全 文 ：离子对高效液相色谱法测定
春血安胶囊中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量
吕曙华 ,徐 刚 ,吕归宝 ,寿国香
(天津市药品检验所 ,天津 300070)
春血安胶囊为中药复方制剂 ,由熟地、三七、柴
胡、牛膝、茯苓、黄连等 13味中药组成 ,具有益肾固
精、调经止血之功效 ,用于因肝肾不足、冲任失调所
致的月经过多、经期腹痛、青春期功能失调性子宫出
血等症。处方中黄连具有防止药物过于温燥 ,取其清
热凉血之意 ,诸药合用 ,共达温肾调经 ,止血固冲的
作用。 本实验采用离子对高效液相色谱法测定黄连
中小檗碱和巴马汀含量 ,建立春血安胶囊的含量测
定方法。
1 仪器与试药
岛津 10A高效液相色谱仪 , LC-10AD泵 , SPD-
10AV紫外检测器 , C-R7A数据处理机。 盐酸巴马
汀对照品 (批号: 0732-9604,经归一化法计算 ,含量
为 98. 83% ,可作为供含量测定用对照品 )和盐酸小
檗碱对照品 (批号: 0713-9605,供含量测定用 )购自
中国药品生物制品检定所。所用试剂均为分析纯。水
为重蒸水。春血安胶囊及空白样品由天津第五中药
厂提供。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件: 色谱柱: Turner-C18 ( 250 mm× 4. 6
mm, 5μm);流动相: 乙腈 -0. 05 mo l /L磷酸二氢钠
( 42∶ 58,每 1 000 mL混合液中加入十二烷基磺酸
钠 1. 7 g) ;柱温: 40℃ ;检测波长: 345 nm。理论板数
按盐酸巴马汀计为 6 000,按盐酸小檗碱计为 7 000,
两者分离度为 1. 64,符合要求。拖尾因子: 盐酸巴马
汀为 1. 00,盐酸小檗碱为 1. 03,符合要求。色谱图见
图 1。
2. 2 标准曲线的制备:精密称取盐酸巴马汀对照品
7. 6 mg置 50 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,备用 ;精密称取盐酸小檗碱对照品 10. 1
mg置 50 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 ,备用 ;精密吸取上述盐酸巴马汀溶液 3 mL和盐
酸小檗碱溶液 10 mL,置同一 100 mL量瓶中 ,加甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,精密量取 5, 10, 15μL注入液
a-盐酸巴马汀 b-盐酸小檗碱
a-palmatine hydroch loride b-berberine hydroch loride
图 1 对照品 ( A)、空白对照 (B)和供试品 (C)的色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of references substances
(A) , blank (B) and sample (C)
相色谱仪 ;另精密吸取上述盐酸巴马汀溶液 3 mL
和盐酸小檗碱溶液 10 mL,置同一 50 mL量瓶中 ,
加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,精密量取 10, 15μL注入
液相色谱仪。分别以盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的进
样量为横坐标 ,以各自的峰面积为纵坐标 ,绘制标准
曲线。结果表明 ,盐酸巴马汀在 0. 023～ 0. 137μg进
样量与峰面积呈良好的线性关系 ,回归方程 Y=
1 925 934. 685X - 2 397. 594, r= 0. 999 9;盐酸小
檗碱在 0. 101～ 0. 606μg进样量与峰面积呈良好的
线性关系 , 回归方程为 Y= 1 861 086. 567X -
7 292. 378, r= 0. 999 9。
2. 3 专属性考察:按处方比例及生产方法 ,按供试
品溶液的制备方法制备缺黄连的空白对照溶液 ,经
对空白对照溶液与盐酸巴马汀及盐酸小檗碱对照溶
液测定结果比较 ,空白对照溶液在与盐酸巴马汀、盐
酸小檗碱对照品相应保留时间的位置上无吸收峰 ,
结果表明 ,样品中其他组分对盐酸巴马汀及盐酸小
·332· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 4期 2003年 4月
收稿日期: 2002-11-08
檗碱测定无干扰。
2. 4 供试品溶液的制备: 取本品内容物 (批号
000702) ,研细 ,取 1 g精密称定 ,置索氏提取器中 ,
加入甲醇 -稀盐酸 ( 100∶ 1) 50 mL,加热回流至无
色 ,移至 100 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,
即得。
2. 5 精密度试验: 取供试品溶液 10μL,重复连续
进样 5次 ,测得盐酸巴马汀峰面积的 RSD=
0. 80% ,盐酸小檗碱峰面积的RSD= 1. 33% 。
2. 6 稳定性试验: 将一份供试品溶液室温放置 0,
2, 3, 17, 18 h后分别进样 ,测得盐酸巴马汀峰面积
的 RSD= 1. 91% ; 盐酸小檗碱峰面积的 RSD=
1. 61% ,表明本品在 18 h内测定结果稳定。
2. 7 重现性试验: 对同一批号样品 (批号为
000702)分别称取 5份 ,按照供试品溶液制备方法操
作 ,测定 ,分别计算含量。 盐酸巴马汀平均含量为
0. 662 5 mg /g ,RSD= 1. 63% ,盐酸小檗碱平均含量
为 2. 997 3 mg /g, RSD= 1. 27% ,表明重现性符合
要求。
2. 8 回收率试验: 取已知含量的本品 (批号为
000702)内容物 ,研细 ,取约 0. 5 g ,精密称定 ,共 6
份 ,其中 3份精密加入盐酸巴马汀对照品溶液 ( 0. 152
mg /mL) 2 m L,盐酸小檗碱对照品溶液 ( 0. 126 mg /
m L) 10 m L;其余 3份中精密加入盐酸巴马汀对照品
溶液 ( 0. 152 mg /mL) 3 mL,盐酸小檗碱对照品溶液
( 0. 126 mg /mL) 15 mL,于 6份样品中分别加入甲
醇 -稀盐酸 ( 100∶ 1) 50 mL,再按照上述试供品溶液
制备方法操作 ,测定。 盐酸巴马汀平均回收率为
98. 86% , RSD= 1. 46% (n= 6) ;盐酸小檗碱平均回
收率为 99. 98% , RSD= 1. 34% (n= 6)。
2. 9 供试品的测定结果:采用上述方法测定了 10
批春血安胶囊样品 ,结果见表 1。
3 讨论
3. 1 春血安胶囊处方中有熟地、三七、柴胡、牛膝、
茯苓、黄连等 ,其中君药为熟地、三七。最初试验是以
三七中三七皂苷 R1为指标 ,建立春血安胶囊的含量
测定方法 ,由于三七皂苷 R1吸收波长在 200 nm左
右 ,吸收波长较低 ,处方中其他成分干扰较大 ,故选
用该处方中黄连为测定对象 ,建立春血安胶囊的含
量测定方法。
表 1 春血安胶囊中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱含量测定结果
Table 1 Results of content of palmat ine hydrochloride and
berberine hydrochloride in Chunxuean Capsule
批号 盐酸巴马汀
/ ( mg· g- 1)
盐酸小檗碱
/( mg· g- 1 )
盐酸巴马汀与盐酸
小檗碱含量之比
970101 0. 682 0 2. 705 6 0. 25
970404 0. 662 5 3. 008 1 0. 22
980101 0. 765 4 3. 201 0 0. 24
980302 0. 584 4 2. 471 0 0. 24
990101 0. 588 2 2. 226 0 0. 26
990302 0. 570 5 2. 420 4 0. 24
990702 0. 699 6 2. 602 8 0. 27
000301 0. 446 6 2. 012 4 0. 22
000401 0. 442 1 1. 986 0 0. 22
000702 0. 662 5 3. 008 1 0. 22
3. 2 从中药制剂中提取、分离盐酸小檗碱的方法很
多 ,多数是根据盐酸小檗碱的结构 ,在提取溶剂中加
入一定量酸 ,使巴马汀与小檗碱以盐的形式溶于极
性溶剂中。文献报道 ,提取溶剂有甲醇 -盐酸 ( 100∶
1) [1 ]、甲醇 -稀盐酸 ( 100∶ 1) [2 ] ,由于盐酸对色谱柱、
仪器及注射器等均有一定影响 ,因此选用甲醇-稀盐
酸 ( 100∶ 1)为提取溶剂。采用索氏提取、超声处理及
回流提取方法 ,结果索氏提取法提取完全。由于盐酸
巴马汀与盐酸小檗碱在甲醇溶液中为黄色 ,提取至
甲醇无色时 ,则表示盐酸巴马汀与盐酸小檗碱已被
提取完全 ,易于观察。
3. 3 黄连中含多种生物碱 ,包括小檗碱 ( berberine)、
黄连碱 (coptisine)、巴马汀 (棕榈碱 , palmatine)、药根
碱 ( jat ror rhizine)、甲基黄连碱 ( w orenine)、木兰花碱
( magno flo rine)等 [1 ]。 因盐酸巴马汀与盐酸小檗碱对
照品易得 ,故在制定标准时选用。
3. 4 根据文献报道 [3 ] , UV -λEtOH nm( logε):小檗碱
331( 3. 88)、巴马汀 347( 4. 44)处有最大吸收 ,巴马
汀吸收强度高于小檗碱 ,而小檗碱的含量高于巴马
汀 ,参照日本药局方第 13改正版黄连检测方法 ,因
此 ,检测波长设定为 345 nm。
References:
[1 ] Wang M Z. The Commonly-used HPLC Analysis for Chinese
Tra dit ional and Herbal Drugs (常用中草药高效液相色谱 )
[M ] . Bei jing: Science Press , 1999.
[2 ] The Health Minist ry of Japan. Th e Pharmacopoeia of Japan
[M ] . 13th ed. Tok yo: Hiruk aw a Book Shop, 1996.
[3 ] Information Center of Chinese Herbal Medicin e, State Phar-
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st ituents in Phytomedicines (植物药有效成分手册 ) [M ]. Bei-
jing: People s Medical Publishing House, 1986.
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