全 文 ：图 2　兔 ip 葛根素后视网膜组织的药物浓度-时间曲线
F ig. 2　Concen tration - time curve of puerar in in retina l
tissue of rabbits af ter ip adm in istration
了眼局部应用葛根素滴眼液房水中葛根素的药动
学, 笔者也曾通过 ip 葛根素, 应用 H PL C 技术测定
了兔眼房水中葛根素的药动学变化[7 ]。本研究通过
ip 葛根素, 应用 H PL C 技术对视网膜组织中葛根素
的药动学进行研究, 葛根素在视网膜组织中的药动
学变化符合开放式二房室模型, 2 h 达高峰, 以后逐
渐下降, 但葛根素进入视网膜组织中的量较低, 8 h
就降至 0102 Λgöm g, 16 h 几乎测不到, 消除较快。
本实验采用高氯酸和高速离心技术沉淀视网膜
中的蛋白质, 以甲醇2水2冰醋酸 (35∶65∶012) 为
流动相 , 色谱柱为D iamon silC 18不锈钢柱 , 在波长
为 250 nm 紫外光下对兔视网膜中的葛根素含量进
行了测定。结果表明, 本方法具有特异、灵敏、快速等
优点, 适用于对视网膜中葛根素含量的测定。本实验
结果表明葛根素通过 ip 能透过血2视网膜屏障, 进
入视网膜组织, 此结果为葛根素全身用药治疗眼底
疾病提供了实验依据。
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大蒜素对二甲基亚硝胺诱发的肝纤维化大鼠的保护作用
朱兰香1, 陈卫昌1, 许春芳1, 刘世增2, 顾振纶2, 王响英3Ξ
(11 苏州大学附属第一医院 消化科, 江苏 苏州　215006; 21 苏州大学医学院 药学系药理教研室,
江苏 苏州　215007; 31 苏州大学 电镜室, 江苏 苏州　215007)
摘　要: 目的　研究大蒜素对实验性肝纤维化大鼠的保护作用。方法　SD 大鼠随机分为 5 组: 正常对照组、模型组
(给等量蒸馏水)、大蒜素 (11、22 m gökg) 组、秋水仙碱 (0115 gökg) 组。二甲基亚硝胺 (DM N ) 诱发大鼠肝纤维化
模型, 各组在造模开始时 ig 给药, 实验共进行 42 d。腹主动脉取血, 制备血清, 进行肝功能、血脂、肝细胞病理学检
查。结果　大蒜素各组均能明显降低实验性肝纤维化大鼠血清丙氨酸转氨酶 (AL T )、谷草转氨酶 (A ST ) (P <
0105、0101) 水平, 以大蒜素 22 m gökg 组作用明显, 而秋水仙碱对肝功能没有明显的改善作用 (P > 0105)。大蒜素
均能明显降低血清甘油三酯 (T G)、胆固醇 (TC) 水平, 提高血清白蛋白 (ALB ) 含量。病理学检查结果, 大蒜素组
肝细胞的坏死、空泡变性、出血及脂肪沉积较模型组和秋水仙碱组明显减轻, 炎症细胞明显减少。电镜检查结果显
示, 大蒜素 11 m gökg 组肝细胞坏死、自溶较模型组明显减轻, 大蒜素 22 m gökg 组肝细胞接近正常。结论　大蒜素
对DM N 所致肝损伤具有保护作用。
关键词: 大蒜素; 二甲基亚硝胺; 肝纤维化
中图分类号: R 28615　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 12 1384 04
·4831· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004203222
作者简介: 朱兰香 (1963—) , 女, 江苏人, 硕士学位, 副主任医师, 研究方向为肝纤维化的防治。
T el: (0512) 62002430　E2m ail: zhu lanx iang@m edm ail. com. cn
Protective effect of garl ic in on hepa tic f ibrosis induced by d im ethyln itrosam ine in ra ts
ZHU L an2x iang1, CH EN W ei2chang1, XU Chun2fang1, L IU Sh i2zeng2,
GU Zhen2lun2, W AN G X iang2ying3
(11D epartm ent of D igest ive D iseases, A ffilia ted Ho sp ita l of Suzhou U niversity, Suzhou 215006, Ch ina;
2. D epartm ent of Pharm aco logy, M edical Co llege of Suzhou U niversity, Suzhou 215007, Ch ina;
3. D epartm ent of E lectron ic M icro scope, Suzhou U niversity, Suzhou 215007, Ch ina)
Abstract: Object　To invest iga te the effect of garlicin on dim ethyln it ro sam ine (DM N ) 2induced hepat2
ic f ib ro sis in ra ts. M ethods　SD rats w ere random ly divided in to five group s: no rm al group , model group ,
garlicin (11, 22 m gökg) group s, and co lch incine (0. 15 gökg) group. Excep t fo r no rm al group , ra ts in
o ther fou r group s w ere given DM N by ip to induce hepat ic f ib ro sis. R ats in all group s w ere given co rre2
sponding drugs by ig, and the trea tm en t w as con secu t ively carried ou t fo r 42 d. A fter the last t im e of
t rea tm en t, the celiac arteria l b lood of a ll ra ts w ere taken. T he serum liver funct ion test, a lbum in, T G,
and TC, pathob io logica l exam inat ion of hepat ic cells w ere analyzed. Results　 In the group s trea ted w ith
garlicin , the serum levels of AL T and A ST w ere reduced. A lbum in w as increased sign if ican t ly (P < 0. 01,
0. 05). Garlicin 22 m gökg group has the mo st sign if ican t effect on AL T and A ST. Bu t the co lch incine did
no t show any beneficia l effect on liver funct ion s (P > 0. 05). T G and TC w ere decreased in garlicin group s.
T he pathob io logica l exam inat ion show ed that the necro sis, vacu lar degenera t ion, hemo rrhagic, and accu2
m u lat ion of T G in the liver of garlicin group s w ere less severe than that in the model group and co lch incine
group. E lectron ic m icro scope exam inat ion show ed that in garlicin 11 m gökg group the liver necro sis and
isophagy w ere less severe than that in the model group. T he hepat ic cells in garlicin 22 m gökg group w ere
as no rm al as that in negat ive con tro l group. Conclusion　 It is suggested that garlicin have p ro tect ive effect
on hepat ic f ib ro sis induced by DM N in rats.
Key words: garlicin; d im ethyln it ro sam ine (DM N ) ; hepat ic f ib ro sis
　　慢性肝损伤或急性肝损伤反复发作是肝纤维化
的前提。大蒜素是一种含硫化合物, 近年研究已经进
一步揭示其能抑制脂质过氧化物对膜结构的损害,
目前已有研究显示大蒜素对乙醇、四氯化碳诱发的
肝损伤及免疫性肝损伤具有保护作用。前期研究表
明大蒜素对二甲基亚硝胺 (DM N ) 致大鼠肝纤维化
具有防治作用[1 ] , 本研究通过其对肝纤维化模型大
鼠肝功能和肝细胞病理学影响, 观察大蒜素作为抗
氧化剂对DM N 所致肝损伤的防治作用。
1　材料与方法
111　动物: SD 大鼠, 雌雄兼用, 体重 200～ 260 g,
由苏州大学实验动物中心提供。
112 　 药 品 与 试 剂: 大 蒜 素 微 粒 (含 大 蒜 素
1014% ) , 江苏省靖江制药厂提供, 批号 20010112。
秋水仙碱, 昆明制药股份有限公司, 批号 980732, 规
格: 每片 015 m g。二甲基亚硝胺 (DM N ) , 上海开明
化学厂生产, 化学纯, 批号 01610720。血清甘油三酯
(T G)、胆固醇 (TC )、谷丙转氨酶 (AL T )、谷草转
氨酶 (A ST )、总蛋白 (T P)、白蛋白 (ALB )、球蛋白
(GLOB )、乳酸脱氢酶 (LDH )、总胆红素 (TB )、直
接胆红素 (DB )、间接胆红素 ( IB ) 试剂盒均由日本
一化公司提供。
113　仪器: L XT— II 型离心机, 上海医用分析仪器
厂; 全血动生化分析仪, 日本 O lympu s 公司提供;
CH—B 145—T—2 光学显微镜, 日本O lympu s 公司
产品; CH 600 H ITA CH I 透射电子显微镜, 日本。
114　方法
11411　肝纤维化模型建立、分组及给药: 大鼠随机
分为 5 组, 正常组 6 只, 其余各组 8 只, 雌雄各半, 分
别为正常组、模型组 (给等量蒸馏水)、大蒜素 (11、
22 m gökg) 组、秋水仙碱 (0115 gökg) 组。生理盐水
将 DM N 配成 015% 溶液, 除正常组外, 其余各组
大鼠 ip DM N 溶液, 每次 10 m gökg (2 mL ökg) , 第
1 周每天 1 次, 连续 3 d, 第 2～ 4 周每周各 1 次, 第
5～ 6周均每天 1 次, 连续 2 d, 共 10 次, 42 d。各组在
造模开始同时 ig 给药, 每次 10 mL ökg, 每天 1 次,
持续 42 d。实验结束用 3% 戊巴比妥钠 ip (45 m gö
kg) 麻醉动物, 腹主动脉取血制备血清, - 30 ℃ 冰
箱保存待检。采血后取肝脏称质量, 并取左叶肝脏置
10% 福尔马林溶液中固定备用。
11412　生化指标检测: A ST、AL T、T G、TC 采用液
体双试剂法; T P 和 ALB 测定分别用双缩脲法、溴
甲酚绿法。LDH、TB、DB、IB 等指标均严格按照试
剂盒说明书进行操作。
·5831·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
11413　肝病理组织学观察: 大鼠肝脏用 10% 福尔
马林固定, 石蜡包埋, 常规二甲苯脱蜡, 梯度乙醇脱
水, 加苏木素染 4 m in, 加盐酸乙醇分化, 温水蓝化,
用伊红浸染, 然后乙醇脱水, 二甲苯透明, 树脂封固。
11414　超微结构观察: 实验结束, 在各组中随机取
1～ 2 只动物的左叶肝脏切片后, 以 215% 戊二醛固
定, 1% 锇酸固定, 常规乙醇脱水,L R W h ite 渗透包
埋, 超薄切片, 铀铅双染, 电镜观察肝超微结构的改
变, 摄影, 拍照。
11415　统计学处理: 实验数据用 x ±s 表示, 组间比
较用 t 检验。
2　结果
211　对血清肝功能指标影响: 模型组血清A ST 和
AL T 活性明显增加, 分别为正常对照组的 1167 倍
(P < 0101) 和 115 倍 (P < 0101) , 大蒜素 11、22
m gökg 可使血清A ST 和AL T 活性显著降低 (P <
0101) , 而秋水仙碱无显著降低 A ST、AL T 活性的
作用 (P > 0105)。各组 LDH、TB、DB、IB 未见明显
差异。提示大蒜素可显著抑制DM N 所致肝功能异
常。实验结果见表 1。
212　对 T P、ALB、ALB öGLOB 比例的影响: 模型 表 1　大蒜素对肝纤维化模型大鼠血清AST 和 AL T 活性的影响 (x±s)Table 1　Effect of garl ic in on AST and AL T activ itiesin serum of hepatic f ibrosis model rats (x±s)组　别 剂量ö(m g·kg- 1) 动物ö只 A STö(U ·L - 1) AL Tö(U ·L - 1)正常 　　- 6 37183± 41173 3 102121±511083模型 　　- 8 63125±16185 153137±31108秋水仙碱 　　150 8 50100± 8190 126125±15196大蒜素 11 8 31184± 31123 3 101142±30196322 8 32156± 21493 3 103113±301183　　与模型组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101　　 3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs model group组血清 T P 和ALB öGLOB 与正常组和治疗组比较差异无显著性 (P > 0105) , 而 ALB 合成较正常组明显降低 (P < 0105) , 大蒜素组均可提高血清 ALB水平, 与模型组比较差异显著 (P < 0105) , 秋水仙碱组 ALB 水平及 ALB öGLOB 与模型组比较未见显著意义。结果见表 2。213　对血脂的影响: 模型组血清 T G、TC 含量较正常组显著增加 (P < 0105) , 大蒜素组与模型组比较显著下降 (P < 0105、0101) , 秋水仙碱组与模型组比较差异显著 (P < 0105, 单侧) , 见表 3。
表 2　大蒜素对肝纤维化模型大鼠血清蛋白合成的影响 (x±s)
Table 2　Effect of garl ic in on prote in syn thesis in serum of hepatic f ibrosis model rats (x±s)
组　别 剂量ö(m g·kg- 1) 动物ö只 T Pö(g·L - 1) ALBö(g·L - 1) ALBöGLOB
正常 　　　　- 6 62132±6192 22132±110943 0155±01051
模型 　　　　- 8 58110±8131 18136±31315 0145±01052
秋水仙碱 　　　　150 8 57105±3195 19151±31420 0146±01061
大蒜素 11 8 61137±5192 21121±210893 0152±01050
22 8 61108±5192 20163±111253 0152±01048
　　与模型组比较: 3 P < 0105
　　 3 P < 0105 vs model group
表 3　大蒜素对肝纤维化模型大鼠血清
TG 和 TC 水平的影响 (x±s)
Table 3　Effect of garl ic in on TG and TC levels in
serum of hepatic f ibrosis model rats (x±s)
组　别
剂量ö(m g·kg- 1) 动物ö只 T Gö(mmo l·L - 1) TCö(mmo l·L - 1)
正常 　　- 6 01254±010853 11102±012093
模型 　　- 8 21081±01485 31425±11276
秋水仙碱 　　150 8 01605±01142# 11376±013473
大蒜素 11 8 01578±011233 11242±013783
22 8 01584±011253 01970±012543 3
　　与模型组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101　# P < 0105 (单侧)
　　 3 P < 0105　3 3 P < 0101　# P < 0105 (single) vs model group
214　对肝组织的影响: 肝组织 H E 染色光镜显示:
正常组, 肝小叶内肝细胞呈单行放射状排列在中央
静脉周围, 小叶周围可见汇管区围绕。模型组肝组织
失去正常肝小叶结构, 结缔组织增生, 假小叶形成。
可见肝细胞肿大, 颗粒样变性, 片状肝细胞坏死, 表
明肝纤维化形成。秋水仙碱组, 肝组织细胞大而圆,
失去多角形外观, 细胞变性, 在肝细胞之间有炎性细
胞浸润, 但纤维化明显减轻。大蒜素 11 m gökg 组,
肝细胞仅见轻度变性, 纤维化明显减轻; 大蒜素 22
m gökg 组未见肝细胞变性, 肝细胞形态接近正常组。
215　对肝组织超微结构的影响: 正常组, 肝细胞呈
多角形, 双核或单核, 核圆形, 位居中央, 核仁常为
1～ 2 个, 胞质中有各种细胞器, 线粒体呈杆状或椭
圆形, 基质较暗, 嵴清晰, 粗面内质网呈平行状排列,
核糖体正常, 滑面内质网呈束泡状, 其他细胞器如溶
酶体、微粒体、高尔基复合体等正常分布, 细胞间连
接明显。模型组, 肝细胞核呈异形核变明显, 呈锯齿
·6831· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
状、哑铃状, 核仁常边集, 胞浆中可见片状或块状不
规则空泡变性、坏死, 线粒体大小不一, 粗面内质网
扩张, 表明肝纤维化形成。秋水仙碱组, 肝细胞外形
不规则, 核形规则, 光面内质网增生, 可见空泡样变
性。大蒜素组, 肝脏结构基本接近正常, 线粒体发达,
未见明显肝细胞坏死。
3　讨论
　　前期研究表明大蒜素对DM N 致大鼠肝纤维化
具有防治作用[1 ] , 秋水仙碱作为抗肝纤维化阳性对
照药物已得到国内外一致认可, 本研究以秋水仙碱
为对照, 进一步研究大蒜素对肝纤维化模型大鼠肝
功能和肝细胞病理学的影响, 观察大蒜素作为抗氧
化剂对DM N 所致肝损伤的防治作用。
DM N 是一种具有肝毒性的化学制剂[2 ] , 目前
用 DM N ip 制备急性肝损伤、肝纤维化模型, 是国
内外一致认可较为理想的制备动物模型的方法[3 ]。
ip DM N 后 7 d 开始出现中央小叶肝细胞纤维化和
出血坏死, 14 d 可见中性粒细胞浸润, 伴随肝细胞
脂肪变性、胆管增生、桥样坏死并可观察到肝纤维化
在中央静脉周围的形成[4 ]。本实验光镜及电镜结果
均表明模型组肝纤维化已经形成。研究表明DM N
在肝纤维化动物模型中对肝细胞损伤作用与脂质过
氧化有关[5 ]。大蒜素能明显增强还原型谷胱甘肽
(GSH ) 及其相关酶活性确保 GSH 氧化还原过程顺
利进行, 加速对肝内毒物的代谢和灭活[6 ]。大蒜素作
为抗氧化剂, 其抗化学毒物致肝损伤机制主要在于其
抗氧化活性而抑制脂质过氧化物对膜结构的损伤。
　　肝细胞坏死几乎是各型肝硬化形成的基本因
素, 肝细胞坏死为点状或灶状时则通过肝细胞再生
而迅速修复, 如反复的点状、灶状坏死, 纤维增生则
变得活跃, 坏死为带状或大块时, 由于网状支架塌
陷, 网状纤维互相聚集, 黏合形成胶原纤维。本实验
模型组大鼠肝脏切片光镜、电镜下均提示肝细胞内
和细胞间大量脂滴沉积, 肝细胞脂肪变性, 肝细胞之
间见炎性细胞浸润。大蒜素可使DM N 所致肝细胞
脂肪样变性、炎症、坏死明显减轻, 生化检查表明其
使 A ST、AL T 活性降低, T G、TC 含量减少, 肝
ALB 合成增加, 表示肝细胞再生和合成功能进一步
加强。由此可见, 大蒜素较秋水仙碱具有较好的肝脏
保护作用, 可以阻止肝纤维化的进一步发展, 对肝纤
维化的防治起积极作用。
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青龙衣提取物对荷瘤小鼠细胞膜流动性的影响
季宇彬, 马宏图Ξ
(哈尔滨商业大学药物研究所 博士后科研工作站, 黑龙江 哈尔滨　150076)
摘　要: 目的　探讨青龙衣提取物对 S180和 H 22荷瘤小鼠细胞膜脂流动性的影响。方法　选取 S180和 H 22作为瘤株,
于正常小鼠腋下接种 S180瘤液, 腹腔接种 H 22瘤液, 荷瘤小鼠分别每天 ip 青龙衣冷醇提取物 (191137、95168、47184
m gökg)、热醇提取物 (121117、60158、30129 m gökg)、环磷酰胺 (20 m gökg, 为阳性对照)、生理盐水 (阴性对照) , 给
药 7 d 后处死小鼠, 制备肿瘤细胞和红细胞悬液。以 1, 62diphenyl21, 3, 52hexatriene (D PH ) 为探针剂, 用荧光偏振
法测定荧光偏振度 (P ) 值和微黏度 (Γ) , 观察青龙衣提取物对细胞膜脂流动性的影响。结果　青龙衣冷醇、热醇提
取物均能使 S180小鼠的肿瘤细胞膜流动性提高, 使 H 22小鼠的肿瘤细胞膜流动性降低, 与生理盐水组比较, 两种提
取物均能降低 H 22小鼠红细胞膜流动性 (P < 0105)。结论　青龙衣提取物可能通过对肿瘤细胞膜的影响起到抑瘤
作用, 而对维持红细胞膜的稳定性起积极作用。
·7831·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004204201
基金项目: 黑龙江省自然科学基金项目
作者简介: 季宇彬 (1956—) , 男, 博士, 教授, 博士生导师, 多年来一直致力于中药药理、肿瘤药理、分子药理学研究。