全 文 ：2. 1　复方丹参对 IPC大鼠心脏组织 PKC蛋白表
达的影响: PKC在对照组中主要存在于胞浆 ,但经
过 IPC和用药后 ,在胞膜和胞核也可见 ,这说明上
述两种情况激活了 PKC,发生转位 ,再灌和假性预
处理组较对照组表达增强 ,但无显著差异 ,早期 IPC
组和晚期 IPC组表达均高于假性预处理组 ,以早期
IPC组明显 ( P < 0. 01) ;经复方丹参预处理后 , PKC
的表达均高于相应组 ,以 DIPC组为优 ,显著高于
IPC组 ( P < 0. 01)。 上述结果提示复方丹参可激活
PKC,促进 PKC蛋白表达 ,见表 1。
表 1　各组缺血预适应大鼠的 PKC蛋白表达 ( x± s)
Table 1　 Ef fects on PKC protein expression
of ischemic preconditioning rats (x± s)
组　别 动物 /只 评分值　
对照 6 　　 0. 88± 0. 21
IR 7 1. 79± 0. 86
SIPC 7 2. 43± 1. 00
IPC 7 3. 36± 1. 17* *
DIPC 7 5. 20± 1. 30* * △△
DIP 7 2. 71± 1. 31
SIPC /sw op 7 1. 25± 0. 63
IPC /sw op 6 1. 83± 1. 48
DIPC /swop 7 2. 71± 1. 12
　　与 IR, S IPC组比较: * * P < 0. 01; 与 IPC组比较: △△ P < 0. 01
　　* * P < 0. 01 vs IR, S IPC g roups; △△ P < 0. 01 vs IPC g roup
2. 2　复方丹参对 IPC大鼠心脏组织 PKC mRNA
表达的影响:琼脂糖凝胶电泳结果见图 1,经分析发
现 , PKC mRNA在正常心肌组织中也表达 ,再灌和
假性预处理组与对照组没有明显差异 ,早期 IPC组
和晚期 IPC组表达均高于假性预处理组 ,晚期 IPC
组表现更加明显 ,复方丹参预处理后 ,可明显促进
早、晚期 IPC及再灌组 PKC mRNA的表达。
3　讨论
1-对照组　 2-缺血再灌组　 3-假性缺血预处理组　 4-缺血预处
理组　 5-药物预处理+ 缺血预处理组　 6-药物预处理组　 7-晚
期假性缺血预处理组　 8-晚期缺血预处理组　 9-晚期药物预处
理+ 缺血预处理组
1-cont rol　 2-IR　 3-SIPC　 4-IPC　 5-DIPC　 6-DIP
7-SIPC /SWOP　 8-IPC /SWOP　 9-DIPC /SWOP
图 1　各组缺血预适应大鼠的 PKC mRNA表达
Fig. 1　 Ef fect on PKC mRNA expression
of ischemic preconditioning rats
　　 IPC的保护主要是由 PKC的激活、蛋白质的磷
酸化及其保护蛋白的积累。当短暂缺血和药物刺激
后 PKC迅速转位 ,使多种保护蛋白发生磷酸化 ,这
是长时间缺血保护的基础。
本实验观察到 , IPC和用药后 PKC有转位的现
象 , IPC组 PKC mRNA和蛋白表达明显增强 ,另外
还发现不论是再灌前给予复方丹参 ,还是早、晚期
IPC前给予复方丹参 ,均可明显促进 PKC mRNA
和蛋白的表达水平。 说明复方丹参对心脏缺血的保
护可能是通过激活 PKC途径而起作用。但 PKC激
活后能使哪些蛋白质发生磷酸化 ,并参与了心肌细
胞的保护作用 ,以及复方丹参激活了 PKC的何种
亚型是今后值得研究的问题。
References:
[1 ]　 Nishizuka Y. Protein kinas e 5, protein kinas e C and lipid sig-
naling for sus tained cellular responses [ J ]. FA SEB J , 1995,
9( 5): 484-494.
消红散对实验性肾小球肾炎小鼠红细胞免疫功能作用机制的研究
张　翠 ,刘　琳
(哈尔滨商业大学 制药工程系 ,黑龙江 哈尔滨　 150076)
摘　要: 目的　研究具有益气健脾摄血功效的消红散对肾小球肾炎 ( GN )小鼠红细胞免疫功能的影响。 方法　复
制免疫性 GN小鼠模型 ,检测小鼠血中 C3b受体花环率及免疫复合物 ( CIC)、红细胞免疫黏附促进因子 ( RFER)、
红细胞免疫黏附抑制因子 ( RFIR) 的变化。结果　消红散能增加 GN小鼠的红细胞免疫功能 ,使 C3b受体的数目
增加 ,促使红细胞清除免疫复合物 ,减少 CIC在肾小球基底膜沉积 ,缓解炎症或 CIC介导的病理过程 ,且能使
RFER活性升高 , RFIR活性下降。 结论　消红散对红细胞免疫功能具有双向调节作用。
·935·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2003-01-10基金项目: 黑龙江省教育厅基金项目 ( 9551130)作者简介: 张　翠 ( 1958— ) ,女 ,副教授 ,博士 ,主要从事方剂的配伍规律及中药复方治疗肾病的研究。 Tel: ( 0451) 84838207
关键词: 肾小球肾炎 ; 红细胞免疫功能 ; 消红散
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0935 04
Study on effect of Xiaohong Herbal Powder on red blood
cell immune function in glomerulonephritis mice
ZHANG Cui , LIU Lin
( Depar tment of Pha rmaceutical Eng ineering , Harbin Commercial Univ ersity, Ha rbin 150076, China)
Key words: g lomerulonephriti s; red cell immune function; Xiaohong Herbal Powder
　　肾小球肾炎 ( GN )是肾小球疾病中最常见的一
种 ,是慢性肾功能衰竭的最主要原因。多发于儿童及
青壮年 ,以 3～ 8岁儿童为最多 ,两岁以下极少见。
男女发病率之比为 1. 5～ 2. 5∶ 1[1 ]。GN的治疗至今
无重大突破 ,因为它是一个复杂的免疫病理过程 ,不
但各型 GN之间表现不同 ,即使同型肾炎的不同发
展阶段在临床表现、肾功能状态及病理变化也不相
同 ,故治疗较为棘手。现代医学认为肾炎的发生发展
与免疫平衡失调有关 [2 ] ,而红细胞免疫功能在免疫
调节中占有很重要的地位 ,本实验研究消红散对实
验性 GN 小鼠红细胞 C3b,红细胞免疫复合物
( CIC) ,红细胞免疫促进因子 ( RFER) ,红细胞免疫
抑制因子 ( RFIR)的作用。
1　材料
1. 1　动物: 昆明种健康小鼠 60只 ,雌性 ,体重
( 20± 2) g ,黑龙江中医药大学实验动物中心提供 ;
健康豚鼠 3只 ,雌性 ,体重 ( 400± 50) g,黑龙江哈
尔滨市药品检验所提供。
1. 2　药品和试剂:淋巴细胞分离液 ,上海试剂二厂 ;
酵母菌 ,湖北安琪酵母股份有限公司 ;肝素钠 ,常州
生物化学制药厂 ; 50% 戊二醛 ,哈尔滨化学化工试
剂厂 ; Hank s液 ,自配 ;瑞氏染液 ,南京建成生物工
程研究所 ;小牛血清 ,哈尔滨万太生物科技公司提
供 ;雷公藤多苷片 ,湖南株洲市制药二厂。
1. 3　用药处方:消红散 (黄芪、党参、当归、三七、白
术、茜草、甘草等 )。
1. 4　实验仪器: 电热恒温水浴锅 ,北京长安科学仪
器厂 ;水平高速离心机 ,北京医用离心机厂 ;可调微
量移液器 ,上海求精玻璃仪器厂 ;低温冰箱 ,日本。
2　方法
2. 1　实验分组:选用体重为 ( 20± 2) g的昆明种小
鼠 60只 ,雌性 ,将小鼠放入代谢笼内 ,收集 12 h尿
液 ,经醋酸加热法测定尿液正常 ,随机分成 6组 ,每
组 10只 ,即消红散高、中、低剂量组 ( 79. 2, 39. 6,
19. 8 g /kg ) ,雷公藤多苷对照组 ( 18. 75 g /kg阳性
组 ) ,模型组 ,正常组。
2. 2　 GN小鼠模型制备: 参见文献 [3 ]并作部分改
进。采用昆明种小鼠 ,雌性 , ( 20± 2) g。无菌条件下
给小鼠 ip小牛血清 ,每只 1 m L,每天 1次 ,连续 5
d。 分别在注射前 1 d和注射后将小鼠放入代谢笼
内 ,收集 12 h尿液 ,醋酸加热法检测尿蛋白 ,以尿蛋
白阳性为模型形成指标。 第 3天尿蛋白检查即为+
+ ,第 5天尿蛋白检查为+ + ～ + + + ;动物状况不
佳 ,活动减少 ,脱毛 ,并有水肿等症状。模型组小鼠给
药前摘眼球采血 ,进行红细胞 C3b ( RBC-C3b) 受
体花环、免疫复合物花环 ( RBC-ICRR)、血清中
RFIR和 RFER活性的测定。第 6天开始各组小鼠
分别 ig给予消红散复方煎剂高、中、低剂量 ,雷公藤
多苷片溶液 ,模型组及正常组 ig生理盐水 ,给药体
积均为每只 0. 5 mL,每天 1次 ,连续 15 d。
2. 3　指标的测定
2. 3. 1　新鲜豚鼠血清的制备: 将健康豚鼠心脏取
血 ,放入试管内 ,离心 ,得上层血清 [4, 5 ]。
2. 3. 2　红细胞悬液的制备:各组小鼠给药 15 d后
摘眼球取血 0. 2 mL放于含 0. 1% 肝素钠 0. 1 mL
的小试管中抗凝 ,加等量生理盐水稀释 ,然后将其缓
慢加入含等量淋巴细胞分离液的试管中水平离心 ,
2 000 r /min, 10 min,取沉淀的红细胞 ,经生理盐水
洗涤离心 3次 , 2 500 r /min, 5 min,然后用细胞记数
板记数。 用生理盐水配成浓度为 1. 25× 107 /mL的
鼠红细胞悬液。
2. 3. 3　酵母菌悬液的制备:取干酵母菌 0. 4 g加入
生理盐水 50μL,隔水煮沸 30 min,然后用 32层纱
布滤过 ,除去小凝块 ,使其在低倍镜下呈单个细胞分
散状态 ,生理盐水洗涤离心 2次 , 3 000 r /min,
5 min,配成 1× 103 /mL的酵母菌悬液。
2. 3. 4　补体致敏酵母菌悬液的制备: 取配好的 1×
103 /mL的酵母菌悬液 ,加等量新鲜豚鼠血清 ,混匀
37℃ 水浴 15 min,然后用生理盐水混匀 ,洗涤离心
1次 , 3 000 r /min, 5 min。最后用生理盐水使其体积
复原 ,即成 1× 108 /mL的补体致敏酵母菌悬液 (该
液现用现配 )。
·936· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
2. 4　 RBC-C3b受体花环实验:取 1支小试管 ,先加
待测红细胞悬液 50μL ( 1. 25× 107 /mL) ,然后加补
体致敏酵母菌悬液 50μL,摇匀 , 37℃水浴 30 min,
取出后轻轻摇匀 ,加生理盐水 100μL,再加 0. 25%
戊二醛 50μL,再摇匀 ,取 50μL水平涂片。吹干后 ,
用姬姆萨 -瑞氏染液染色 1 min,再加少许的瑞氏缓
冲液 ( p H 6. 4)染 10 min,用自来水冲洗。最后在高
倍显微镜下计数 200个红细胞中的酵母菌的花环
数 (以结上两个或两个以上的红细胞为花环 ) ,并换
算成百分率 ,作为 RBC-C3b受体活性的指标。
2. 5　红细胞免疫复合物 ( CIC) 花环实验: 取 1支
小试管 ,先加待测红细胞悬液 50μL ( 1. 25× 107 /
m L) ,然后加补体致敏酵母菌悬液 50μL,摇匀 , 37
℃ 水浴 30 min,取出后轻轻摇匀 ,涂片、固定、染色、
计数、换算同 RBC-C3b受体花环实验 ,其百分率作
为红细胞膜上吸附免疫复合物量的指标。
2. 6　血清中 RFIR测定:每组各取 2支小试管 ,分
别加入新鲜待测小鼠血清 75μL,然后将第 1管置
58 ℃ 水浴 , 30 min,第 2管置室温。 每管各加
1. 25× 107 /m L正常鼠的红细胞悬液 50μL,置 37
℃ 水浴 30 min。 加 1× 108 /mL的补体致敏酵母菌
悬液 50μL,轻轻摇匀。再放 37℃ 水浴 30 min,然
后加生理盐水 200μL,加 0. 25% 戊二醛 50μL混
匀。从各管中取出约 1 /3的细胞悬液水平涂片 ,吹
干后 ,用瑞氏染液染色。高倍镜下观察红细胞呈红
色 ,酵母菌呈蓝色 , 1个红细胞结合上 3个或 3个以
上酵母菌为 1个花环 ,每管记数 200个红细胞 ,算出
花环率。按下面公式求出抑制率 ,用抑制率代表血清
中 RFIR活性。
RFIR= ( 58℃ 灭活血清组花环率 - 室温血清组花环
率 ) /58℃ 灭活血清组花环率× 100%
2. 7　血清中 RFER测定:每管各取 2支小试管 ,第
1管加待测新鲜小鼠血清 75μL,第 2管加生理盐
水 75μL,然后第 1管置 58℃ 水浴 30 min,第 2管
置室温。 每管加入配好的 1. 25× 107 /mL正常鼠红
细胞悬液 50μL,摇匀 ,放 37℃水浴 30 min。取出
后 ,各加 1× 108 /mL补体致敏酵母菌悬液 50μL,
摇匀 ,再放 37℃水浴 30 min。然后各加 200μL生
理盐水混匀 ,再加 0. 25% 戊二醛 50μL,混匀。从各
管中取出 1 /3细胞悬液水平涂片 ,吹干 ,用瑞氏染
液染色。高倍镜下观察 ,每管涂片记数 200个红细
胞 , 1个红细胞结合上 2个或 2个以上酵母菌为 1
个花环 ,算出各管花环率。 按下面公式计算出促进
率 ,用促进率代表血清中 RFER活性。
RFER= ( 58℃ 灭活血清组花环率 - 生理盐水组花环
率 ) /生理盐水组花环率× 100%
2. 8　数据处理:结果均以 x± s表示 ,数据均采用两
样本均数 t检验 ,对疗前、疗后指标的变化给予配对
资料 t检验。
3　结果
3. 1　对实验性 GN 小鼠 RBC-C3b受体、 RBC-I-
CRR、 RFIR及 RFER的影响:见表 1。从表 1可知 ,
消红散可以使 GN小鼠 RBC-C3b受体活性显著提
高 , RBC-ICRR明显降低 ,随着剂量的增加 ,药物的
作用也增加。消红散还可以使 RFIR显著下降 ,而使
RFER显著上升 ,并接近于正常组 ,结果提示 ,疗后
小鼠接近正常 ,与阳性对照组相比 ,消红散低剂量效
果较优。
3. 2　模型组小鼠给药前后各项指标测定结果比较:
见表 2。模型组小鼠各项指标给药前后测定结果差
异无显著性 ,说明 GN小鼠没有自愈的可能。
4　讨论
　　红细胞是血液中最多的一种血细胞 ,除担负着
运送氧和二氧化碳、维持机体组织器官正常新陈代
谢的功能外 ,还具有多种重要的免疫功能 ,红细胞的
免疫功能主要是通过其膜上的 C3b受体 ( CRI,也
可称黏附分子 )的介导来实现的 , CRI是分子键内
部存有二硫键的单链糖蛋白 ,是红细胞黏附的关键
表 1　消红散对 GN小鼠 RBC-C3b,RBC-ICRR,RFER和 RFIR的影响 (x± s, n= 10)
Table 1　 Ef fect of Xiaohong Herbal Powder on RBC-C3b, RBC-ICRR , RFER
and RFIR of glomerulonephrit is mice ( x± s , n= 10)
组　别 剂量 / ( g· kg- 1) RBC-C3b /% RBC-ICRR/% RFIR/% RFER/%
正常 - 　　 15. 96± 3. 74 　　 13. 84± 2. 95 　　 28. 42± 10. 80* * 　　 47. 29± 29. 22
模型 - 6. 00± 2. 46 22. 97± 3. 94 48. 14± 8. 11 29. 57± 9. 92
阳性对照 18. 75 8. 25± 3. 20* 14. 88± 3. 88* * 23. 14± 9. 33* * 43. 41± 10. 77*
消红散 79. 20 7. 47± 1. 59 20. 91± 3. 94* △△ 25. 29± 18. 34* * 38. 57± 7. 53
39. 60 12. 78± 3. 94* * △△ 18. 66± 3. 45* * △△ 24. 00± 12. 15* 36. 43± 12. 40△
19. 80 13. 97± 4. 10* * △△ 20. 91± 3. 94* △△ 27. 86± 11. 30* * △ 58. 57± 10. 95* * △
　　　与模型组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01; 与阳性对照组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01
　　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs model g rou p; △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01 vs posi tiv e cont rol group
·937·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
表 2　模型组小鼠 RBC-C3b, RBC-ICRR, RFER和
RFIR给药前后测定结果比较 (x± s, n= 10)
Table 2　 Comparison of RBC-C3b, RBC-ICRR, RFER
and RFIR of model group mice by pre- and
post-administrat ion ( x± s, n= 10)
模型组 RBC-C3b /% RBC-ICRR/% RFIR/% RFER/%
疗前 6. 28± 2. 64 22. 54±4. 53 45. 14±11. 88 34. 71± 10. 99
疗后 6. 00± 2. 46 22. 97±3. 94 48. 14± 8. 11 29. 57± 9. 22
部位 ,每个红细胞上大约有 500个 CRI, Sieg el算出
循环系统中红细胞的 C3b受体数为白细胞的 20
倍 ,即 C3b受体总数的 95% 分布在红细胞膜上 ,循
环免疫复合物 ( CIC) 与红细胞膜相遇的机会比白
细胞大 500～ 1 000倍。然而红细胞黏附的强弱不仅
与红细胞补体受体的数目有关 ,而且与血清中存在
的红细胞免疫调节物质有关。
消红散低剂量组的小鼠 C3b受体花环率明显
升高 , CIC的花环率明显降低 ;与模型组相比 ,差异
有显著性 ( P < 0. 01) ,这说明消红散低剂量能明显
地增强红细胞的黏附作用 ,促进红细胞的免疫功能 ,
从而减少免疫复合物的形成 ,抑制肾小球损伤。与模
型组相比消红散各剂量组小鼠的 RFER明显提高 ,
而 RFIR显著降低 ,亦说明消红散可增强红细胞的
免疫功能。
方中黄芪对免疫系统具有双向调节作用 ,能使
紊乱的免疫功能恢复。 黄芪当归二者配伍有抗氧化
自由基作用 ,可以减轻肾组织细胞在缺血、缺氧和炎
症反应时的损伤 [6 ]。白术有免疫增强、免疫调节的作
用 ,临床应用白术煎剂可使玫瑰花环形成率明显上
升。茯苓多糖有明显的促进免疫功能的作用 ,是一种
免疫促进剂。甘草能够补气和中、调和诸药。三七的
根、叶皂苷可提高红细胞黏附免疫复合物能力和红
细胞 C3b受体活性 ,有利于清除免疫复合物 ,以维
持机体的正常免疫功能。茜草具有活血化瘀功能。实
验结果表明 ,该方具有免疫双向调节作用 ,其作用是
通过调节紊乱的免疫功能而实现的。
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金荞麦 Fr4抑瘤和拮抗环磷酰胺毒性的作用
陈洁梅 1 ,顾振纶 1 ,梁中琴 1 ,周文轩 2 ,郭次仪 2
( 1. 苏州大学医学院 药理学教研室、苏州中药研究所 ,江苏 苏州　 215007; 2. 香港保健协会 ,香港 )
　　金荞麦 Fagopyrum cymosum ( T rev . ) Meisn.
又称野荞麦、苦荞头 ,为蓼科植物 ,是民间常用中草
药 ,具有活血化瘀的功效 ,临床上用于肺癌的治疗 ,
金荞麦还具有清热解毒、抗菌作用 [1 ]。金荞麦 Fr4系
从金荞麦根茎中提取的多酚类物质 ,本实验研究了
金荞麦 Fr4的体内外抑瘤作用和拮抗环磷酰胺
( C TX)的骨髓抑制作用。
1　材料与方法
1. 1　药品:金荞麦 Fr4由苏州中药研究所植化研究
室从购自上海药材公司的云南产金荞麦根茎中提取
所得的有效部位 ,为棕褐色粉末 ,主要含多酚类化合
物 (含量为 64. 25% )。体内实验时 ,用蒸馏水配制成
1% 和 2% 的溶液。
1. 2　试剂: CTX,南通制药厂出品 ,批号 970409。
1. 3　动物: 昆明种小鼠 ,体重 ( 20± 2) g ,雌雄兼
用 ,每一批实验为同一性别。由苏州大学医学院实验
动物中心提供 ,合格证编号:苏动 (环 ) 98008,苏动
(质 ) 98018。
1. 4　瘤种:小鼠肉瘤 S180 ,肝癌 H22由中国科学院上
海药物研究所提供。
·938· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-11-25基金项目: 香港保健协会资助项目 ( HK 2000918)作者简介: 陈洁梅 ( 1969— ) ,女 ,江苏张家港人 ,苏州第三人民医院主治医师 ,硕士 ,研究方向为药理学。