全 文 ：3
.
2 辣 味成分的含量与干姜 、 姜皮 、 炮姜 的
药效 : 中医认为 , 干姜味辛性温 ,姜皮 味辛性
凉 , 这可能与干姜中辣味物质含量高 ,姜皮中
辣味物质含量低有关 。
参 考 文 献
1 黄雪松 . 生姜抗 氧化成分研究 (1 )一一提取 、 分 离 、 鉴定
与应用 (博士学 位 论文 ) . 武汉 : 华 中农业 大学 食科 系 ,
1 9 9 8
2 黄启荣 , 国外医学一中医 中药分册 , 19 8 9 , n (6 ) : 3 2
3 李 玉平译 , 国外医学 一中医 中药分册 , 1 986 , 8 ( l ) : 24
4 池 田正 书 ,等 . 国外 医学 一中医 中药分 册 , 1 9 8 3 ,总 l() 7
5 朱守川 ,等 . 国外医 学 一中医 中药分册 , 19 87 , 9( 3) : 32
6 原次健 . 日本公开特许公报 , 昭 6 0一 17 8 8 18 , 1 9 8 5
7 无锡 轻工学 院等编 . 食 品分析 . 北 京 : 轻 工业 出版社 ,
1 9 8 3
: 8 1
8 C h e n C h u
一 e h i n
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J A g r i
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F o o d C h e m
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1 9 8 6
,
( 3 4 )
:
4 7 7
9 B a r a n o w
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.
J o f C h r o m a t o g
r , 1 9 8 5 , ( 3 1 9 )
: 4 7 1
1 0 张维勤 . 山东农业科学 , 1 9 9 1 , ( 6 ) : 1 1
n 黄雪松 , 等 . 中国 调味 品 , 19 96 . (8 ) : 31
( 1 9 9 8
一
0 9
一
2 1 收稿 )
D e t e r m i n a t i o n o f t h e P u n g e n t P r i n c i P l e s i n G i n g e r P o w d e r
,
G i n g e r S k i n a n d B a k e d G i n g e r
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,
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,
T a ia n 2 7 1 0 1 8 )
A b s t r a e t T h e p u n g e n t p r in e ip le s in g in g e r ( Z in g i占e r Q fj 王c i n a z。 R o s c . ) w a s m e a s u r e d b y H p I J C . T h e
c o n t e n t s o f g in g
e r o l i n g i n g e r p o w d e r
,
g in g e r s k in a n d b a k e d g in g e r w e r e 1
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H P L C 测定银杏愈伤组织内醋 A 的研究△
浙 江大学西溪校 区 生命科学学院 (杭州 3 1 0 0 12) 陈云龙 晰 徐 程 徐礼根 杨志竖
摘 要 建立 了一种 可用于银杏 离体细胞培养物 中内醋 A 含量分析 的 R P 一H P L C 方法 。 样 品经低
浓度 甲醇提取后 , 用中性或 酸性氧化铝固相萃取柱 纯化 , 用示 差检测器检测 , 银杏 内醋 A 的最低检
测限 为 o , 0 12 产g ,方法回收率 为 (9 6 . 。土 2) % , R S D 为 3 . 1% 。
关键词 银杏 愈伤组织 银杏 内酷 A H P L C
银杏 内醋 ( 包括 内醋 A 、 B 、 C ) 作为一类
特 异有效 的血 小板 活化 因 子 ( p l a t e l e t 一 a e t i-
v a t i n g f a e t o r ) 受体拮抗剂 , 近年来受到 了世
界各国药学工作者的广泛关注 。 由于这类化
合物分子立体结构复杂 , 人工合成的技术难
度大 , 目前仍以银杏 叶作为提取银杏 内醋化
合物的主要来源川 。 关于银杏离体培养产生
内醋化合物的研究 ,尽管做了大量工作 ,但由
于分析测试技术上的限制 , 银杏细胞培养中
内醋含量分析尚有一定 困难 [2一 4〕。 笔者通过
采用细直径 H P L C 快速分析柱 , 检测到了愈
伤组织培养物中银杏内醋 A 化合物 。
1 仪器和材料
高效 液相 色谱仪 : 日本 岛津 , 包括 L C -
认黑es货鱿梦器戮)程黯址当盆器 ) ,呈皆烤笑撰靓劣篙添 用基础研究 , 是 “ 银杏叶提取物新生产工艺研究 ”成果 的主要完成人之 一 , 已 发表研究论文 10 多篇 ,现 主持省 自然科 学基金项 目 1 项 , 主持或参加省教委项目
△ 浙江省 自然科学基金资助项 目 ( 2 9 7 0 6 6)
《中草药万19亏百车爵百6盔角万丽 . 4 2 5 ·
6 A型输液泵 , R I D 一 6 A 型示差检测 器 , S C L -
6 A 型系统控制器 , 以及 C 一 R 3 A 型数据处理
机 。
银杏幼叶 : 1 9 9 8 年 4 月 中旬采 自浙江大
学西溪校区 , 银杏种 实 (大佛手 )购 自浙江富
阳 。
银杏 内醋 A 、 B 对 照品由 日本梅 田诚一
教授提供 ; 中性氧化铝 、 聚酞胺为柱层析用 ;
C
1 8固相萃取柱 , 大连依利特科学仪器有限公
司出产 。 甲醇为色谱纯 , 其它试剂均为分析纯
级 。
2 色谱条件
色谱柱 : H y p e r s i l O D S : 3拌 2 . 0 m m ( id )
X 1 0 O m m ; 流动相 : 甲醇 一水 (3 3 : 6 7) ; 柱温 :
3 0℃ ;流速 : 0 . 2 m L /m in ;示差检测器 : 1 . O X
1 0一 6R I U
。
3 愈伤组织诱导培养
银杏幼叶 、 种胚愈伤 组织按文献闭方法
进行 诱导 , M S 固体培 养基 中含 1 . 0 m g / L
N A A
、
0
.
1 m g / L K T
、
3 0 9 / L 蔗糖 , 调 p H
至 6 . 0 , 培养温 度 (2 5 士 1) ℃ , 每 3 周继代 一
次 ,继代两代后 ,将愈伤组织取 出 , 冷冻干燥
后供样 品制备用 。
4 样品提取制备
参照姚渭溪等人方法圈并作改进 。 称取
1
.
0 9 干愈伤组织 , 置于 50 m L 圆底烧瓶中 ,
加 1 0 %甲醇溶液 1 0 m L 和少量沸石 , 回流提
取 3 次 , 每次 6 0 m in , 趁热用布 氏漏斗抽滤 ,
合并滤液 , 用旋转蒸发器浓缩至干 ,残渣溶于
s m L 甲醇中 ,将溶液加人装有 5 9 中性氧化
铝 的小层析柱上 (预先用 甲醇装柱并冲洗 ) ,
用 甲醇洗脱 , 收集 洗脱液 25 m L , 浓 缩并用
N
: 吹干后 , 再用 0 . 2一 0 . 5 m L 甲醇溶液溶
解 ,密封后 置于 50 ℃水浴 中恒温 60 m in , 取
出 ,供 H P L C 分析用 。
5 方法回收率试验和工作曲线制作
称取 1 9 干愈伤组 织 , 加人 30 拜g 银 杏
内酷 A 和 2 0 拌g 银杏内醋 B 标样 ,按上述样
品提取纯化过程制备分析样 品 ,重复 3 次 ,计
算各 自方法 回收率 。
·
4 2 6
.
将 银杏 内醋 A 标 准样 品 , 稀释 配制 成
0
.
0 2 4
、
0
.
0 3 6
、
0
.
0 4 8
、
0
.
0 6 0
、
0
.
0 7 0 拼g /拼L 系
列浓度 ,进样 10 拜L , 以最小二乘法作线性回
归处理 , 得 回归 方程 Y (峰 高 ) 一 20 . 9 1 2 2 +
3 2 9 8
.
6 6 C (拌g ) , r = 0 . 9 9 3 4 。
6 结果与讨论
6
.
1 由于银杏内醋化合物是不挥发性的 , 在
未衍生化前无法进行 G C 分析 , 同时它们在
2 1 9 n m 处的微弱紫外吸收系数 , 易受其它杂
质干扰 ,故也难以用特异性的灵敏 的 H P L C -
U V 方法检测川 , 对于 目前银 杏内醋浓度仅
为 拌g 范 围的离体愈伤组织 、 细胞 悬浮培养
物来说 ,受方法最低检测量等灵敏度 因素限
制 , 尚无 法用常规 的 H P L C 一 R l 分析方 法来
监控银杏内醋的生物合成 。
6
.
2 本试验通过采用直径为 2 . 0 m m 的快
速 R P 一 H P L C 分析柱 ,可节约大量流动相 (流
速为 0 . 2 m L /m in ) ,分析时间不到常规柱的
二 分 之 一 , 银 杏 内醋 A 的 最 低 检 出 限为
0
.
01 2 拌g ,从而使 H P L C 一 R l 方法分析检测离
体愈伤组织 、 悬浮细胞培养物 中的银 杏内醋
含量成为可能 。
6
.
3 银杏内醋分析难度大 , 除了缺乏特异灵
敏的检测器外 , 一个重要原因是样 品纯化处
理复杂 〔6 , ’ 〕 。
一银 杏内醋 A 卜幼 叶愈伤组织
图 1 样品的 H P L C 谱
有文献报道 , 使用硅胶柱 来提纯样品的
方法闭 , 从理 论上讲 氧化铝对 酚性杂质的去
除效果要好于硅胶 ,但在 p H > 7 . 5 的碱性条
件下 , 银杏菇内醋化合物易发生开环反应川 ,
故必须选用 中性或 酸性氧化铝 作固相 提取
柱 。 本试验在 干愈伤组 织 中加人约 50 一 70
n m ol 内醋标准品 , 采取以 上方法提取纯化 ,
进行方法回收率试验 ,结果银杏内醋 A 、 B 回
收率 分 别 为 ( 9 6 . 0 士 2 ) % , ( 9 3 . 1 士 3% ) ,
R S D 为 3 . 1 % , 3 . 8% 。 表 明该提取纯化方法
是准确可行的 。
6
.
4 按以上分析条件 , 经继代两代的银杏幼
叶 、 种胚愈伤组织的高效液相色谱图上仍 能
看到明显的银杏内醋 A 峰 , 见图 1 ,说明叶和
种胚愈伤组织都能生物合 成银杏 内酷 A 化
合物 , 其在叶愈伤组织中的含量要高于胚性
愈伤组织 ,分别为 48 和 12 拌g / g ,见表 1 。 至
于银杏内醋 B , 本试验未能检测到 , 尚有待进
一步深人研究 。
表 1 不 同样品中银杏内醋的含 t
内醋种类 A ( m g / g ) B ( m g / g )
银杏幼叶 0 . 54 0 . 63
银杏种实 一 一
幼叶愈伤 0 . 0 4 8 一
种胚愈伤 0 . 0 12 一
参 考 文 献
1 V a n eB
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, e t a l
.
J C h
r o m a t o g r
,
1 9 9 1
, 5 4 3
: 3 7
2 N a k a n i
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, e t a l
.
J A m C h
e m s o e
,
19 7 1
, 9 3 : 3 5 4 6
3 C a r r i e r D J
, e t a l
.
P l a n t C e l l R e p
,
1 9 90
,
8
:
6 35
4 N a t h a l i e C h a u r e t
.
J Ch r o m a t o g r
, 1 9 9 1
,
5 88
: 2 8 1
5 Y ao w e i x i
, e t a l
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P r o e e e d i n g s o f
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9 7 I n t e
r n a t i o n a l s e m
-
in a r o n G i n k g o
.
B e iji n g
, 1 9 9 7 : 1 8 2
6 H o o n H u h
, e t a l
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P l a n t a M e d
, 1 9 9 3 , 5 9
: 2 3 2
7 M e e H e e j e o n
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P la n t C e l l R e P
,
19 9 5
,
1 4
:
5 0 1
8 林 启 寿编 著 . 中草 药成 分化 学 . 北京 : 科 学 出版社 ,
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:
2 4 4
( 1 9 9 8
一
1 1
一
1 6 收稿 )
D e t e e t i o n o f G i n k g o l i d e A i n G i n k g o ( G i
n k g o bi l o b a ) C a l l u s C u l t u r e b y H P L C
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,
Z h
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a n g U n iv e r s it y
,
H a n g z h o u
3 1 0 0 1 2 )
A b s t r a e t A n a n a ly t ie a l m e t h o d w a s d e v e lo p e d t o e o n f ir m t h e p r o d u e t io n o f g in k g o l id e A b y G i n k g o
b i l o b a L
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l l u s e u l t u r e d i n v i t or
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B io m a s S s a m p l e s w e r e s e le e t i v e l y e x t r a e t e d w it h 1 0% m
e t h a n o l a n d t h e r e
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《中草药 》杂志 1 9 9 9 年增刊征订启事
1 9 9 9 年是《 中草药 》杂志创刊 30 周年 , 为了总结历史 , 规划未来 , 中草药信息中心站和 《中草药 》杂志编辑
部 于 1 9 9 9 年 5 月底在湖南省张家界市 召开 “ 庆祝 《 中草药 》杂志创刊 3 0 周年暨第二届中药新药研究与开发信
息 交流会 ” , 为了配合会议的召开 , 经 国家科技部 国科发财字 〔1 9 9 9〕0 1 0 号文批准 , 我们编 辑出版 了《 中草药 》
杂志 1 9 9 9 年第 30 卷增刊 。 本增刊共收载论文 1 60 篇 , 特邀中国工程 院院士 、 国家药 品监督管理局药 品审评中
心及国内十多位知名专家和 中青年学科带 头人就 中药新 药研究的热点问题撰写综述文章 (文题见《中草药 》杂
志 1 9 9 9 年第 4 期内 2 页 ) 。 另外 , 还 有反映国内近年来中药植化 、 药理 、 分析 、 制剂 、 药材 、 临床等方面 的新理
论 ,新方法和新成就的科研论文和综述文章 14 0 余篇 。
增刊为 16 开本 , 2 24 页 (约 45 万字 ) , 天津市报刊增刊特许准 印证 ( 9 9 )第 0 45 号 ,定 价 65 元 , 另加包装费 、
邮费 5元 。 凡订阅者请向我部索取订单 : 3 0 0 1 9 3 天津市鞍山西道 308 号 《中草药 》杂志编辑部 。
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 6 期 . 4 2 7 ·