全 文 ：回归方程: Y= 1. 440× 104X - 6. 944, r= 0. 999 9。表
明咖啡因浓度在 0. 053～ 1. 057 mg /mL范围内呈良
好的线形关系。
3. 5　精密度试验:分别精密吸取咖啡因对照品溶液
5μL,连续重复进样 9次 ,测定 RSD为 0. 12% ,表
明精密度良好。
3. 6　重现性试验:取同一批号样品 ( 20000716) ,按
样品测定方法进行 5次平行测定 , RSD为 1. 01% ,
表明重现性良好。
3. 7　回收率试验:取同一批号样品 ( 20000716) ,采
用加样回收试验 ,精密称取样品 5份 ,各 0. 2 g ,分别
加入 4. 038 mg咖啡因 ,按样品测定方法进行测定 ,
计算回收率 ,结果平均回收率为 99. 3% , RSD为
0. 3% (n= 5)。
3. 8　样品测定:取本品 5袋内容物 ,混匀 ,取约 0. 2
g ,研细 ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加 50%甲
醇溶液 20 mL,称定重量 ,浸泡 24 h ,超声处理 30
min,放冷 ,用 50%甲醇溶液补足减失的重量 ,摇匀 ,
滤过 ,取续滤液 ,即得。按上述色谱条件测定 ,结果见
表 1和图 2-B。
参考文献:
[1 ]　李志成 ,左春旭 ,杨尚军 ,等 .荷叶化学成分的研究 [ J]. 中草
表 1　 3批样品测定结果 (n= 3)
批　号 咖啡因含量 ( mg /袋 ) RSD(% )
20000715 66. 90 1. 1
20000716 61. 64 0. 9
20000717 58. 49 1. 3
A-对照品　 B-供试品　* -咖啡因
图 2　 HPLC图谱
　　　药 , 1996, 27(增刊 ): 50-52.
[ 2 ]　江苏新医学院 . 中药大辞典 [M ] . 上海: 上海人民出版社 ,
1977.
[3 ]　肖崇厚 .中药化学 [M ] .上海:上海科学技术出版社 , 1988.
[4 ]　岑　路 ,何志强 . 程序升温色谱法同时测定痰咳净中冰片和咖
啡因 [ J] .中成药 , 1989, 11( 10): 8-10.
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中扑尔敏、扑热息痛、 DL-盐酸甲基麻黄碱和咖啡因的含量
[ J ].色谱 , 1996, 14( 4): 288-290.
[6 ]　何明三 ,汪经环 ,雷永军 ,等 . 高效液相色谱法测定痰咳净中咖
啡因的含量 [ J] .中国医院药学杂志 , 1994, 14( 9): 391-393.
核桃清除活性氧自由基的研究
胡博路 ,杭　瑚
(青岛大学 化学系 ,山东 青岛　 266071)
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 03 0227 02
　　随着自由基生物学与自由基医学的迅速发展 ,
现已证明许多疾病的发生、发展与自由基对组织的
损伤有密切关系 ,体内过多的自由基会引发脂质过
氧化链式反应 ,造成细胞膜损伤 ,导致各种细胞功能
的改变 ,诱发衰老和多种疾病的发生 [1～ 3 ]。
核桃仁是非常受人们喜爱的营养食品 ,具有补
肾固精 ,敛肺定喘、镇咳、补脑、延缓衰老等作用 ;核
桃叶具有较好的杀灭钩端螺旋体的作用 ,常用于解
毒、消肿 ;而核桃壳则多被弃置。 本研究用化学发光
法对核桃仁、核桃叶、核桃壳清除活性氧自由基进行
了研究 ,希望能对它们的营养、药用价值及进一步开
发利用提供科学依据。
1　材料
1. 1　主要仪器: OX-7型化学发光分析仪 (日本 ) ,
UV-754型分光光度计 (上海第三分析仪器厂 )。
1. 2　实验材料:核桃取自山东临沂 ,鲁米诺溶液为
德国 Merck-Schuchrdt公司产品 ,试剂均为分析纯 ,
试剂配制均使用高纯度的去离子水。
2　实验方法
2. 1　核桃仁、核桃叶、核桃壳活性成分的提取:分别
称取 20 g粉碎后的核桃仁、核桃叶、核桃壳 ,加入
100 mL石油醚于 25℃振荡浸泡 6 h,过滤 ,滤渣再
·227·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
收稿日期: 2001-07-03基金项目:山东省自然科学基金资助项目 ( Y98D02050)
重复浸泡 2次 ,石油醚挥干后将滤渣称重 ,得产率分
别为 32. 0%、 91. 7%及 97. 2%。 称取经石油醚处理
后的核桃仁、核桃叶、核桃壳各 5 g ,分别加入 50 mL
水 , 40℃恒温振荡提取 6 h,过滤。 滤渣再加等量溶
剂同法提取一次 ,合并滤液 ,然后一分为二。其中一
份减压浓缩至浸膏 ,于 40℃真空干燥 ,计算浸提率 ;
另一份减压浓缩并定容 ,备用。
2. 2　产生 O÷2 的化学发光体系: 参照文献 [4 ] ,用化
学发光法测定样品对碱性连苯三酚体系 (非酶体系 )
产生的 O÷2 的清除作用。在测定管中加入 5 mmol /L
鲁米诺溶液 800μL (用 pH= 10. 16, 0. 1 mol /L
Na2 CO3 -NaHCO3缓冲溶液配制 ) ,加入不同量的供
试液 ,用去离子水做空白对照 ,混匀后 ,加入 6
mmol /L连苯三酚溶液 100μL(用 10 mmol /L HCl
配制 ) ,迅速置于发光仪测定室中 ,启动反应 ,测定 5
s内发光强度值 ,每个样品平行做 3次 ,取平均值 ,
按下式计算样品的清除率。
清除率 (% )= 空白对照值 -样品值空白对照值 × 100%
2. 3　产生 OH·的化学发光体系:按文献 [5 ]采用抗
坏血酸-Cu SO4-酵母 -H2O2产生的发光体系。 1. 8
mmol /L抗坏血酸 0. 2 m L, 1. 8 mmol /L CuSO4溶
液 0. 4 mL, 75 mg /mL酵母溶液 0. 2 mL(以上溶液
均用 50 mmo l /L pH 6. 2的磷酸钠缓冲液配制 ) ,
0. 6 mL磷酸钠缓冲液 ,加入不同量的待测液 ,注入
60 mmol /L H2 O2溶液 0. 6 mL,快速混匀 ,启动发光
反应 ,延迟 10 s后 ,测出 15 s的积分发光强度。
3　结果
3. 1　对 O÷2 的清除作用: 实验表明 ,核桃壳对 O÷2
自由基无清除作用 ,由图 1可见 ,核桃仁、核桃叶均
能有效地清除 O÷2 自由基 ,当核桃仁、核桃叶浓度足
够大时 ,对 O÷2 的清除率均可达 90%以上。其中 ,核
桃叶的清除能力随溶液浓度的增大而急剧增强 ,相
比之下 ,核桃仁的清除作用受浓度的影响较小 ,但其
在较低浓度时即表现出明显的清除作用。 核桃仁清
除 O÷2 的能力强于核桃叶 ,二者 IC50 (清除率达 50%
时提取物的浓度 )分别为 0. 37和 0. 45 mg /mL。
3. 2　对 OH· 的清除作用:核桃仁对 OH· 自由基
无清除作用 ,而核桃叶、核桃壳对 OH· 有清除作
用。 由图 2可见 ,核桃叶、核桃壳均能显著地清除
OH· 自由基 ,并具有量效关系 ,核桃叶清除 OH·
的能力强于核桃壳 ,其 IC50分别为 1. 96和 3. 70
mg /m L。
4　讨论
A-核桃仁　 B-核桃叶
图 1　核桃仁、核桃叶对 O÷2 的清除作用
A-核桃叶　 B-核桃壳
图 2　核桃叶、核桃壳对 OH· 的清除作用
O
÷
2 、OH·是生物体内主要的活性氧自由基 ,由
它所引发的体内脂质过氧化是人类疾病发生和衰老
的重要原因。本实验表明 ,核桃叶能有效地清除 O÷2
及 OH· ;核桃仁能清除 O÷2 但不能清除 OH· ,其
清除 O÷2 的能力强于核桃叶 ;核桃壳与核桃仁恰相
反 ,可清除 OH· ,但却不能清除 O÷2 ,其清除 OH·
的能力弱于核桃叶。 核桃中含黄酮类及其苷、鞣质、
没食子酸、 Vit C等 ,这些化合物往往是清除活性氧
自由基的活性物质 ,至于这些成分中哪些与清除活
性氧自由基相关尚需进一步深入研究。
本实验结果提示 ,多食用核桃仁有利于清除体
内过多的氧自由基 ,从而起到强身益寿 ,养颜美容 ,
延缓衰老的作用。鉴于核桃壳也具有清除自由基作
用 ,这使我们可从中提取抗氧化物质 ,变废为宝 ,更
充分、合理地利用资源。
参考文献:
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[ 2 ]　程伯基 . 氧化还原循环和超氧负离子的产生 [ J ] .生理科学 ,
1989, 9( 4): 14-17.
[3 ]　莫　简 . 医用自由基生物学导论 [M ] . 北京: 人民卫生出版
社 , 1989.
[4 ]　龙盛京 ,覃爱娟 ,李　毅 . 食用豆匀浆液抗活性氧研究 [ J ]. 食
品科学 , 1994, 9: 50-52.
[5 ]　陈季武 ,胡天喜 . 测定 OH· 产生与清除的化学发光体系 [ J ].
生物化学与生物物理进展 , 1992, 19( 2): 136-140.
·228· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期