全 文 ：绞股蓝总皂苷对血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的影响
张　莉 ,吴光亮 ,陈小义 ,齐　刚
(武警医学院 药学教研室 ,天津　 300162)
摘　要: 目的　观察绞股蓝总皂苷 ( GP)对血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的 DNA和 RN A的影响。方法　采用
改良的 Pulsinelli 4-血管阻断 ( 4-VO )方法建立大鼠血管性痴呆模型 ,用吖啶橙染色法进行 GP对血管性痴呆大鼠
大脑皮层及海马的 DN A和 RNA保护作用的研究。结果　与正常对照组比较 ,血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的
DN A和 RN A吖啶橙染色后的荧光强度 (反映 DN A和 RNA含量 )明显减弱 , GP 200 mg /kg ig给药组大脑皮层
及海马的 DN A和 RN A吖啶橙染色后的荧光强度强于血管性痴呆模型组 ,与正常对照组相似。结论　 GP可明显
减轻血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的 DNA和 RNA损伤。
关键词: 绞股蓝总皂苷 ;痴呆 ;血管性 ;大脑皮层 ;海马
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0330 02
Protective effect of gypenosides on cerebral cortex and hippocampus in vascular dementia rat
ZHANG Li, WU Guang-liang , CHEN Xiao-yi, Q I Gang
( Depar tment of Pha rmacy , Medical Co lleg e of Chinese People s A rmed Po lice For ces, Tianjin 300162, China)
Abstract: Object　 To observ e the ef fect of gypeno sides ( GP) on the DN A and RN A in cerebra l co rtex
and hippocampus in vascular dementia ra t. Methods　 Modified Pulsinelli 4-vessel occlusion ( 4-V O )
method w as used to establish the models of v ascula r dementia rat. The acridine orange ( AO) method w as
applied to study the protectiv e effect o f GP on the DN A and RN A of cerebral co rtex and hippocampus in
va scular dementia rat. Results　 The f luo rescent intensi ty f rom the DN A and RN A in cerebral co rtex and
hippocampus of v ascula r dementia rat is abated as compared wi th the no rmal control g roup. The fluo res-
cent intensi ty f rom DNA and RN A o f the t reatment g roup administ rated GP ( 200 mg /kg , ig ) significantly
intensified, as compa red wi th tha t of non-treatment g roup, and is similar to tha t of normal g roup. Conclu-
sion　 The injury to the DN A and RN A in cerebral cortex and hippocampus in vascula r dementia rat w as
obviously decreased by GP.
Key words: g ypenosides ( GP) ; dementia; v ascula r; cerebral co rtex; hippocampus
　　世界人口正在变老 ,老化人口的速度为总人口
增长速度的 2倍 ,伴随着人口老化 ,老年痴呆即
Alzheimer病 ( AD)的发病率也将增高。AD是一种
慢性的大脑退行性变性病变 ,至少可分为 4种 ,即
老年性痴呆 ( AD)、脑血管性痴呆 ( V D)、混合性痴
呆 (前二者并存 )及由全身性疾病引发的老年人痴
呆。而血管性痴呆则是由于各种类型的脑血管病所
致的认知功能选择性和可逆性损害的综合征 ,其患
病率为 7. 5% 。鉴于血管性痴呆由脑缺血引发 ,而脑
缺血可诱发以神经元 DNA早期降解为特征的神经
元凋亡 ,我们进行了绞股蓝皂苷 ( g ypenosides,
GP)对血管性痴呆导致的脑内神经元 DNA、 RNA
损伤的保护作用的研究 ,旨在从分子水平揭示血管
性痴呆与脑内神经元 DN A及 RNA变化之间的关
系及 GP防治血管性痴呆的机制 ,以期为治疗药物
的开发奠定理论基础。
1　材料
1. 1　动物: 雄性 Wistar大鼠 ,体重 240～ 260 g ,天
津市职业病防治中心动物室提供。
1. 2　药品和试剂: 绞股蓝总皂苷 (含量大于
90% ) ,华光实业有限公司提供 ;吖啶橙 , Sigma公司
出品 ;其它试剂均为市售分析纯试剂。
1. 3　仪器:恒冷箱冰冻切片机 ,英国 Brigh t公司出
品 ; UⅢ荧光显微镜 ,日本 Nikon公司出品。
2　方法
2. 1　大鼠血管性痴呆模型的制备 [1 ]: 取大鼠 30只
随机分为 3组 ,血管性痴呆模型组: ip戊巴比妥钠
40 mg /kg麻醉固定后 ,切开颈部皮肤 ,分离椎旁肌 ,
·330· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2001-06-17
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暴露第一颈椎翼状孔 ,电灼烧凝固双侧翼小孔内的
锥动脉 ,造成永久性闭塞 ; 24 h后乙醚浅麻醉 ,切开
腹侧颈中皮肤 ,分离双侧颈总动脉 ,用动脉夹可逆性
夹闭双侧颈总动脉 5 min,缺血共 3次 ,每次间隔 1
h。术后饲养 4周。进行灌注固定并取材切片。 GP
200 mg /kg给药组 , ig给药 1周后 ,按照大鼠血管
性痴呆模型的制备方法进行手术 ,术后饲养 4周并
观察。 伪手术对照组: 同样进行手术但不灼烧锥动
脉 ,不夹闭颈总动脉 ,术后饲养 4周。
2. 2　取材和切片:取上述各组大鼠 , ip戊巴比妥钠
40 mg /kg麻醉固定后 ,于 30～ 40 min内 ,从左心室
快速依次灌注生理盐水 100～ 150 m L, 4% 多聚甲
醛 500 mL ( 4℃ )。迅速取脑 ,置 4℃ 的同样的固定
液中固定 7～ 9 h后 ,移入 20% 蔗糖溶液中浸泡 12
h以上 ,以恒冷箱冰冻切片机切片 (片厚 50μm) ,
pH 7. 4的 0. 01 mol /L PBS接片 ,进行吖啶橙染
色 [2 ] ,荧光显微镜下观察结果并拍照。
3　结果
在荧光显微镜下 (彩图见封 3) ,对照组大脑皮
层及海马 CA1区及 CA3区 DNA和 RNA呈黄绿
色 ,均匀分布于大脑皮层的细胞层和海马锥体细胞
层 (图 1-1～ 3) ;血管性痴呆模型大脑皮层和海马
CA1区及 CA3区的 DNA和 RNA荧光反应强度
(反映 DNA和 RNA含量 )明显减低 (图 1-4～ 6) ;
GP ( 200 mg /kg ) 给药组大脑皮层和海马 CA1区、
CA3区的 DNA和 RNA荧光反应强度较血管性痴
呆模型组明显增强 (图 1-7～ 9) ,与对照组反应强度
和分布模型基本相同。
4　讨论
已有研究表明 , GP对大鼠全脑缺血再灌注损
伤及家兔急性不完全性脑缺血具有保护作用 ,认为
GP对缺血脑组织的保护作用不仅与其抑制自由基
的产生和脂质过氧化有关 ,而且与其对缺血脑组织
的神经细胞膜及微血管的稳定性的保护作用相
关 [3 ]。此外 ,尚有报道 , GP对老龄大鼠学习记忆有
改善作用 [4 ] ,此作用可能与 GP清除氧自由基有关。
脑缺血 /再灌注可导致神经元凋亡或坏死 ,进而
引起痴呆、学习记忆能力下降。 而 DNA梯 ( DN A
laddering ) 的形成是神经元凋亡的重要特征之一。
缺血可使胞浆内钙离子增多 ,激活钙 /镁依赖的核苷
酸内切酶 ,将 DNA切割成许多大小不一的寡核苷
酸片段。 在中枢神经系统中 ,大脑皮层、海马等部位
是缺血易损区 ,实验结果显示大脑皮层及海马 CA1
区、 CA3区锥体细胞层 DNA和 RNA荧光反应强度
明显减低 ,表明该区神经元 DNA及 RNA受到缺
血性损伤。已有研究表明 ,随着缺血时间的延长 ,可
能有诱导型一氧化氮合酶 ( iN OS)的激活 ,从而产
生大量具有神经毒性作用的 NO,在海马迟发性神
经元凋亡以至 VD的形成中发挥了一定作用 [5 ]。
DNA及 RNA与蛋白质的合成密切相关 ,此作用的
机制及其与 GP抗衰老、改善学习记忆及对血管性
痴呆保护作用的关系 ,有待于进一步研究。
参考文献:
[1 ]　许丹芸 ,游国雄 ,苗建亭 ,等 . 脑缺血及血管性痴呆形成过程中
一氧化氮机制的实验研究 [ J ] . 中华老年医学杂志 , 1999, 18
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[2 ]　鄂　征 .组织培养技术 [M ]. 北京:人民卫生出版社 , 1988.
[3 ]　王竹筠 ,邱培伦 . 绞股蓝总皂甙对家兔急性不完全性缺血的保
护作用 [ J] .中国药理学与毒理学杂志 , 1992, 6( 3): 204-206.
[ 4]　高南南 ,于　仁 ,吕瑞绵 .绞股蓝皂甙对老龄大鼠学习记忆的
改善作用 [ J ]. 中国老年学杂志 , 1995, 15( 6): 359-361.
[ 5 ]　 Iad ecola C, Zhang F, Xu X H. Inhibi tion of ind ucible ni t ric
oxide s ynthase ameliorate cereb ral i sch emic damage [ J] . Am J
Physiol, 1995, 268: 286-289.
油菜吲哚硫苷降解物对 S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究
文碧玲 1 ,李培武 2 ,李航森 1 ,赵　力 1 ,余　萍 1 ,邹俊清 1 ,张　文 1 ,丁小霞 2 ,杨　湄 2 ,汪雪芳 2 ,吴　渝2
( 1. 湖北中医学院附院 ,湖北 武汉　 430061; 2. 中国农业科学院油料作物研究所 ,湖北 武汉　 430062)
摘　要: 目的　探讨油菜资源中吲哚硫苷降解物对肿瘤的抑制作用及对免疫功能的影响。 方法　分别将两种不同
提取法制备的高、低浓度的吲哚硫苷对 S180小鼠 ig给药 , ip环磷酰胺。结果　吲哚硫苷降解物 2号高浓度和吲哚硫
苷降解物 1号低浓度治疗组与生理盐水对照组相比有明显的抑制作用 ,能增加淋巴细胞转化率。 结论　吲哚硫苷
·331·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2001-08-08基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 39770452)作者简介:文碧玲 ( 1962-) ,女 ,副主任医师 ,主要从事中医药临床和实验研究 ,现为此项课题组主要成员之一。