全 文 ：É 2V CR　Ê 297CY3
图 2　HPLC 图谱
F ig. 2　Chromatogram of HPLC
3　讨论
　　从内生真菌的分离和筛选结果来看, 植物内生
真菌具有一定多样性, 有可能利用药用植物内生真
菌来生产与宿主所产相同或相似的生理活性物质,
只是目前所分离到的内生真菌合成天然活性物质的
量很少, 有待于利用现代生物技术手段改造菌种, 优
化发酵条件及在培养物中添加前体物质等方法来提
高其有效成分的产量。随着科技进步和研究的不断
深入, 开发利用药用植物内生真菌无疑应是解决药
用植物资源短缺的最佳途径之一。
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不同采收期溪黄草中 2Α-羟基熊果酸含量的动态研究
吴剑峰1, 刘　斌2, 祝晨 3, 赖小平3Ξ
(11 广东省佛山职工医学院, 广东 佛山　528000; 21 天津医学高等专科学校, 天津　300052;
31 广州中医药大学, 广东 广州　510405)
摘　要: 目的　为确定溪黄草最佳采收期提供依据, 为按中药材 GA P 原则制定相关标准操作规程 (SO P) 并实施推
广应用, 提供基础研究资料。方法　采用R P2H PL C 法测定 GA P 基地产溪黄草药材不同采收期 2Α2羟基熊果酸的
含量。色谱条件: K rom asil R P2C18色谱柱 (250 mm ×416 mm , 5 Λm ); 乙腈20105% 三氟乙酸溶液 (7015∶2915)为流
动相; 流速 018 mL öm in; 柱温 25 ℃; 检测波长 210 nm。结果　不同采收期狭基线纹香茶菜药材中 2Α2羟基熊果酸的
含量以 8 月份为高, 即开花前期。结论　建议狭基线纹香茶菜药材在开花前枝叶繁盛时采收。
关键词: 溪黄草; 采收期; H PL C; 2Α2羟基熊果酸
中图分类号: R 28216　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 01 0081 03
D eterm ina tion of 2Α-hydroxy-ursol ic ac id from H erba R abdos iae Ser rae
in var ious collecting per iods
W U J ian2feng1, L IU B in2, ZHU Chen2chen3, LA I X iao2p ing3
(1. Fo shan M edical Co llege fo r Personnel of Guangdong, Fo shan 528000, Ch ina; 2. T ian jin M edical T rain ing Co llege,
T ian jin 300052, Ch ina; 3. Guangzhou U niversity of T radit ional Ch inese M edicine, Guangzhou 510405, Ch ina)
Abstract: Object　To supp ly the basis fo r the op t im al co llect ing period fo r H erba R abd osiae S errae
(HR S). To lay dow n relevan t Standard Opera t ing p ract ice (SO P ) in acco rdance w ith GA P of Ch inese
m edicinal m ateria ls and pu t them in to p ract ice w ith p rovid ing basic research ing data. M ethods　To deter2
·18·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003204215
基金项目:“十五”国家科技攻关计划资助项目 (992929201223)
作者简介: 吴剑峰, 女, 江苏省无锡市人, 副主任药师, 硕士学位, 一直从事药学专业的教学、科研和实践工作, 现任广东省佛山职工医学
院药学教研室主任, 1994 年获广东省“南粤教坛新秀”称号, 同年获佛山市教育基金会颁发的二等奖, 1999 年获佛山市市直优
秀教师奖, 主持了广东省立项科研课题《日本汉方制剂柴苓汤质量控制模式应用于中成药的研究》等 3 项, 参加了国家攀登计
划课题《补阳还五汤治疗脑中风作用机理研究》、国家重点科技攻关项目《中药规范化种植 (GA P) 研究》——溪黄草子课题等
多项研究, 发表论文 10 余篇, 主编了卫生部规划教材《天然药物化学》和《天然药物化学学习指导》, 担任《医学论文写作学》副
主编, 研究方向为天然活性成分和新药开发。T el: (0757) 2816702　13612540388
m ine the con ten ts of 2Α2hydroxy2u rso lic acid in HR S by variou s co llect ing periods (cu ltu red under GA P) by
R P2H PL C. Ch rom atograph ic condit ion s: K rom asil R P2C 18 (250 mm × 416 mm , 5 Λm ) co lum n; the mo2
b ile phase w as aceton it rile20105% trif luo ro2acet ic acid so lu t ion (7015∶2915) ; the velocity of f low w as 018
mL öm in; co lum n temperatu re w as 25 ℃; and the detect ion w avelength w as at 210 nm. Results　 In vari2
ou s co llect ing periods, con ten ts of 2Α2hydroxy2u rso lic acid in HR S are the h ighest in the co llect ion of earli2
er f low er of R abd osia L op han thoid es var. g era rd ianus (Beu tham ) H. H ara in A ugu st. Conclusion 　 It sug2
gests tha t HR S be gathered in the leaves luxu riance befo re b loom ing.
Key words: H erba R abd osia S errae; co llect ing periods; H PL C; 2Α2hydroxy2u rso lic acid
　　溪黄草为民间习用草药, 用于治疗湿热泻痢、跌
打瘀肿、急性黄疸型肝炎、急性胆囊炎等疾病[1 ] , 现
临床上已广泛应用于治疗乙型病毒性肝炎, 疗效确
切。其主要成分有溪黄草甲素 (rabdo serrin A ) , 溪黄
草乙素 ( rabdo serrin B ) , excisan in A , kam ebakau2
rin, 2Α2羟基熊果酸, Β2谷甾醇, 熊果酸, Β2谷甾醇2D 2
葡萄糖苷等[2, 3 ]。溪黄草包括唇形科香茶菜属 (R ab2
d osia B 1. ) H assk. 的线纹香茶菜 R. lop han thoid es
(Buch2H am. ex D. Don) H. H ara, 线纹香茶菜两个
变种狭基线纹香茶菜 R. lop han2 thoid es var. g er2
a rd ianus (Ben tham ) H. H ara, 细花线纹香茶菜 R.
lop han thoid es var. g racilif torus (Ben tham ) H.
H ara 以及同属植物溪黄草 R. serra (M ax im. )
H ara [1, 4 ]的植物全株, 广东省溪黄草药材的主流商
品为狭基线纹香茶菜[5 ]。我们对狭基线纹香茶菜的
抗鸭乙肝病毒的有效成分群进行了初步研究, 实验
表明狭基线纹香茶菜的醋酸乙酯提取部位具有显著
的抑制乙肝病毒作用, 化学分离与鉴定确定了该提
取部位中相关单体成分群主要为熊果酸类成分。本
实验以狭基线纹香茶菜的主要成分 2Α2羟基熊果酸
为指标, 应用 R P2H PL C 法, 比较 GA P 基地的不同
采收期狭基线纹香茶菜中 2Α2羟基熊果酸的含量,
以期为确定溪黄草最佳采收期提供科学依据, 为按
中药材 GA P 原则制定相关标准操作规程 (SO P) 并
实施推广应用提供基础研究资料。
1　实验材料
　　H P1100 高效液相色谱仪; H P G1315A 二极管
阵列检测器; Sarto riu s 分析天平; 乙腈为色谱纯; 水
为超纯水; 其他试剂均为分析纯; 2Α2羟基熊果酸对照
品由广州中医药大学狭基线纹香茶菜课题组从狭基
线纹香茶菜中提取分离得到, 并通过 IR , 1H 2NM R ,
13C2NM R ,M S 光谱鉴定, 经面积归一化法标定其纯
度为 98% ; 溪黄草药材采于广东清远 GA P 基地。
2　方法与结果
211　色谱条件及系统适应性: 色谱柱: K rom asil
R P2C 18柱 (250 mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 乙腈20105%
三氟乙酸溶液 (7015∶2915) 为流动相; 流速 018
mL öm in; 柱温 25 ℃; 检测波长 210 nm。理论塔板数
按 2Α2羟基熊果酸计不低于 10 000; 并且与其他成分
分离良好。对照品和样品的高效液相色谱图见图 1。É 2对照品　Ê 2样品É 2reference substance　Ê 2samp le
图 1　RP-HPLC 色谱图
F ig. 1　RP-HPLC chromatogram of reference
substance and sample
212　供试品溶液的制备: 精密称取干燥至恒重的狭
基线纹香茶菜粉末 (40 ℃烘箱中干燥 6 h, 过 60 目
筛) 015 g, 加甲醇 20 mL 回流提取 30 m in, 滤过, 残
渣再加入 20 mL 甲醇回流提取 30 m in, 滤过, 合并
滤液, 水浴蒸干, 残留物用甲醇溶解并定容于 10 mL
量瓶中, 用 0145 Λm 的微孔滤膜滤过, 备用。
213　标准曲线的制备: 精密称取干燥至恒重的 2Α2
羟基熊果酸适量, 加甲醇溶解并定容至 10 mL 量瓶
中, 制备成 011 m gömL 的对照品溶液。精密吸取上
述对照品溶液 015, 110, 210, 410, 610, 810, 10, 20ΛL , 以选定的色谱条件进样测定, 以峰面积 (Y ) 对对
照品质量 (X ) 进行线性回归, 回归方程为: Y =
·28· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
552157X - 01199, r= 01999 9, 线性范围为 0106～
2102 Λg。
214　精密度试验: 精密吸取上述对照品溶液 2 ΛL ,
连续进样 5 次, 以峰面积计算, R SD = 0192% , 表明
分析结果的精密度良好。
215　重现性试验: 取同批次狭基线纹香茶菜药材样
品 5 份, 按 212 项下方法制备供试液, 进样 5 ΛL , 测
得 2Α2羟基熊果酸的平均含量为 01915 4 m gög,
R SD = 0156% , 重现性符合要求。
216　稳定性试验: 精密吸取同一批次样品溶液 5ΛL , 分别于样品溶液配制后 0, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48 h
进行测定, 以峰面积计算, R SD = 1117% , 表明样品
溶液放置 48 h 稳定。
217　回收率试验: 精密称取 5 份已知 2Α2羟基熊果
酸含量的狭基线纹香茶菜 0125 g, 分别准确加入
2Α2羟基熊果酸对照品 015 m g, 按 212 项下方法制
备供试液, 进样 5 ΛL , 测定峰面积, 结果平均加样回
收率为 9913% , R SD = 2171%。
218　样品测定: 取广东清远 GA P 基地不同批次
(以采收日期编号)狭基线纹香茶菜 015 g, 按 212 项
下方法制备供试液, 进样 10 ΛL , 进行测定, 按外标
法以峰面积积分值计算 2Α2羟基熊果酸的含量, 实
验结果见表 1。
3　讨论
311　首次建立了采用 R P2H PL C 法测定狭基线纹
香茶菜中 2Α2羟基熊果酸含量的测定方法。比较了
不同溶剂系统和比例的流动相, 如甲醇2水, 乙腈2甲
醇2水, 乙腈2011% 盐酸溶液, 乙腈20105% 三氟乙酸
溶液, 结果表明: 在波长 210 nm , 流速 018 mL öm in,
柱温 25 ℃, 乙腈20105% 三氟乙酸溶液 (7015∶
2915)为流动相的条件下, 可以对狭基线纹香茶菜中
表 1　广东清远 GAP 基地狭基线纹香茶菜中
2Α-羟基熊果酸的含量 (n= 3)
Table 1　Con ten ts of 2Α-hydroxy-ursol ic ac id in R.
lop han thoides var. gera rd ianus in GAP base
in Qingyuan of Guangdong Prov ince (n= 3)
批号 采收日期 2Α2羟基熊果酸含量ö% RSD ö%
1 07225 0. 235 1 1. 34
2 08217 1. 934 2 0. 93
3 08225 1. 372 4 2. 12
4 09201 0. 617 2 1. 16
5 10208 0. 547 9 0. 78
2Α2羟基熊果酸定量测定, 且简便、快速、无干扰, 重
现性好, 结果准确。
312　本实验以狭基线纹香茶菜中 2Α2羟基熊果酸
的含量为指标, 筛选并确定了用甲醇 30 m in 重复加
热回流提取两次的最佳提取方法。
313　不同采收期 GA P 基地狭基线纹香茶菜样品,
其 2Α2羟基熊果酸成分以 8 月份含量为高, 8 月中旬
含量最高, 即开花前枝叶繁盛期为狭基线纹香茶菜
的最佳采收期。并提示 2Α2羟基熊果酸可能在叶中
的含量较高, 有关研究另见报道。
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甘草的免疫学鉴定方法研究
白　钢1, 曹学琳1, 杨文博1, 唐元泰2, 芮　菁2, 梁会旭2Ξ
(11 南开大学生命科学学院, 天津　300071; 21 天津市药品检验所, 天津　300070)
摘　要: 目的　利用种属特异性蛋白建立一种生药甘草的免疫学鉴定方法。方法　选用生药甘草为实验对象, 利用
抗甘草总抗原血清并结合W estern2blo t 的结果确定甘草种属特异性蛋白 (R GP)。分离纯化该蛋白抗原并制备和生
物素标记其特异性抗体, 建立夹心式 EL ISA 法用于甘草的分析鉴定。结果　该方法灵敏度高、专属性强, 对不同产
·38·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003204211
基金项目: 天津市自然科学重点基金资助项目 (003805311)
作者简介: 白　钢 (1967—) , 男, 药学博士, 南开大学生命科学学院教授, 博士生导师, 主要从事现代生物技术与中药现代化的研究。
E2m ail: gangbai@eyou. com