(C)
异海松酸对照品溶液2．5、5．0、10．0、15．0、20．0}LL
注入液相色谱仪，测定峰面积积分值。以峰面积积分
值为纵坐标，实际进样量为横坐标，绘制标准曲线。
结果表明，异海松酸在1．25～10．00弘g与峰面积积
分值呈良好的线性关系，其回归方程为Y=66214
X+2487．9，r一1．000。
2．6精密度试验：取0．5mg／mL异海松酸对照品
溶液，重复进样5次，测定异海松酸峰面积积分值，
计算得其RSD为0．85oA。取侧柏V号胶囊供试品
溶液，重复进样5次，测定异海松酸峰面积积分值，
计算得其RSD为1．08％。
2．7稳定性试验：取侧柏V号胶囊供试品溶液，每
隔1h进样测定1次，5h内异海松酸峰面积积分值
稳定，其RSD为1．03％(咒一5)。
2．8 重现性试验：取同一批侧柏V号胶囊(批号
20050923)样品，共5份，制备供试品溶液，进样测定，计
算得异海松酸的平均质量分数为11．38mg／g，RSD为
2．13％。
2．9 加样回收率试验：取侧柏V号胶囊(批号
20050923)内容物细粉约0．5g(含异海松酸约5．6
mg)，精密称定，共5份，分别加入约7．0mg异海松
酸对照品，制备供试品溶液，进样测定，计算异海松
酸的质量分数。结果平均回收率为95．8oA，RSD为
2．7oA。
2．10样品测定：取3种样品各3批，每批取样5
份，制备供试品溶液，进样测定，采用外标法计算异
海松酸的质量分数，结果见表1。
裹1侧柏叶及其胶囊中异海松酸的测定结果
Table1 Determinationofisopimaricacidin
P．orientalisleavesanditscapsules
样品 异海松酸／(rag·g-1)
侧柏叶药材1
2
3
侧柏V号胶囊20050512
20050807
20050923
异海松酸胶囊20050702
20050730
20050814
3．09
3．20
3．56
10．39
9．67
11．38
553．89
541．50
528．83
3讨论
柱温对分离效果影响较大，25℃柱温在秋冬季
很容易达到，在夏季就需要用可调至室温以下的柱
温箱。该成分测定对柱温要求较高，而对酸性条件要
求不高，2％冰醋酸水溶液可使保留时间提前，而用
3％以上的冰醋酸水溶液可使保留时间延长至8～
12min，效果较好。
供试品溶液的制备中考虑到样品处理方法由难
到易依次为侧柏叶药材、醇提取物和异海松酸有效
单体固体分散剂，因此实验主要解决了侧柏叶药材
的处理。其他含有侧柏叶的复方或中成药的处理有
待进一步研究。
References：
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万方数据
HPLC法测定侧柏叶及其制剂侧柏Ⅴ号胶囊和异海松酸胶囊中
异海松酸
作者： 程立方， 崔秀君， 马海勇， CHENG Li-fang， CUI Xiu-jun， MA Hai-yong
作者单位： 程立方,CHENG Li-fang(山东省中医药研究院,山东,济南,250014)， 崔秀君,CUI Xiu-
jun(济南市妇幼保健院,山东,济南,250001)， 马海勇,MA Hai-yong(南京中医药大学,江苏
,南京,210046)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(4)

参考文献(2条)
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