全 文 ：[6 ]　Wang P, Zw eier J L. Measuremen t of ni t ric oxide and perox-
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银杏内酯 A对胆碱能神经功能
损伤引起的 SD大鼠学习记忆的促进作用
高向东 1, 2 ,陈　鹏 2 ,刘俊彦 1 ,谭仁祥 1
( 1. 南京大学生命科学学院 ,江苏 南京　 210093;　 2. 中国药科大学生物制药学院 ,江苏 南京　 210009)
摘　要: 目的　研究银杏内酯 A对 Meyner t基底核 ( NBM )损伤引起的 SD大鼠学习记忆的改善作用。方法　通
过 N -甲基 -D-天冬氨酸 ( NM DA)单侧损伤 SD大鼠 NBM以破坏胆碱能神经功能 ,采用 Y型迷宫法检测动物空
间辨别学习记忆能力 ,利用放射化学法检测皮层胆碱乙酰转移酶 ( Ch AT )活力 ,观察银杏内酯 A对胆碱能损伤记
忆功能的恢复 ,脑内 Ch AT的变化。结果　银杏内酯 A对胆碱能损伤记忆功能具有恢复作用 ,且能防止 Ch AT活
力降低。 结论　银杏内酯 A能改善 NBM 损伤引起的大鼠学习记忆能力。
关键词: 银杏内酯 A; Meyne rt基底核 ;胆碱乙酰转移酶
中图分类号: R282. 71; R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0346 03
Improving effects of ginkgolide A on nucleus basalis of Meynert lesion-induced
learning and memory deficits in SD rats
GAO Xiang-dong
1, 2
, CHEN Peng
2
, L IU Jun-yan
1
, TAN Ren-xiang
1
( 1. Colleg e o f Life Science , Nanjing Univ er sity , Nanjing Jiang su 210093, China;
2. Colleg e of Biopharmaceutics, China Pharmaceutical Univ er sity , Nanjing Jiang su 210009, China)
Key words: ginkgolide A; nucleus basalis of M eyner t; choline acetylt ransferase
　　银杏内酯是银杏有效成分之一 ,已从银杏的种
皮及银杏叶中分离出 5种银杏内酯 ( A、 B、 C、 M、
J)。近年来 ,国内外对银杏内酯的药理作用进行了大
量的研究 ,其药理作用广泛 [1 ] ,对脑缺氧、局部缺血
等有较好的改善效果 ,银杏提取物用于治疗脑功能
障碍和多种类型的痴呆 ,使病人的反应加快 ,记忆改
善 ,症状好转。这些研究多数是以银杏内酯和银杏提
取物为研究对象。 为了进一步研究该作用的活性成
分 ,本研究通过 N -甲基 -D-天冬氨酸 ( NMDA)单
侧损伤 SD大鼠 Meynert基底核 (N BM )以破坏胆
碱能神经功能 ,观察银杏内酯 A对胆碱能损伤记忆
功能的恢复 ,脑内乙酰胆碱转移酶 ( ChAT) 的变
化 ,探讨了银杏内酯对中枢神经系统保护作用的
机制。
1　材料与方法
1. 1　试药:银杏内酯 A,由刘俊彦博士分离获得 ,
经核磁共振等光谱法分析与文献 [ 2]数据一致 ,其纯
度为 93%。
1. 2　动物:雄性 SD大鼠 ,体重 250～ 300 g ,购于南
京医科大学实验动物中心。
1. 3　试剂: N -甲基 -D-天冬氨酸 ( NMDA) , Sigma
公司 ;水合氯醛 ,上海试剂一厂 ;牙科磷酸锌水泥 ,上
海齿科材料厂 ;青霉素钠 ,哈尔滨制药总厂 ;硫酸链
霉素钠 ,山东鲁抗 ; [ H3 ]乙酰辅酶 A, Am-pharmacia
公司 ;乙酰辅酶 A, Sigma公司 ;毒扁豆碱 , Fluka公
司 ;氯化胆碱 ,上海试剂三厂 ;四苯硼钠 ,上海试剂一
厂 ; 2, 5-二苯基 唑 (闪烁纯 ) ,上海试剂一厂 ; 1, 4-
双 -( 5-苯基 唑基-2)苯 (闪烁纯 ) ,上海试剂一厂 ;
其余试剂皆为国产分析纯。
1. 4　仪器:江湾Ⅰ型立体定向仪 ,上海医用仪器厂 ;
307-6台式牙钻车 ,上海齿科器械厂 ; M G-3迷宫刺
激器 ,张家港市教学实验器械厂 ; LS5000TD液体闪
·346· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2001-09-11基金项目:江苏省自然科学基金 ( BK99096) ;教育部高等学校骨干教师资助计划项目资助作者简介:高向东 ( 1963-) ,女 ,现任中国药科大学生物制药学院教授 ,博士 ,主要从事衰老的分子生物学和生物新药的研究。
Tel: 025-3271298　 E-mai l: xiangd ong-gao@ ho tmail. com
烁仪 , Beckman公司 ; YJ-875型医用净化工作台 ,苏
州净化设备公司。
1. 5　方法
1. 5. 1　给药方案: 雄性 SD大鼠 ( 250-300 g ) 随机
分为 4组 ,每组 8只。分别为: 假损伤组 ( 2 mL 1%
CMC-Na ) ,模型组 ( 2 mL 1% CMC-Na) ,银杏内酯
A高剂量组 ( 40 mg /kg ) ,银杏内酯 A低剂量组
( 10 mg /kg )。每日 ig 1次 ,直至断头处死。
1. 5. 2　手术:连续给药 2周后进行手术 [3 ]。大鼠 ip
10% 水合氯醛生理盐水溶液 ( 3 m L /kg ) , 10 min后
进入麻醉状态 ,剪去颅顶切口区毛 ,水平固定于立体
定向仪上。颅顶正中纵向切开 ,暴露颅骨 ,选择前囟
后 0. 9 mm,中缝右侧 2. 6 mm ,垂直钻孔直至大脑
皮层 ,以微量进样器垂直进针 ,深度为硬膜下 6. 8
mm,停针 2 min后注入 100 nmol NMDA ( pH 7. 4
PBS, 1μL) ,注入时间为 5 min,停针 5 min后出
针。创口以 75% 乙醇消毒 ,牙科水泥封孔 ,缝合皮
肤 ,肌注双抗预防感染。 损伤组和给药组注射 1μL
100 nmo l /L NMDA (用 pH 7. 4 PBS配制 ) ,假损伤
组注射 1μL pH 7. 4 PBS。术后数日动物出现吞咽
不能 ,需每日 ig奶粉溶液。
1. 5. 3　空间辨别学习记忆实验: SD大鼠手术后 15
d,以 Y迷宫法观察动物空间辨别学习记忆能力 [4 ]。
将大鼠放入迷宫箱内适应环境 5 min,然后驱赶至
Ⅰ 臂 (起始区 ) ,停留 2 min后给予电击 ( 50～ 70
V) ,大鼠遭电击后直接逃至 Ⅱ 臂 (安全区 )为正确
反应 ,停留于 Ⅰ 臂及逃入 Ⅲ 臂 (电击区 )皆为错误
反应。大鼠在安全区停留 1 min后 ,再以此区作为起
始区给予电击 ,连续循环电击训练 (安全区转换方
向为 Ⅰ →Ⅱ→Ⅲ→Ⅰ )。以大鼠连续 10次电击训练
均为正确反应或 10次中有 9次正确反应作为达到
训练标准。每日连续学习的电击次数不超过 20次 ,
每日训练一回。记录每回训练中正确反应的次数及
每日训练中各组达到标准的个体的比率。
1. 5. 4　大鼠皮层胆碱乙酰转移酶 ( ChAT)活力测
定:将大鼠断头处死 ,立即取出全脑 ,冰上分离前脑
皮层按文献 [5 ]方法 ,测定皮层内 ChAT活力。
2　结果
2. 1　对空间辨别学习记忆行为的影响: 实验结果
(表 1)可见 , NBM损伤大鼠在每回 (除第 3次 )训
练中正确反应次数皆低于同回训练的假损伤大鼠 ,
其达标率也低于假损伤组。 表明 NBM损伤造成了
躲避电击条件反射获得障碍。各给药组大鼠每回训
练正确反应次数高于 NBM损伤大鼠 ,其达标率也
高于同回 NBM损伤组 ,表明躲避电击条件反射获
得早于 NBM损伤组 (见表 2)。
表 1　 Y-迷宫训练中每回作出正确反应的平均次数 ( n= 8)
组　别 剂　量
( mg /kg)
每回作出正确反应的平均次数
1 　 2 3 4 5
假损伤 - 3. 1± 1. 3 6. 4± 1. 1 8. 6± 3. 0 14. 3± 4. 1
NBM损伤 - 1. 8± 1. 0# 2. 7± 0. 8# # 6. 7± 2. 0 9. 5± 3. 3# 14± 3. 9
银杏内酯 A 40 1. 6± 1. 3 5. 0± 2. 0* 7. 6± 3. 3 12. 3± 4. 6* 14± 3. 6
10 1. 4± 0. 3 3. 0± 1. 1 8　± 5. 3* 10. 3± 3. 6 15± 4. 6
　　与假损伤组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01;
　　与 NBM损伤组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
表 2　每回达标大鼠比例 (n= 8)
组　别 剂　量
( mg /kg)
达标大鼠比例 (% )
1 2 3 4 5 6
假损伤 - 0 0 14. 3 71. 4 100
NBM损伤 - 0 0 16. 7 33. 3 83. 3 100
银杏内酯 A 40 0 0 33. 3 50. 0 100
10 0 0 40. 0 40. 0 80. 0 100
2. 2　对皮层 ChAT活力的影响:以皮层组织匀浆
中每 mg蛋白所产生的 [H3 ] Ach的 d. p. m.值代
表 ChAT活力 ,测定结果见表 3。结果表明: SD大鼠
注射 NMDA损伤 NBM后 ,皮层 ChAT活力显著
降低 ,而各给药组与损伤组相比 ,活力明显增高。
表 3　对皮层 ChAT活力的影响 ( x± s, n= 8)
组　别 剂　量
(m g /kg)
数　目 106 d. p. m. /mg蛋白
假损伤 - 6 2. 68± 1. 41
NBM损伤 - 6 0. 59± 0. 16# #
银杏内酯 A 40 6 1. 55± 0. 37* *
10 6 1. 04± 0. 17*
　　与假损伤组比较: # # P < 0. 01
　　与 NBM组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
3　讨论
药理学、生物化学和行为学研究表明中枢胆碱
能神经系统在学习和记忆功能中起主要作用 [4 ]。 抗
胆碱药如东莨菪碱和阿托品能损害人和动物的学习
记忆能力 ,而拟胆碱药如毒扁豆碱能促进记忆发生
并拮抗东莨菪碱的记忆损害作用 [6 ]。 研究证明红藻
氨酸鹅膏蕈氨酸 , NMDA和喹啉酸等脑内注射损伤
NBM可制作胆碱能损伤的动物模型模拟 AD[7 ]。在
以上所述的一些兴奋性氨基酸中 , NMDA不会产生
较大范围的损伤和惊厥作用 ,且性质稳定 ,因此在本
课题中 ,选用 NMDA向大鼠 NBM 注射制作 AD
动物模型。
在实验过程中观察到 ,手术后数日内大鼠表现
出吞咽不能 ,渴感缺乏和过度活跃 ,与文献报道相
符 [7 ] ;使用 Y迷宫对各组大鼠进行空间辨别学习记
忆实验 ,发现模型组大鼠每回训练正确反应次数显
·347·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
著低于相应假损伤组 ,且达到训练标准所需总电击
训练次数显著多于假损伤组大鼠 ,即表现出躲避电
击条件反射获得障碍 ,同时皮层中胆碱能标志
ChAT活性显著降低。以上现象说明动物模型成立。
银杏内酯 A对 NMDA损伤记忆功能具有恢复作
用 ,且能防止 ChAT活力降低 ,表明银杏内酯 A能
改善 NMDA损伤引起的大鼠学习记忆能力。
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biochem& Behavior, 1989, 33: 485-488.
异位杀胚汤为主保守治疗异位妊娠 37例
章　勤
(杭州市中医院 中医妇科 ,浙江 杭州　 310007)
　　我科于 2000年 3月 -2001年 7月采用异位杀
胚汤联合氨甲喋呤 ( M TX )、息隐 (米非司酮 ) 保守
治疗异位妊娠 37例 ,取得满意疗效 ,现将结果报道
如下:
1　临床材料
1. 1　研究对象: 均为本科住院病人 ,年龄 20～ 39
岁 ,平均年龄 31岁 ;停经 38～ 76 d,平均 53 d;血
HCG 167～ 5 000 U /L (本院参考值 < 10 U /L) ,有
2例超过 3 000 U /L,其中 1例血 HCG为 3 769
U /L,另 1例血 HCG> 5 000 U /L,平均 680 U /L;
B超均在宫外探及不均质块 ,其中 11例包块中见到
类孕囊回声 , 29例有直肠窝积液。
1. 2　诊断标准: a. 根据病史及妇科检查 ; b. 血
HCG值> 10 U /L; c. B超示宫内无妊娠囊 ,宫外探
及不均质块 ,周边见环状血流 ,甚至其中可见妊娠
囊 ,子宫直肠窝内积液有或无 ; d. 诊断性刮宫未见
绒毛组织。
1. 3　药物保守治疗适应症 [1, 2 ]:患者一般情况好 ,生
命体征平稳 ,无内出血或贫血征象 , B超示输卵管直
径一般小于 40 mm ,子宫直肠窝积液少或无 ,一般
最大深度少于 35 mm ,血 HCG值控制在 3 000
U /L以内 ,一般不超过 5 000 U /L。肝肾功能及血
常规正常。
2　治疗方法
异位杀胚汤基本方:紫草 20 g、当归 15 g、炒赤
白芍各 10 g、制军 9 g、丹皮 6 g、丹参 15 g、失笑散
10 g、水蛭 6 g、血竭 5 g、红藤 30 g、生草 5 g。每日
一剂 ,病情稳定后可加皂角刺 10 g、穿山甲 10 g、三
棱 10 g、莪术 10 g。配合单次 im M TX 50 mg, 口服
息隐 (米非司酮 ) 100 mg,每日 2次 ,共 5 d。
3　疗效观察
3. 1　监测指标:治疗期间观察血压、脉搏及腹痛、阴
道出血情况 ,以及药物的副反应。每周 2次血 HCG
测定及 B超复查 1次。治疗失败中转手术指征: 出
现剧烈腹痛及内出血征象 ,或治疗过程中血 HCG
持续上升。
3. 2　药物治疗成功指标: 近期成功指标包括血
HCG水平下降至正常 , B超检查包块缩小、消失或
包块内无明显血流。 远期成功指标包括治疗后输卵
管是否通畅 ,宫内受孕率及异位妊娠再发率等。本文
仅统计近期成功率。
4　疗效结果
·348· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2001-12-03作者简介:章勤 ( 1965-) ,女 ,浙江上虞人 ,医学学士 ,副主任医师 , 1986年毕业于浙江中医学院中医专业 ,一直在杭州市中医院妇科从事临床、教学、科研工作。本院中妇科为国家级重点专科、省级重点学科。本人系本科著名中医妇科专家、国家级名老中医何少山的学术继承人 ,医院跨世纪人才。至今已发表学术论文近 20篇 ,主持省级课题 1项 ,目前以妇科内分泌疾病 ,不孕不育为主要研究方向。 Tel: 0571-85157591　转 2315　 E-mail: Zhang Qin T T@ Hotmail. com