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夏天无对小鼠学习记忆及脑内乙酰胆碱酯酶的影响
盛 瑞, 顾振纶,蒋 航,曹 奕X
(苏州大学医学院 药理教研室、苏州中药研究所,江苏 苏州 215007)
摘 要: 目的 阐明夏天无制剂对记忆障碍小鼠的学习记忆功能及对小鼠脑内乙酰胆碱酯酶 ( AchE) 的影响。方
法 以东莨菪碱造成小鼠记忆获得障碍和乙醇造成小鼠记忆再现障碍,同时测定了小鼠脑内 AchE 的活性。结果
夏天无口服液及胶囊剂 0. 5, 1, 2 mg / kg 对记忆障碍小鼠的学习记忆功能有不同程度的改善作用,并可抑制小鼠脑
内 AchE 活性。结论 夏天无口服液及胶囊剂能增强小鼠的学习记忆功能,该作用可能与抑制 AchE 有关。
关键词: 夏天无;学习记忆; 跳台法;乙酰胆碱酯酶
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0543 03
Effects of Rhizoma Corydalis Decumbentis on learning and memory
ability and brain acetylcholinesterase activity in mice
SHENG Rui, GU Zhen-lun, JIANG Hang , CAO Yi
( Depar tment of Pharmaco lo gy , Suzhou Institute o f Chinese Mat eria Medica,
M edical Colleg e of Suzhou Univ ersit y, Suzhou 215007, China)
Key words: Rhiz oma Corydalis Decumbentis ( RCD) ; learning and memory ability; step down test ;
acetylcho linesterase ( AchE)
阿尔茨海默病 ( AD) 是严重危害老年人健康
的疾病之一, 研究表明,痴呆的发生与脑内神经递质
的异常密切相关,其中胆碱 ( Ach) 系统尤为重要。
胆碱能假说认为中枢胆碱系统功能下降导致认知功
能受损。痴呆病人的认知能力受损程度与乙酰胆碱
酯酶 ( AchE) 活性相对增高及 Ach 的相对减少呈
正相关,而且胆碱能系统在认知功能的恢复中也起
重要作用[ 1]。
夏天无 Rhiz oma Corydal is Decumbentis ( RCD)
具有降压镇痉,活血化瘀,行气止痛功效。临床主要
治疗脑梗死, 周围神经损害性瘫痪,腰椎间盘突出
症,坐骨神经痛,关节腰腿等疼痛及中小学生假性近
视[ 2]。但对老年性痴呆的作用未见报道。本实验从夏
天无中提取有效部位,筛选实验发现其体外有较强
的 AchE 抑制作用, 推测可能对动物的学习记忆功
能产生影响。为此本实验探讨其对小鼠学习记忆等
脑功能的作用,同时检测小鼠脑组织中 AchE 活性,
以期阐明该药的作用机制,为临床应用提供依据。
1 材料
1. 1 药物与试剂:夏天无口服液及胶囊剂由苏州中
·543·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 34 卷第 6 期 2003年 6月
X 收稿日期: 2002-10-05基金项目:苏州市科技局社会发展基金 ( SS 0126) ;专利号: 02111103. 0作者简介:盛 瑞( 1975—) ,女,江苏常州人,苏州大学在读博士,主要从事心血管药理研究。
T el: ( 0512) 65190599 E-m ail : s heng rui@163. com
药研究所植化一室提供。夏天无口服液 10 mL/支,
含中间体 7. 5 mg, 总碱含量为 0. 54 mg / mL, 批号
011215。夏天无胶囊剂 75 mg/粒, 含中间体 7. 5
mg ,总碱含量为 0. 072 mg / mg ,批号 010910。双益
平 ( HupA) 由上海医科大学红旗制药厂提供, 批号
011001。氢溴酸东莨菪碱 ( scoplamine, Scop) 购自
上海禾丰制药有限公司,批号 0112027。AchE 测定
试剂盒 (批号 20020326) , 考马斯亮蓝蛋白测定盒
(批号 20020326) 由南京建成生物工程公司提供。
其他试剂均为分析纯。
1. 2 动物:昆明种小鼠, 雌雄各半, 体重 18~22 g,
由苏州大学实验动物中心提供, 适应性饲养 2 d 后
进入正式实验。
2 方法
2. 1 分组及给药方法: 将小鼠随机分成空白对照
组,模型组, 双益平 0. 4 mg / kg 组, 夏天无口服液组
(含夏天无中间体剂量 0. 5, 1, 2 mg/ kg ) , 夏天无胶
囊组 (含夏天无中间体剂量 0. 5, 1, 2 mg / kg )。各组
小鼠按各自所配浓度 0. 2 mL/ 10 g ig ,每天 1次,连
续给药 15 d, 对照组及模型组 ig 等体积蒸馏水。
2. 2 跳台实验方法:参照文献方法[ 3, 4] ,应用 XZC-
5T 型小鼠跳台装置, 实验时将动物放在反应箱中,
适应 3 min,然后通 36 V 电流, 动物受电击,其正常
反应是跳上平台, 如此训练 5 min。24 h 后测验,记
录 3 min 内错误次数及第一次跳下平台潜伏期。
2. 3 东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍实验: 第 14 天
给药后 1 h 训练, 训练前 15 min 模型组及各给药组
ip 东莨菪碱 2 mg / kg, 对照组 ip 等体积生理盐水。
记录 24 h 后跳台测验成绩。
2. 4 小鼠脑内 AchE 含量测定[ 5, 6] :跳台实验后立
即处死小鼠, 断头取脑,按 1∶9 于 PBS 液中制成
10% 脑匀浆,在 4 ℃ 下 4 000 r/ m in 离心 10 m in,
取上清液。按照 AchE 测定试剂盒说明书依次加入
底物缓冲液和显色应用剂, 混匀, 37 ℃ 准确反应 6
min, 再依次加入抑制剂、透明剂和稳定剂, 混匀后
放置 15 min,测定 412 nm 波长下吸光度 ( A ) 值,
计算得脑匀浆内 AchE 含量。同时用考马斯亮蓝试
剂盒测定脑匀浆内蛋白含量。用药后 A chE 抑制率
按下列公式计算:
抑制率= (模型组 A- 用药组 A ) /模型组 A×100%
2. 5 乙醇致小鼠记忆再现障碍模型实验: 第 14 天
给药后 1 h 训练, 24 h 后重新测试,测试前 30 min,
除对照组 ig 等体积蒸馏水外,模型组及各给药组均
分别 ig 30% 乙醇 0. 1 mL/ 10 g ,记录小鼠跳台实验
的记忆成绩。
2. 6 统计学处理:数据以 x±s 表示,组间 t 检验。
3 结果
3. 1 夏天无对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍的影
响: 见表 1。东莨菪碱组和对照组相比,错误次数显
著增多,跳台潜伏期明显缩短 ( P< 0. 01)。不同浓度
的夏天无口服液及胶囊剂组与东莨菪碱组比较, 可不
同程度减少跳台错误次数及延长跳台潜伏期。夏天无
1 mg / kg 以上可显著改善学习记忆 ( P< 0. 05)。
表 1 夏天无对东莨菪碱造成记忆获得障碍
小鼠跳台实验的影响 ( x±s)
Table 1 Ef fects of RCD on Scop-induced memory
disturbance in step-down test in mice ( x±s)
组 别 剂 量
/ ( mg·kg- 1) 动物数 错误次数/次 潜伏期/ s
对 照 - 13 0. 38±0. 51* * 150. 0±49. 0* *
模 型 - 13 1. 46±1. 05 84. 6±65. 2
双益平 0. 4 12 0. 33±0. 49* * 147. 9±55. 7* *
口服液 0. 5 12 1. 25±1. 36 97. 4±78. 3
1. 0 12 0. 67±0. 78* 125. 8±71. 1
2. 0 12 0. 33±0. 49* * 139. 2±64. 7*
胶囊剂 0. 5 12 1. 17±0. 98 95. 2±68. 7
1. 0 13 0. 62±0. 65* * 125. 0±61. 6
2. 0 13 0. 46±0. 52* * 136. 2±55. 0*
与模型组比较: * P < 0. 05 * * P < 0. 01
* P < 0. 05 * * P< 0. 01 v s model group
3. 2 夏天无对小鼠脑内 AchE 活性的影响: 见表
2。口服液及胶囊剂给药15d后, 可显著降低脑内
表 2 夏天无对东莨菪碱造成记忆获得障碍小鼠
脑内 AchE 含量的影响 ( x±s)
Table 2 Ef fects of RCD on AchE activity in Scop-induced
memory impairment mice brain ( x±s)
组 别 剂 量
/ ( mg·k g- 1) 动物数
AchE 含量
/ ( U·mg - 1) 抑制率/ %
对 照 - 13 0. 827±0. 308* * -
模 型 - 13 0. 857±0. 197 -
双益平 0. 4 12 0. 645±0. 202* 24. 41
口服液 0. 5 12 0. 695±0. 122* 18. 57
1. 0 12 0. 636±0. 261* 25. 48
2. 0 12 0. 599±0. 146* * 29. 79
胶囊剂 0. 5 12 0. 676±0. 235* 21. 42
1. 0 13 0. 651±0. 253* 23. 68
2. 0 13 0. 588±0. 249* * 31. 09
与模型组比较: * P < 0. 05 * * P < 0. 01
* P < 0. 05 * * P< 0. 01 v s model group
AchE 活性 ( P < 0. 05) , 夏天无口服液 0. 5, 1, 2
mg/ kg 对 AchE 抑制率分别为 18. 57% , 25. 48% ,
29. 79%; 夏天无胶囊剂 0. 5, 1, 2 mg / kg 对 AchE
抑制率分别为 21. 42% , 23. 68% , 31. 09%。
3. 3 夏天无对乙醇致小鼠记忆再现障碍的影响: 见
·544· 中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 34 卷第 6 期 2003年 6月
表 3。乙醇组和对照组相比, 错误次数显著增多,跳
台潜伏期明显缩短 ( P< 0. 01)。不同浓度的夏天无
口服液及胶囊剂组与乙醇组比较, 可不同程度减少
跳台错误次数及延长跳台潜伏期。夏天无 1 mg/ kg
以上可显著改善小鼠学习记忆能力 ( P< 0. 05)。
表 3 夏天无对乙醇造成记忆再现障碍小鼠
跳台实验的影响 ( x±s)
Table 3 Effects of RCD on ethanol induced memory
retrieval balk in step-down test in mice ( x±s)
组 别 剂 量
/ ( mg·kg- 1) 动物数 错误次数/次 潜伏期/ s
对 照 - 12 0. 25±0. 45* * 149. 42±66. 03* *
模 型 - 12 2. 83±1. 95 54. 83±55. 77
双益平 0. 4 12 2. 25±2. 05 69. 58±70. 69
口服液 0. 5 11 1. 36±1. 63 73. 36±62. 38
1. 0 11 1. 27±0. 90* 93. 36±65. 44
2. 0 11 0. 64±0. 81* * 131. 27±70. 50* *
胶囊剂 0. 5 11 1. 73±1. 85 94. 55±80. 95
1. 0 11 1. 27±1. 85 116. 36±78. 87*
2. 0 12 0. 73±1. 27* * 133. 64±68. 89* *
与模型组比较: * P< 0. 05 * * P < 0. 01
* P < 0. 05 * * P < 0. 01 v s model group
4 讨论
中枢胆碱能系统是学习记忆的重要生理基础,
人衰老过程及血管性痴呆病程中伴有的记忆减退主
要是由于胆碱能系统的全面衰退[ 1] , 脑内 Ach 含量
降低, AchE 活性升高,胆碱乙酰转移酶活性降低,
M 和 N 胆碱受体数量减少均可能造成学习记忆障
碍。东莨菪碱是中枢 M 胆碱受体拮抗剂, 可阻断
M 1和 M 2受体,降低海马中乙酰胆碱含量,使记忆形
成过程发生障碍[ 7] ,本实验中小鼠 ip 2 mg / kg 东莨
菪碱出现了明显的记忆障碍, 而夏天无制剂可明显
拮抗东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍,并能显著
降低小鼠脑内 AchE 的活性, 提示夏天无可能是一
种 AchE 抑制剂, 而其促智作用的原理是通过影响
中枢胆碱能神经系统的功能实现的。
乙醇影响记忆的机制较复杂,涉及到脑内蛋白
质、RNA、胆碱能及多巴胺等方面[ 8] , 所以很难作出
进一步分析。至于夏天无改善学习记忆的确切作用
机制,有待进一步研究。
综上所述, 夏天无具有显著的促智作用。夏天无
可能作为一种治疗老年性痴呆的新药应用于临床。
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活血化瘀注射液对急性重型胰腺炎大鼠
小肠 CD11b/ CD18 表达的影响
张艳军1 ,金 华1,赵连根2,吴咸中2X
( 1. 天津中医学院 中药系,天津 300193; 2. 天津市中西医结合急腹症研究所, 天津 300100)
活血化瘀注射液 ( HHI-Ⅰ) 可改善犬肠、胰腺
的血液动力学,并证实与抑酶注射液 ( YHI) 合用能
延长急性重型胰腺炎 ( SAP) 家兔存活时间,提高存
活率[ 1, 2]。HHI-Ⅰ 可抑制 SAP 大鼠白细胞在肠系
膜毛细血管后静脉的滚动、粘附[ 3] ,笔者推测可能对
SAP 病理生理过程中白细胞内皮细胞相互作用有
影响。白细胞与内皮细胞粘附以及经内皮迁移需要
粘附分子的表达, 为揭示 HHI-Ⅰ 对粘附分子
·545·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 34 卷第 6 期 2003年 6月
X 收稿日期: 2002-10-12