全 文 ：·药剂与工艺·
紫锥菊及其复方制剂中菊苣酸的 HPLC测定
罗旭彪 ,陈　波 ,朱小兰 ,姚守拙
(湖南师范大学化学研究所 ,湖南 长沙　 410081)
摘　要: 目的　测定紫锥菊及其复方制剂中菊苣酸的含量。方法　采用 HPLC法 ,流动相为 400 mmo l /L醋酸铵 -甲
醇 ( 95∶ 5) ,流速为 1 mL /min,检测波长为 330 nm。结果　该法的平均回收率为 99. 41% , RSD= 3. 23% ( n= 5)。结
论　该方法可用于紫锥菊药材提取物及其制剂的质量控制。
关键词: 紫锥菊 ;菊苣酸 ;高效液相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 10 0890 02
Determination of cichoric acid inEnchinacea purpurea and its preparation by HPLC
LUO Xu-biao , CHEN Bo , ZHU Xiao-lan, Y AO Shou-zhuo
( Chemical Resea rch Institute , Hunan Normal Univ e rsity , Chang sha 410081, China)
Abstract: Object　 To determine the amount o f cicho ric acid in Enchinacea purpurea and its prepara-
tion. Methods　 By the use o f HPLC, mobile phase: 400 mmo l /L ammonium aceta te-methanol ( 95∶ 5) ,
f low ra te: 1 mL /min, detection w aveleng th: 330 nm. Results　 The mean recovery of cicho ric acid w as
99. 41% , RSD= 3. 23% (n= 5) . Conclusion　 The method can be applied in the determina tion of cichoric
acid in E. purpurea ex t ract and i ts preparation wi th satisfacto ry results.
Key words: Enchinacea purpurea L. ; cichoric acid; HPLC
　　紫锥菊 Enchinacea purpurea L.为紫菀科的全
草 ,连续数年入选美国最畅销植物药行列 [1 ]。近几年
我国已从北美和欧洲引进了该药材。 菊苣酸是其主
要的生理活性成分。紫锥菊及其复方制剂中菊苣酸
分离、分析方法较少 ,常用梯度淋洗 [2～ 4] ,但是在分
析时 ,需要两种流动相系统 ,操作繁杂。本实验首次
应用醋酸铵 -甲醇流动相与 C18反相柱 ,选择二极阵
列管检测器 ,准确、快速地分析了复方制剂中菊苣酸
的含量 ,结果满意。
1　实验部分
1. 1　仪器和试剂: Waters 2695分离单元 , Waters
996二极管阵列 UV检测器。水为二次蒸馏水 ;紫锥
菊提取物、菊苣酸复方制剂采自市场 ;菊苣酸对照品
(自制 ) [5 ]。所用试剂均为分析纯。
1. 2　样品处理: 取紫锥菊提取物 1 g ,加 20 m L水 ,
超声提取 20 min,离心 ,弃去残渣 ,上清液多次加入
氯仿提取色素 ,弃去氯仿层 ,水相用甲酸调至 pH=
3,加入乙酸乙酯提取 ( 3× 30 mL) ,蒸干乙酸乙酯 ,
残渣用 50%甲醇 -水定容至 10 mL,样液离心后过
0. 45μm滤膜 ,即得。
1. 3　色谱条件: 采用 XterraTM C18柱 ( 5μm, 150
mm× 3. 9 mm) ,流动相: 400 mmol /L醋酸铵 -甲醇
( 95∶ 5) ,流速: 1 mL /min,紫外检测波长: 330 nm。
2　方法与结果
2. 1　检测波长的选择:经 PAD紫外检测器扫描 ,
菊苣酸的最大吸收波长为 330 nm ,所以选择 330
nm作为菊苣酸的检测波长。
2. 2　提取溶剂的选择:考察了不同溶剂对紫锥菊提
取物中菊苣酸的提取率 ,结果见表 1。可见水提取最
完全 ,可能因为紫锥菊提取物中菊苣酸大部分以盐
的形式存在 ,所以极性最强的水提取率最高。
表 1　提取溶剂的影响
提取溶剂 菊苣酸的提取率 (% )
水 　　　　　　 95
丙酮 0. 4
丙酮 -水 ( 8∶ 2) 0. 8
乙醇 0. 2
乙醇 -水 ( 2∶ 8) 83. 6
甲醇 -水 ( 8∶ 2) 2. 1
2. 3　流动相的选择
2. 3. 1　缓冲溶液的选择: 菊苣酸很容易拖尾 ,可能
是结构中的羟基与固定相硅羟基作用而致 ,用磷酸、
甲酸缓冲溶液作为流动相时 ,峰拖尾十分严重。本实
·890· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
收稿日期: 2001-12-31基金项目:科技部国家“十五”攻关项目 ( 201 JZY2089) ;湖南省科技厅重点项目 ( 01 JZY1005)
验选用醋酸铵缓冲溶液作为流动相时 ,不但得到较
对称的峰形 ,而且有效地降低了检测限。
2. 3. 2　流动相组成的选择:比较了流动相中不同浓
度醋酸铵 ( 10, 20, 30, 100, 200, 400 mmol /L)对菊苣
酸保留特性的影响 ,结果表明随着醋酸铵浓度增加 ,
出峰时间增长 ,当醋酸铵浓度为 400 mmol /L时可
以得到菊苣酸最佳分离 (图 1)。 同时比较了不同甲
醇比例 ( 100∶ 0, 97∶ 3, 96∶ 4, 95∶ 5) ,随着甲醇含
量减少 ,出峰时间缩短 ,没有甲醇时 , 20 min内不出
峰 ,结果表明 400 mmol /L醋酸铵 -甲醇 ( 95∶ 5)是
最佳的配比 (表 2)。
图 1　醋酸铵浓度对菊苣酸的保留时间的影响
表 2　流动相中甲醇的比例对菊苣酸保留时间的影响
400 mmol /L醋酸铵 -甲醇 保留时间 (min)
100∶ 0 > 20
97∶ 3 7. 27
96∶ 4 5. 61
95∶ 5 4. 46
2. 3. 3　 pH值的选择: 考察了流动相 pH值与菊苣
酸峰的不对称因子间的关系 ,结果见表 3。随着 pH
值减少 ,菊苣酸的峰拖尾现象逐步严重 ,当 pH= 6
时峰形最佳。
表 3　菊苣酸不对称因子与流动相 pH值的关系
pH值 3 4 5 6
不对称因子 > 1. 5 > 1. 5 1. 32 1. 10
2. 4　标准曲线:精密称取菊苣酸对照品 10 mg ,置
10 mL量瓶中 ,以甲醇 -水 ( 5∶ 5)溶解并稀释至刻
度 ,摇匀。精密吸取对照溶液 1, 2, 3, 5, 7, 9μL按上
述色谱条件测定。以对照品质量 X (μg )为横坐标 ,
峰面积 Y 为纵坐标 ,得方程: Y = 32 106. 16 X-
45. 21, r= 0. 999 1,线性范围: 1～ 9μg。在最佳色谱
条件下 ,以基线噪音的 3倍所相当的物质的质量为
最低检出限 ,计算出最小检出量为 200 ng。
2. 5　精密度试验:对紫锥菊提取物样品的溶液进行
测定 ,连续自动进样 5次 ,计算得峰面积 RSD=
0. 87% ,说明系统稳定性好。
2. 6　重现性试验:对同一批号样品进行 5次平行试
验 ,结果峰面积 RSD为 2. 84%。
2. 7　回收率试验:精密称取已知含量的紫锥菊提取
物 ,加入一定量菊苣酸对照品 ,按样品的含量测定的
方法进行测定 ,计算回收率 ,得平均回收率为
99. 41% (n= 5) , RSD= 3. 23% 。
2. 8　样品的含量测定:样品溶液进样 1μL,以峰面
积计算菊苣酸的含量。结果见表 4。 色谱图见图 2。
表 4　紫锥菊提取物及复方制剂中菊苣酸的含量 (n= 5)
样　品 菊苣酸的含量 (% ) R SD (% )
紫锥菊提取物 1 6　 1. 25
　　　　　　 2 4　 1. 38
　　　　　　 3 7　 2. 01
紫锥菊复方制剂 1. 5 1. 78
　　　图 2　紫锥菊提取物 2(A)和菊苣酸复方
制剂 (B)的 HPLC图谱
3　讨论
3. 1　与梯度方法的比较:按文献报道的梯度淋洗条
件 [2～ 4 ]分析菊苣酸提取物 ,结果峰出现拖尾。但当流
动相中未加磷酸时 ,虽峰未出现拖尾 ,但检出的菊苣
酸含量很小 ,大部分菊苣酸未能从柱上洗脱下来 ;而
等度分析时 ,菊苣酸出峰时间快 ,不拖尾 ,与标准梯度
淋洗比较峰面积差值小于 5% ,两结果无明显差异。
3. 2　本研究建立了等度高效液相色谱紫外检测的
定量分析方法 ,方法快速、简便、准确 ,可用于菊苣酸
复方、菊苣酸提取物的分析。
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