全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·393·
提取工艺对脑得生抗大鼠局灶性脑梗死的影响
欧来良1，李家政2；王瑞芳1，史作清1，施荣富1
(1．南开大学生物活性材料教育部重点实验室，分子生物学研究所，天津300071；
2．天津大学高分子材料研究所，天津 300072)
摘要：目的通过对脑得生不同提取工艺——分煎与合煎抗大鼠局灶性脑梗死影响的实验研究，探索中药复方
分煎工艺在中药现代化进程中实施的可能性。方法 利用FeCl。损伤血管制作大鼠大脑中动脉血栓模型，于血栓形
成后5d内，给药组连续ig脑得生按药典法制备制剂(N1，1．2g／kg)、脑得生各单味药分煎，吸附树脂富集、分离
有效部位混合制剂(N2，0．2g／kg)和脑得生各单味药合煎，吸附树脂富集、分离，有效部位混合制剂(N3，0．6g／
kg)，观察大鼠行为评分、脑梗死面积及病理组织学变化。结果经N1、N2和N3治疗的大脑中动脉血栓模型大鼠
的行为评分、脑组织梗死面积与模型组相比差异均有显著性(P
并不会降低原方的整体疗效发挥。该研究结果对其他复方研究也具有一定的推广价值。
关键词：脑得生；提取工艺；脑梗死
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)03—0393—03
EffectsofdifferentextractingtechniquesonNaodesheng
againstfocalcerebralinfarctionofrats
OULai—lian91，LIJia—zhen92，WANGRui～fan91，SHIZuo—qin91，SHIRong—ful
(1．TheK yLaboratoryofBioactiveMat rials，MinistryofEducation，InstituteofMolecularBiology，NankaiUniversity，
Tianjin300071，China；2．InstituteofPolymerMaterials，TianjinUniversity，Tianjin300072，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethefeasibilityoftheindividualecoctingandcodecoctingtech—
niquesforcompoundherbalmedicinenthecourseofChinesemateriamedica(CMM)modernization
throughstudiesontheffectofNaodeshengvariouspreparationsonthefocalcerebralinfarctionofrats．
MethodsThecerebralarterythrombosismodelwasmadebyFeCl3-induceddamageto10calcerebralmid—
diearteryofrats．Withinfivedayssincethrombogenesis，thebehavioralscoreofneurologicaldeficitwas
evaluatedndthesizeofcerebralinfarctionwasmeasuredaftertheratswerefedbycontinuouslyig
NaodeshengI(N1，1．2g／kg)，preparedaccordingtoPharmacopeia，NaodeshenyII(N2，0．2g／kg)
preparedbydecoctings leh rbsrespectively，thenmixingtheirf actionst gether，andNadeshangⅢ
(N3，0．6g／kg)preparedbycodecoctingherbstogether，thenisolatingheireffectiveingredients．Also
thehistopathologicalchangesw reexamined．ResultsBoththebehavioralscoreofneurologicaldeficit
andthesizeofcerebralinfarctioninthetreatmentgroupsweresignificantlydiminishedascomparedtothe
controlgroup(P<0．01)andhistopathologicalgroupshowedsignificantchangescomparedtothemodel
group．WhileamongtheN1，N2，andN3groupstherewasnostatisticallysignificanceintermsofthe
above—mentionedparameters．ConclusionTheresultsdemonstratehatthcurativeeff ctof heindividu—
aldecoctingechniqueofcompoundherbalmedicineis otdifferencefromthatofcodecoctingtechnique．
Therefore，theindividualextractiontechniqueco ldbeappliedtocompoundCMMinordertoreducethe
difficultyinextraction，separation，analysisandsoon．
Keywords：Naodesheng；extractingtechnique；cerebralfarction
如何实现中药复方的现代化，长期以来一直困
扰着广大医药工作者。目前阻碍中药现代化进程的
关键问题是如何对中药有效成分或部位提取分离和
分析定量。众所周知，中药的成分非常复杂，复方更
似一个庞大的天然组合化学库，如何在如此复杂庞
大的体系内确定目标成分并对确定目标成分进行定
收稿日期：2004—06—24
基金项目：国家自然科学基金资助项目(29974015)
作者简介：欧来良(1972一)，男，博士，主要从事功能高分子合成和中药现代化研发。
Tel：(022)23500660E—mail：ouyll001@eyou．COrn
万方数据
·394· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
量分析，令许多药学工作者望而却步。笔者认为，解
决上述问题的首要步骤是必须对中药复方体系进行
肢解，即实施复方中各单味中药的分别提取、分离、
分析，这样将可大大简化复方现代化的工作难度。但
这种做法(分煎)似乎与传统的中药煎煮法(合煎)有
所背离，是否会降低中药复方的疗效也一直众说纷
纭。本实验选用《中华人民共和国药典》(药典)中对
缺血性脑中风及中风后遗症具有明确疗效的复方中
药——脑得生为研究对象，通过分煎、合煎两种不同
提取工艺获得提取物，并对不同制剂治疗大鼠局灶
性脑梗死的疗效进行了系统研究，以探讨分煎工艺
在中药复方现代化过程中实施的可行性。
1材料
1．1药品与试剂：三七Panaxotoginseng(Burk．)
F．H．Chen、川芎LigusticumchuanxiongHort．、红
花CarthamustinctoriusL．、葛根Puerariathorn—
soniiBenth．、山楂CrataeguepinnatifidaBunge
(去核)由河北省安国市医药公司提供(经安国市
医药公司鉴定符合药典标准)；红四氮唑(分析纯)
为北京市朝阳区八里庄化工厂生产；10％福尔马林
为中国华东师范大学化工厂生产；水合氯醛为北京
市朝阳区八里庄化工厂生产；HE试剂均由日本精
株会社生产；吸附树脂，欧瑞生物科技公司研制。
1．2动物：Wistar大鼠，雄性，体重230～260g，二
级动物，由中国医学科学院实验动物研究所提供。
2方法
2．1供试药品的制备
2．1．1脑得生制剂I(N1)的制备：按2000年版药
典中所述比例称取一定量药材，并按药典方法制备。
2。1．2脑得生制剂Ⅱ(N2)的制备：同上按比例取
三七、川I芎、红花、葛根、山楂(去核)一定量，然后
将各味中药分别提取，用大孔吸附树脂对各药中的
有效部位进行富集、分离，再将各单味药有效部位提
取物混合，制得N2。
2．1．3脑得生制剂Ⅲ(N3)的制备：同上按比例取
三七、川芎、红花、葛根、山楂(去核)一定量，然后
将各味中药分别提取，用大孑L吸附树脂对各味药中
的有效部位进行富集、分离，制得N3。
2．2脑梗死动物模型的制备：选取健康成年雄性大
鼠，体重230～260g，水合氯醛ip麻醉，左侧卧位固
定，右侧脸部剃毛，局部以酒精棉球消毒，于亚细菌
手术条件下，经眼外眦与外耳道连结间开口约1．5
cm，分离颧肌，剪断颧骨，固定窗口，按Tumura等
方法颅骨底处开颅窗[1“]，暴露右侧位于嗅束及大脑
下静脉之间的一段大脑中动脉，置一块滤纸
(2mm×3mm)敷于中动脉处，将10肛L50％
FeCl。滴于滤纸片上，30min后取出滤纸片，用生理
盐水清洗创面，滴人青霉素钠注射液0．2mL
(2．0×105U／mL)预防感染，逐层缝合创面，碘酒
消毒，回笼饲养待用。
2．3实验分组及给药方案：将手术24h后的大鼠
按文献评分方法[33评定行为障碍程度，根据分数高
低均分为5组，每组15只，其中10只进行行为学
与梗死面积的观察，另外5只进行病理组织学观
察。假手术组(未阻断大脑中动脉)、模型对照组均
给予蒸馏水；N1组1．2g／kg，N2组0．2g／kg，N3
组0．6g／kg；每天定时ig给药1次，给药后1h进
行行为学评分口]。连续观察5d，观察药物作用效果。
各组大鼠行阻断大脑中动脉术后24h及每天给药
后1h按照评分标准进行运动、肌张力等神经功能
损害程度评分。
2．4梗死范围测量：在末次给药1h后，水合氯醛
麻醉，断头取脑，置生理盐水中，放入冰箱冷冻60
min后取出，去掉嗅脑、小脑和低位脑干，将每个大
脑组织切成5片，厚度约2mlTl，以4％红四氮唑
(TTC)染色，37℃水浴20min后取出。10％福尔
马林固定24h后，根据重量法计算梗死部分质量占
全脑组织质量的百分比，作为梗死范围的指标。
2．5病理学检查：将各组大鼠脑组织标本10％中
性福尔马林固定、脱水、石蜡包埋、常规制片、HE染
色，光镜下进行组织形态学观察。
2．6统计方法：数据用z±S表示，组间行t检验。
3结果
3．1 N1、N2和N3药效部位的定量分析：结果见
表1。N1是采用2000年版药典标准提取所得制剂，
其所含成分繁多，给分析定量带来一定的困难，而且
有效成分含量较低；N2制剂是针对药物特点，选择
合适的溶剂提取，经相应的大孔吸附树脂纯化后，所
得各单味中药有效部位提取物的混合物，其有效成
分含量较高(注：表1中N2制剂各成分含量，为单
味提取物按比例混合后，根据单味提取物的量换算
所得)，且容易定量分析；N3则是混合煎煮后，经相
应的大孔吸附树脂纯化后所得制剂。
3．2大鼠脑梗死后行为的动态变化及N1、N2和
N3的影响：经过阻断大脑中动脉手术的大鼠麻醉
清醒后即有偏瘫症状的出现。主要表现为不同程度
的手术对侧前肢内收，肩内旋，肌张力降低，抵抗阻
力降低，甚至有些动物出现不停地向一侧转圈。从
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·395·
表1 N1、N2和N3有效成分分析 表2可以看出，模型组术后1d的行为评分和术后
各天评分无明显变化，第2天后行为有缓和恢复趋
势。术后给予N1、N2和N3的大鼠，2d后其行为变
化与模型对照组相比有明显改善(P<0．01)，而
N1和N2两组间相比差别无统计学意义。假手术组
的动物行为无明显改变。
表2 N1、N2和N3对大鼠大脑中动脉栓塞后行为评分及梗死面积的影响(；±s，n=10)
Table2 EffectsofN1，N2。andN3onbehavioralscoreandinfarctionarea
ofratsaftermiddlecerebralarterythrombosis(；±s，疗一10)
与模型组比较：。P
N2和N3的影响：见表2。血栓形成术后5d大鼠脑
组织梗死程度明显。在给予N1、N2和N3治疗后，
脑梗死面积百分比均有所下降，与模型组相比差异
均有显著性，而N1、N2与N3相互比较对脑梗死面
积的影响差异不显著。
3．4 大鼠脑血栓形成后组织形态学变化及N1、N2
和N3的影响：大鼠经脑梗死术后5d，解剖后肉眼
可见各组大鼠脑梗死区组织肿胀、质地变软、色泽灰
暗，部分组织液化。在光学显微镜下观察可见模型组
大鼠脑梗死部位出现缺血性病变，皮质坏死，神经细
胞肿胀，尼氏小体溶解消失，神经胶质细胞核染色变
深，固缩，轮廓不清，梗死区片状液化坏死、出血，可
见中性白细胞和巨噬细胞浸润，纤维母细胞及胶质
细胞增生，可见噬细胞现象。假手术组无明显病理改
变。N1、N2和N3治疗后的大鼠，脑组织切片显示，
大脑梗死部位皮质坏死区较小，部分神经胶质细胞
核固缩、染色变深，尼氏小体部分消失，梗死出血灶
均较模型组轻。
4讨论
4．1本实验结果表明：脑得生制剂对大鼠局灶性脑
缺血具有良好的治疗作用，制备工艺的不同对脑得
生发挥治疗作用的影响不大。因此本研究认为，就复
方脑得生的现代化开发而言，可以采用单味药有效
成分或部位分别提取、定量而后组方的方法代替传
统“一锅煮”，这样就可以大大降低复方脑得生中有
效成分或部位分离和定量的复杂性，加快现代化复
方中药——脑得生的产生进程。
4．2复方中药的化学成分非常复杂，但若按有效部
位划分大致可分为黄酮类、皂苷类、生物碱类、有机酸
类、挥发油类、树脂、多糖等10余类，其中又以黄酮
类、皂苷类、生物碱类、有机酸类、挥发油类为中药发
挥药效的主要活性成分，本研究所选用的复方脑得生
虽然药味不多，但却几乎涵盖了中药有效部位的所有
主要类别，如三七含有皂苷类、黄酮类、多糖类等；山
楂含有有机酸(枸橼酸)、黄酮类等；川芎含有挥发油
类(藁本内酯等)、生物碱类(川芎嗪等)、有机酸类
(阿魏酸等)等。因此以脑得生为研究对象，所取得的
研究成果是具有一定的代表性和推广价值的。
4．3对研究结果初步分析认为，对脑得生制剂分煎
与合煎具有基本相同的药理作用，也说明两种工艺
发挥药理作用的物质基础基本是一致的，合煎时各
种中药的成分之间尽管可能发生助溶、结合、成盐等
物理和化学反应，产生一些新的物质，但这些新生物
质在人体内酸、碱、酶的作用下，也可能被还原为原
生物质以发挥药效。对其药效物质基础的深入研究
正在进行中。
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667．
晕?兰一薰㈡
万方数据
提取工艺对脑得生抗大鼠局灶性脑梗死的影响
作者： 欧来良， 李家政， 王瑞芳， 史作清， 施荣富， OU Lai-liang， LI Jia-zheng， WANG
Rui-fang， SHI Zuo-qing， SHI Rong-fu
作者单位： 欧来良,王瑞芳,史作清,施荣富,OU Lai-liang,WANG Rui-fang,SHI Zuo-qing,SHI Rong-
fu(南开大学,生物活性材料教育部重点实验室,分子生物学研究所,天津,300071)， 李家政
,LI Jia-zheng(天津大学高分子材料研究所,天津,300072)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
被引用次数： 1次
参考文献(3条)
1.Tamura A;Graham D I;Maculloch J Focal cerebral ischemia in the rat: Description of technique and
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引证文献(1条)
1.程新锐 中药复方脑得生的有效成分组研究[学位论文]博士 2006
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200503030.aspx