全 文 ：·制剂与质量·
三七总皂苷脂质体的药剂学性质及大鼠肺部给药药动学研究
沈　央, 方晓玲Ξ
(复旦大学药学院 药剂教研室, 上海　200032)
摘　要: 目的　制备三七总皂苷 (P anax notog inseng sapon ins, PN S)脂质体, 研究其药剂学性质及在大鼠体内药动
学行为。方法　采用薄膜分散法制备 PN S 脂质体, 考察其形态、粒径、包封率及稳定性, 采用肺部滴注给药考察脂
质体在大鼠体内的药动学行为。结果　PN S 脂质体包封率为 78150% , 平均粒径为 115 Λm , 外形圆整, 体外泄漏慢,
需低温保存。PN S 脂质体经大鼠肺部滴注给药后, 体内人参皂苷 R b1 的药动学参数分别为 T 1ö2Α= 7100 h, T 1ö2Β=
27172 h, AU C = 2 21819 Λg·hömL , 绝对生物利用度为 70114%。结论　PN S 脂质体包封率高, 性质稳定, 延长
PN S 在血循环的时间, 提高了经血管外给药途径的 PN S 生物利用度。
关键词: 三七总皂苷脂质体; 包封率; 粒径; 稳定性; 药动学
中图分类号: R 28316; R 285161　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 07 0745 05
P anax notog inseng sapon in l iposom es: Character iza tion of pharmaceutics
and pharmacok inetics on pulm onary in stilla t ion in ra ts
SH EN Yang, FAN G X iao2ling
(D epartm ent of Pharm aceu tics, Schoo l of Pharm acy, Fudan U niversity, Shanghai 200032, Ch ina)
Abstract: Object　To p repare P anax notog inseng sapon in (PN S) lipo som es and invest iga te their char2
acteriza t ion of pharm aceu t ics and pu lmonary pharm acok inet ics in ra ts. M ethods 　 T he film 2disperion
m ethod w as u sed to p repare PN S lipo som es by invest iga t ing its fo rm , vesicle size, en trapp ing eff iciency
and stab ility. T he study of pu lmonary pharm acok inet ics in ra ts w as carried ou t by pu lmonary in st illa t ion.
Results　T he en trapm en t of PN S lipo som es w as 78150%. T he m ean vesicle size w as 115 Λm w ith un ifo rm
ex ternality. T he drug leakage from PN S lipo som es w as slow. L ow temperatu re w as requ ired fo r its sto r2
age. T he pu lmonary pharm acok inet ics param eters w ere as fo llow s: T 1ö2 Α= 7100 h, T 1ö2Β= 27172 h, A U C
= 2 21819 Λg·hömL , the ab so lu te b ioavailab ility w as 70114%. Conclusion 　PN S lipo som es w ith h igh
en trapm en t and stab ility can p ro long its circu la t ion in b lood and imp rove the PN S b ioavailab ility via lung
app roach.
Key words: P anax notog inseng sapon in (PN S) lipo som es; en trapp ing eff iciency; vesicle size; stab ili2
ty; pharm acok inet ics
　　三七是五加科植物三七 P anax notog inseng
(Bu rk. ) F. H. Chen 的干燥根, 三七总皂苷 (P anax
notog inseng sapon in s, PN S) 是三七的活性部位, 其
中人参皂苷R b1 和人参皂苷R g1 是 PN S 的主要成
分, 而人参皂苷R b1 是人参二醇的典型代表[1 ]。本
实验以人参皂苷R b1 作为检测 PN S 的指标。三七
是止血化瘀、滋补强壮之上品。近年来研究发现三七
在治疗心脑血管疾病, 尤其是抗血栓疗效显著[2 ]。目
前已有三七血塞通注射液及口服片剂产品面市, 但
注射液需通过静脉滴注给药, 耗时, 患者顺应性和安
全性均很差[3 ] , 而口服片剂由于 PN S 受胃肠道酶、
细菌及 pH 值等多种因素影响, 生物利用度很低[4 ]。
本课题组前期研究发现人参皂苷R b1 经口服的绝
对生物利用率只有 4135% [5 ]。表明 PN S 的给药剂型
和给药途径均需改善。肺部给药是一种很有发展潜
力的新型全身给药途径, 肺泡表面积大, 毛细血管丰
富, 肺泡壁薄, 能避开胃肠道对药物的不利影响[6 ]。
将药物包裹入脂质体后通过肺部给药, 由于脂质体
与肺泡壁有较好的生物相容性, 药物通过磷脂双分
子层缓慢释放, 能够提高药物的生物利用度并降低
·547·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
Ξ 收稿日期: 2003210208
基金项目: 复旦大学研究生创新基金资助
作者简介: 沈　央 (1978—) , 女, 浙江人, 复旦大学药学院药剂专业硕士研究生, 主要从事药物新剂型研究和开发。
E2m ail: shen echo@yahoo. com. cn3 通讯作者　T el: (021) 54237432　E2m ail: x lfang@ shm u. edu. cn
药物的不良反应[7 ]。因此, 本实验将 PN S 制成脂质
体, 考察其药剂学性质, 采用气管滴注方式给药考察
PN S 脂质体在大鼠体内的药动学情况并和 PN S 溶
液进行比较, 探讨其肺部给药的可行性。
1　仪器和材料
ZX—98 旋转蒸发仪 (上海有机化学研究所) ;
Zeta 电位及粒度测定仪 (N icomp TM 380ZL S, San ta
Barbara, 美国) ; TJ—25 低温高速离心机 (Beckm an
Cou lterTM , 美国) ; T GL —16C 台式离心机 (上海安
亭科学仪器厂) ; 电子分析天平 (M ett ler A E200) ;
D SH Z—300 多用途水浴恒温振荡器 (江苏太仓实验
设备厂) ; pH 测定仪 (M ett ler To lodo M P220) ; 岛津
L C—10A 型高效液相色谱仪, SPD—10A 型紫外可
见检测仪。
三七总皂苷 (批号: D FC2SO ZD 201, 云南文山,
纯度为 98% , 本校生药教研室陈道峰教授赠) ; 注射
用大豆磷脂 (上海太伟药业有限公司) ; 胆固醇 (中国
医药集团上海化学试剂公司) ; 乙腈、甲醇为色谱纯,
其他试剂均为分析纯。
　　SD 大鼠, 体重 (250±30) g, 雌雄各半, 复旦大
学上海医学院实验动物中心提供。
2　方法
211　薄膜分散法制备 PN S 脂质体: 准确称取处方
量的注射用大豆磷脂、胆固醇, 加适量乙醚使其溶解
并转移至 250 mL 茄形瓶中。置 25 ℃恒温水浴减压
蒸发除去乙醚, 使脂质在瓶壁上成均匀薄膜。茄形瓶
置真空干燥箱内真空干燥过夜后, 瓶内加入含处方
量 PN S 的 pH 618 磷酸缓冲液 (PBS) 适量以及 2 粒
直径为 018 mm 的搅拌珠, 25 ℃恒温水浴旋转洗膜
1 h, 得浮白色混悬液, 即 PN S 脂质体。
212　粒径及其形态: PN S 脂质体适量经 pH 618
PBS 稀释后, 应用 Zeta 电位及粒度测定仪测定其粒
径大小。PN S 脂质体适量置铜网上, 经磷钨酸负染
后, 于透射电镜下观察脂质体结构。并取适量经稀释
后, 置于光学显微镜下观察其形态和分布。
213　包封率测定: 取 PN S 脂质体混悬液适量, 置低
温高速离心机中, 4 ℃, 20 000×g 离心 30 m in, 取上
清液 20 ΛL , 用 pH 618 PBS 稀释至 5 mL , 摇匀。
　　R P2H PL C 法测定游离人参皂苷R b1 的色谱条
件: OD S 柱 (150 mm ×416 mm , 5 Λm , 大连伊利
特) , 乙腈220 mmo löL N aH 2PO 4 (33∶67)为流动相,
体积流量 110 mL öm in, 进样量 20 ΛL , 检测波长为
203 nm , 灵敏度为 0101 AU FS, 柱温 (35±2) ℃。按
下式计算包封率。
　　包封率= C总- C 游离C总 ×100%
C总: 脂质体包封的药物质量浓度　C游离: 上清液中游离的药
物质量浓度
214　Zeta 电位测定: 取脂质体适量, 透析除去盐离
子, 稀释后采用 Zeta 电位及粒度测定仪测定 Zeta
电位。
215　稳定性考察
21511　脂质体的体外泄漏: 分别考察 PN S 脂质体
在 (25±015) ℃和 (37±015) ℃恒温水浴中持续振
荡 5 d 的体外释放状况。将脂质体适量置于透析袋
内, 释放介质为pH 618 PBS, 振荡频率为 80 röm in,
持续振荡 5 d, 分别于 1、2、3、4、5 d 取透析液 1 mL ,
并同时补充同温新鲜 PBS 1 mL , R P2H PL C 测定透
析液中游离的人参皂苷R b1。透析完成后, 剪破透析
袋, 收集袋内的脂质体并用 10% T riton X2100 破
坏, 作为时间无穷大时的药物泄漏量。计算其累积释
放量, 从而评价 PN S 脂质体的体外稳定性。
21512　脂质体在血浆中的稳定性: 将脂质体混悬液
和大鼠血浆按 3∶1 和 1∶3 比例混匀, 分别置 37 ℃
水浴中孵育 7 d, 于 015、1、115、2、215、3、4、6、10 h
和 1、2、3、4、5、6、7 d 观察混合液外观变化, 并取样
测定粒径, 于显微镜下观察脂质体形态变化。
21513　长期稳定性考察: 取 PN S 脂质体 3 批分别
置 4、25、40 ℃环境中 60 d, 测定不同温度下、不同时
间点 PN S 脂质体 pH 值、粒径和 Zeta 电位。
216　脂质体在大鼠体内药动学研究: SD 大鼠 12
只, 随机分成两组, 按照 40 m gökg 分别肺部滴注
PN S 溶液和 PN S 脂质体。于 015、1、115、2、215、3、
4、6、10、24、48、72、96、120 h 尾静脉取血 015 mL , 静
置后 5 000 röm in 离心 15 m in, 取血清 200 ΛL , 加入
4 ΛL 磷酸旋涡混匀, 10 000 röm in 离心, 取上清液
备用。O asis HLB 1 cc 固 相 萃 取 柱 (W aters,
Ireland)以 1 mL 甲醇活化, 再以 1 mL 纯水平衡, 取
血清上清液上柱加压, 弃去滤液, 以 200 ΛL 纯水过
柱冲洗杂质, 最后用 200 ΛL 色谱纯甲醇过柱洗脱,
并接收洗脱液, 以 R P2H PL C 进样分析人参皂苷
R b1 浓度。色谱条件同 213。血药浓度数据采用中国
药理学会数学药理委员会编制的 3p 87 药动学程度
进行处理。
3　结果
311　PN S 脂质体的粒径及其形态: 薄膜分散法制
备的 PN S 脂质体为大单室脂质体, 圆形或椭圆形,
外形圆整光滑, 形态分布均一。光学显微镜照片和电
镜照片见图 1。平均粒径为 (1 54615±32114) nm ,
·647· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
包封率为 (78150±2115) %。
图 1　PNS 脂质体的光学显微镜照片 (经相应介质稀释
20 倍后放大 300 倍, A ) 和电镜照片 (放大84 000
倍, B)
F ig. 1　Photos of PNS l iposomes by optica l m icroscopy
(×300, diluted 20 times, A ) and tran sm ission
electron m icroscopy (×84 000, B)
312　PN S 脂质体的体外泄漏: 体外释放实验结果
表明 PN S 脂质体在 25、37 ℃介质中药物释放缓慢,
37 ℃ 5 d 的体外累积释放量占时间无穷大时脂质
体释放量的 2104% , 25 ℃ 5 d 的体外累积释放量占
时间无穷大时脂质体释放量的 0143%。PN S 脂质体
在水相介质中累积释放曲线见图 2。
A 237 ℃　B225 ℃
图 2　PNS 脂质体在不同温度水相介质中
的累积释放曲线 (x±s, n= 5)
F ig. 2　Cumulative drug release from PNS l iposomes
in PBS at two temperatures (x±s, n= 5)
313　脂质体在血浆中的稳定性: 脂质体与血浆按
3∶1 体积混合后 4 h 出现分层现象, 按 1∶3 体积混
合后 2 h 出现分层现象, 且随着时间延长, 这种分层
现象不断增强。同一时间, 1∶3体积混合液的分层
现象比 3∶1 体积混合液更为显著。表明脂质体在血
浆作用下可能发生大量泄漏, 并且这种泄漏与血浆
含量成正比, 即血浆成分含量越高, 脂质体泄漏越严
重。脂质体在不同时间点粒径变化见图 3, 可见两种
混合液中脂质体的粒径变化均呈先减小, 然后暂时
增大, 最后大幅下降的趋势。
A 23∶1　B21∶3
图 3　PNS 脂质体与大鼠血浆按不同体积比例混
合后的粒径变化 (时间坐标经对数转化)
F ig. 3　Size change of PNS l iposomes m ixed　
with rat plasma at two volume ratios
in seven days ( logar ithm ic tran sform
carr ied on time coordinate)
314　长期稳定性考察
31411　外观: 60 d 4 ℃贮存的 PN S 脂质体外观均匀
无明显变化; 25 ℃贮存的脂质体有少许白色絮状沉
积, 但是振摇后沉积分散, 白色混悬液恢复原状; 40
℃贮存的脂质体分层现象显著, 下层沉淀呈结晶状。
31412　pH 值及 Zeta 电位: PN S 脂质体贮存 60 d
的pH 值和 Zeta 电位的变化见表 1。表明 PN S 脂质
体在 4 和 25 ℃ pH 值均有所下降, 4 ℃ pH 值下降
趋势比 25 ℃缓慢, 但是 40 ℃ pH 值变化不明显。而
在这 3 个不同贮存温度下脂质体的 Zeta 电位绝对
值均显著下降。
31413　粒径: PN S 脂质体贮存 60 d 粒径变化见图
4。3 个贮存温度下脂质体均有粒径暂时增大然后减
小并趋于平稳的趋势, 并且贮存温度越高粒径变化
的幅度越大。
表 1　不同贮存温度下 PNS 脂质体的 pH 值与 Zeta 电位变化结果 (x±s, n= 3)
Table 1　Results of pH value and Zeta poten tia l change af ter PNS l iposomes
be ing stored at three d ifferen t temperatures (x±s, n= 3)
时间öd pH 值
4 ℃ 25 ℃ 40℃
Zeta 电位
4 ℃ 25 ℃ 40℃
0 6. 65±0. 01 6. 66±0. 02 6. 65±0. 02 - 38. 99±0. 23 38. 74±0. 50 - 38. 81±0. 97
10 - 34. 68±1. 94 - 27. 50±1. 82 - 38. 67±1. 23
20 - 22. 85±0. 98 - 17. 78±0. 93 - 36. 67±0. 89
30 6. 37±0. 02 6. 03±0. 02 6. 47±0. 01 - 22. 95±0. 93 - 17. 77±1. 12 25. 37±1. 52
40 - 16. 65±0. 64 - 15. 73±0. 32 - 20. 91±1. 29
50 - 15. 04±1. 59 - 15. 51±2. 19 - 18. 34±1. 24
60 6. 27±0. 02 5. 92±0. 02 6. 65±0. 01 - 14. 71±0. 83 - 16. 26±0. 79 - 13. 39±1. 13
315　脂质体在大鼠体内药动学研究: PN S 脂质体 及溶液经大鼠肺部滴注给药后人参皂苷R b1 的血
·747·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
A 240 ℃　B225 ℃　C24 ℃
图 4　PNS 脂质体在不同温度下贮存 60 d 粒径变化
(时间坐标经对数转化) (n= 3)
F ig. 4　Size change of PNS l iposomes be ing stored
in three temperatures for con tinuous
60 days ( logar ithm ic tran sform carr ied
on time coordinate) (n= 3)
药浓度见图 5。血药浓度数据经 3p 87 软件处理。两
种剂型的药动学参数见表 2。
图 5　PNS 脂质体 (A ) 和溶液 (B) 经大鼠肺部滴注给药
后人参皂苷 Rb1 的药-时曲线 (n= 6; 时间坐标经
对数转换)
F ig. 5　Serum concen tration of g in senoside Rb1 af ter
pulmonary in stilla tion of PNS l iposomes and
PNS solution to rats ( logar ithm ic tran sform
carr ied on time coordinate) (n= 6)
表 2　PNS 脂质体和溶液经肺部滴注给药后人参皂
苷 Rb1 在大鼠体内药动学参数 (n= 5)
Table 2　Pharmacok inetic parameters of g in senoside Rb1
af ter pulmonary in stilla tion of PNS l iposomes
and PNS solution of rats (n= 5)
参数 单位 脂质体 溶液
A ΛgömL 36. 13±24. 08 102. 76±30. 33
B ΛgömL 42. 78±19. 59 51. 44±30. 67Α öh 0. 099±0. 011 　1. 03±0. 94Β öh 0. 025±0. 005 　0. 03±0. 01
K 21 öh 0. 076±0. 091 　0. 87±0. 39
t1ö2Α h 　　　 7. 00 　　　0. 67
t1ö2Β h 　　　27. 72 　　　23. 10
　　脂质体的表观吸收速度和消除速度常数均慢于
溶液, 脂质体达峰时间为 3 h, 峰浓度为 81107 Λgö
mL , 溶液达峰时间为 115 h, 峰浓度为 85161 Λgö
mL , PN S 溶液在给药第 3 天血清中即不能检出人
参皂苷R b1, 而 PN S 脂质体在给药后第 5 天血清中
仍然能检出人参皂苷R b1。PN S 脂质体的相对生物
利用度: AU C脂质体öAU C溶液= 12214%。根据药动学
房室模型判断方法, 确定脂质体和溶液在大鼠体内
均为二室模型, 这与本实验室前期工作所做的 PN S
注射剂的结果一致[5 ]。PN S 脂质体的绝对生物利用
率; AU C脂质体öAU C注射剂= 70114%。
4　讨论
　　本课题研制的 PN S 脂质体包封率较高, 粒径大
小符合肺部给药对制剂粒径的要求。肺部给药中肺
是药物吸收入血的主要场所, 为了使脂质体与肺泡
有更好的生物相溶性, 并减少药物对肺的刺激性[8 ] ,
本实验制备脂质体膜材只应用了大豆磷脂和胆固
醇, 并采用薄膜法制备 PN S 脂质体, 制备工艺简单,
适合批量生产, 具备开发前景。
　　PN S 脂质体外释放考察结果表明, 随着温度的
升高, 磷脂和胆固醇形成的膜流动性增强, 膜材易穿
孔, 致使药物泄漏量有所增多, 但是在 25、37 ℃温度
下脂质体释放量均不到 10% , 说明 PN S 脂质体在
pH 618 PBS 介质中性质稳定, 为药物在体内延缓释
放提供了可能。从血浆稳定性看, PN S 脂质体在血
浆作用下发生相分离, 这种破坏作用随着血浆含量
的增大而增强[9 ]。脂质体在长期贮存过程中粒径变
化结果表明, 脂质体囊泡的融合或泄漏是导致其粒
径大小改变的原因。从表 1 可看出脂质膜材的水解
和氧化会增加脂质体制剂的酸度, 使脂质体 pH 值
发生不同程度的降低[10 ]。而体系 pH 值变化会直接
导致 Zeta 电位发生改变[11 ]。而 Zeta 电位的显著下
降, 提示脂质体稳定性也不断下降, 从而影响其粒径
大小。因此 PN S 脂质体的pH 值、粒径与 Zeta 电位
3 个因素间具有相关性。但是 40 ℃脂质体pH 值下
降并不显著, 可能原因在于温度升高不仅促进磷脂
的水解, 也增加 PN S 不稳定性, 如人参皂苷R b1 酸
性条件下水解产物为 20S 2人参皂苷R g3, 氧化产物
为人参皂苷 R b12252OH 和人参皂苷 R b12242OH
体[12 ] , 部分中和了脂质体 pH 值的下降。因此, 脂质
体应在低温条件下贮存, 并且由于脂质体长期贮存
中出现的不稳定性提示该产品需要进一步研究才能
开发成适应工业和市场需要的 PN S 制剂。
本实验通过对 PN S 脂质体和溶液的大鼠体内
药动学研究发现, PN S 脂质体与 PN S 溶液相比, 相
对生物利用度为 12214% , Α吸收相半衰期是溶液的
10145 倍, Β消除相半衰期是溶液的 112 倍; 药物从
外周向中央室转运速度 K 21从溶液的 0187öh 延长
到 01076 öh, 且 PN S 脂质体的绝对生物利用度是口
服片剂的 18171 倍。表明 PN S 脂质体循环时间延
长, 磷脂包封 PN S 后, 磷脂能与肺泡表面更好融合,
有助于脂质体通过肺泡壁进入毛细血管, 药物通过
·847· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
磷脂双分子层缓慢释放, 发挥了药物贮库作用, 有利
于提高肺部给药药物的生物利用度。
致谢: 陈道峰教授提供三七总皂苷原料药。许清
芳博士提供有关 PN S 前期研究的宝贵资料。
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葛根芩连汤的 HPCE 指纹图谱研究
戴开金1, 罗奇志2, 罗佳波3, 马安德2, 谭晓梅3, 吴昭晖3Ξ
(11 第一军医大学 化学教研室, 广东 广州　510515; 21 第一军医大学 中心实验室, 广东 广州　510515;
31 第一军医大学 中药制剂重点实验室, 广东 广州　510515)
摘　要: 目的　采用高效毛细管电泳法 (H PCE) 建立葛根芩连汤的指纹图谱。方法　电解质溶液由 30 mmo löL 磷
酸盐和 40 mmo löL 硼酸盐组成, 未涂层融硅毛细管 (65 cm ×50 Λm , 有效长度 43 cm ) , 分离电压 22 kV , 进样 1 s, 检
测波长 254 nm , 温度 30 ℃。结果　上述条件下, 葛根芩连汤中 27 个成分得到了较好的分离, 方法学考察结果符合
定量测定和定性研究的要求。结论　该方法具有较好的分离效果和良好的精密度, 可考虑作为葛根芩连制剂的质
量控制方法。
关键词: 葛根芩连汤; 高效毛细管电泳; 指纹图谱
中图分类号: R 28312; R 286102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 07 0749 03
HPCE f ingerpr in ting of Gegen Qin l ian D ecoction
DA I Kai2jin1, LUO Q i2zh i2, LUO J ia2bo 3, M A A n2de2, TAN X iao2m ei3, W U Zhao2hu i3,
(1. Chem istry D epartm ent; 2. Cen ter L abo rato ry; 3. Pharm aceu tical L abo rato ry of T radit ional Ch inese M edicine,
the F irst M ilitary M edical U niversity, Guangzhou 510515, Ch ina)
Abstract: Object　To study the H PCE fingerp rin t ing of Gegen Q in lian D ecoct ion (GQD ). M ethods　
A buffer w as compo sed of 30 mmo löL sodium pho sphate and 40 mmo löL bo rate so lu t ion. Cap illary elec2
t ropho resis w as perfo rm ed u sing a 65 cm (43 cm to detecto r) ×50 Λm fu sed2silica cap illa ry tube. Separa2
t ion vo ltage w as 22 kV , samp ling t im e w as 1 s, detected w avelength w as 254 nm , and the temperatu re w as
m ain ta ined at 30 ℃. Results　T he 27 componen ts in GQD w ere successfu lly separa ted. T he ob servat ion of
m ethodo logy w as in keep ing w ith quan t ita t ine determ inat ion and qualita t ive study. Conclusion 　T h is
m ethod can be u sed fo r the quality con tro l of the p repara t ion of GQD w ith good p recision.
Key words: Gegen Q in lian D ecoct ion (GQD ) ; h igh2perfo rm ance cap illa ry electropho resis (H PCE ) ;
·947·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
Ξ 收稿日期: 2003210221
基金项目: 国家自然科学基金重点资助项目 (39970886) ; 广东省自然科学基金资助项目 (001070)
作者简介: 戴开金 (1973—) , 男, 湖南武冈人, 助教, 中药学硕士, 主要从事中草药的提取分离研究。
T el: (020) 61648196　E2m ail: daikaijin@ 163. net