全 文 ：广西 植 物 Guihaia 19(3)．282= 塑
文章编号：1000—3142(1999)03--0282--03
高效液相色谱分析银杏萜内酯的含量
李典鹏，方 宏，梁小燕，
( 。 r 植蛳研
陈海珊，文承新
亍岁 7／
广西桂林 541006) ／＼
， 7 2
摘 要：用高效液相色谱法测定银杏叶及提取物中银杏 内酯 A、B、C和 白果 内酯的含量。采用 Cl R
分离桂。示差检测器，甲醇 ：水 (33：67)为流动相，力法回收率平 均选 97％ 以上．变异系数
(CV)为 工1％
关键词：查墼 塑璺堂
中图分类号：Q946．85 l
B·c；旦盟嗵 ；
文献标识码：A
银杏叶提取物
Determination of lactone in extract of Ginkgo
biloba Ieaves by high performance liquid
chromatography(HPLC)
LI Dian-peng， FANG Hong， LIANG Xiao—yan， CH EN Hai-shan， W EN Yong-xin
(G~angM InstituteofBot~y．GuangxiZhuungzu f㈣ w RegionandAcademiaSinica，Gu[1in 57II29．China)
Abslraet： A HPLC method had been developed for the determination ofGinkgolde A B、 C and
Bilobatides in Ginkgo bitoba[evaves and its extract．A ClEcolumn using methanol，water(33：67)as
mobile phase，and R1 detector was used．The results ha ve shown that the-recoveries are over 97％
andCV is 2．1％ ．
Key words： HPLC；Ginkgollde A B． C：Bilobalide；extractofGinkgo bifoba L
银杏 叶 中存在 两类重 要生 理活性 物质—— 黄 酮类化 合物 (fiavonoids)和萜 内酯 (gink-
golides and bilobalide)。银杏叶黄酮类化台物具有捕获游离基，清除活性氧，促进血液循环及脑代谢
等功能，萜内酯是银杏叶中所吉的另一类重要有效成分，尤其是银杏内酯 B作为有效的血小板活化
因子 (PAF)拮抗剂在医药界 已得到肯定，白果 内酯在治疗神经疾病中亦有良好的疗效，9O年代以
来，国外有关银杏叶萜 内酯的分析研究工作发表了多篇论文 ，但由于银杏叶成分复杂 萜内
酯在银杏叶中的含量很低，需要经分离、纯化后才能进行测定，预处理步骤较为复杂，这就不可避免
地造成对测定成分的损失，且 内酯的特征紫外吸收峰很弱，用 UV检测不灵敏 国内虽已有用高教
液相色谱测定萜内酯的报道 ¨，但仅测定了银杏内酯 B的含量 本研究通过简化预处理步骤，并以
收稿日瓤 1999-01-01
作者简介：李典鹏 (1969一j，男．助理研究员 从事植物化学研究工作
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3期 李典鹏等： 高效液相色普分析银杏萜 内酯的含量 283
RI检测器代替通常用的 uv检测，采用外标法对银杏叶及其提取物中萜内酯含量进行高效液相色谱
分析。该方法简便可行 准确、精度高 适用性强。
1 仪器和试剂
1．1仪器
美 国 Waters公 司 高效 液相 色谱 仪 采 用 510泵 ，810色 谱 工 作 台 ， U6K 手 动 进样 器，
Waters410RI检测 器， 梅特勒 AT200电子天平
1．2试剂与样品
重蒸水 (自制，Millipore HA0．45#m 滤膜过滤)， 甲醇 (色谱纯 Millipore FA0．5#m 滤膜过
滤)， 醋酸 乙酯 (分析纯)， 白果内酯 (Bilobalide)和银杏 内酯 A．B (Ginkgolide A．B)，购 自
Sigma公司，溶解于甲醇中，配制成 1mg／mL，银杏叶采自本所银杏种植园，银杏叶提取物 自制=
2 详品处理
1银杏叶提取物样品制备方法 准确称取银杏叶提取物 600 mg于 100 mL锥形瓶中，加人 30 mL
5％ 甲醇水溶液，在 150℃油浴中煮沸 l0～15 min，冷却后，溶液过滤至另一锥形瓶，滤渣用少量热
水洗 3～4敬，滤液台并，加 5％HCI数滴调 pH值 3～4左右，用醋酸乙酯萃取 6～7次，台并醋酸
乙酯部分以水洗至水液呈中性，再减压回收醋酸乙酯部分，真空抽干至无醋酸乙酯味。以甲醇定容至
10mL容量瓶，摇匀，过滤，待进样
2，2银杏叶样品制备方法 银杏叶经低温干燥粉碎后准确称重 5 g于 100mL锥形瓶，加 15％甲醇 50
mL回流提取 0．5 h，提取1艟在小布氏漏斗上用摅纸趁热真空过滤，叶渣重新放到锥形瓶中，用 15％
甲醇以相同程序进行二次提取，过滤后用 5 mL 5gO／o甲醇洗涤瓶子，2次滤液和洗液台并，上至装有
5 g聚酰胺的柱中，用 15％甲醇 50 mL洗脱，流出液合并，减压回收，蒸发至小体积，以5％HC1调
pH3～4，以下步聚与银杏叶提取物的制
薪方法相 同
3 方法与结果
3．1色 谱 条 件 色 谱 柱 ： Spherisorb
RP-18(10um)250×4mm 流动相： 甲
醇 ：水 (33：67)；柱 温：35℃ ； 流速：
1mL／min．进样量 10 L_
数据处 理方法采用峰面积 外标法 的定
量程序：
3．2标准曲线与重现性 准确 称取 银杏 内
酯 A．银杳 内酯 B．白果 内酯各 5．0mg
于 5 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，
瓜儿
图 I 银杏叶内酯类化音物色谱图
Fig．1 The chromatogram ofal Ginkgo]actor~s
I．ChmTI1日扣BrBm ofst~aards；LChromatogram s PI
a．自 内j喧_B ban ．b．韫吉自酯^ ink~olide^ 】
‘银杏自黯 B mkBo『№ B)． 糨吝内醋C(Ginkgolidec
微量进样器分别进样 2ttL、4ltL、8 L’12 ．16ttL、20gL于高效液相色谱仪，记录峰面积。峰面
积对浓度进行回归计算，得回归方程：银 杏内酯 A：Y=0．743 x一0．032(T=0．9986)，银杏内酯 B：
Y=0．726 x一0．175(r=0．9967)，和白果 内酯 Y=0．767 x+0．131(r=0．9973) 线性 良好
另取上述标准品液进样 l0 L，共进样7次，得变异系数均在 2．5％ (rt=7)以内。
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广 西 植 物 9卷
3．3回收率考察
在数份银杏提取物样品中，分别准确加人萜内酯对照品 1．O0 mg，然后按样品前处理法进行处
理，以 1O儿L进样量进样测定各萜内酯回收率。结果见表 1：
3．4样品测定 表1 银杏各萜内音的回收率
按银杏 叶提取物及银杏叶样 品处理方
法 分别对不同批号的银杏提取物及不同
产地、不同采集时间的银杏叶进行测定，
结果见 表 2
4 讨论
在样品净化处理过程中，我们用醋酸乙
酯进行萃取，醋酸乙酯较难除去且残留的醋
酸乙酯峰对样品峰有干扰 因此样品在最后
步骤必须真空干燥．将醋酸乙酯除尽。
由于缺 乏银杏 内酯 c对
照品，在此，我们根据分子量
相似原理，暂 以银杏内酯 B
对照品对银杳 内酯 C 进行外
标法定量
从测量结果我们看出，不
同的处理工艺 (银杏叶提取物
I、Ⅱ、Ⅲ号为不同工艺)得
出的产品萜内酯含量不一样，
有些工艺对白果内酯的损失较
大，另外，不同产地、不同采
Table I Recoveries ofG inkgolides and Bilobalide
表 2
Table 2 Content ofG inkgolides and Bi~balide in different samples
组舒吉盘
Canteat
银杏叶提取物 广西产银杏绿叶 广西产银杏黄叶 云南产银杏绿叶
Extm~afG 咖 (采收期 97．7) (采收期97．I1) (采收期96．7)
btlo kav Gt~~lleav~ Yeltow】 Gr nleav~
-- -- -- -- -- -- -- —． -． ．． ．- - -- -- -- -- -- -- — — fromGuangx[ fram Guangxi fram Yunnan
【号 Ⅱ号 Ⅲ号 pravlnce province province
收期的银杏叶其萜内酯含量均有一定差异。
本研究率蒙本所成挂仁研究员指导、审阅，陈秀珍高工参加部分工作，在此一并致谢。
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