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HPLC法测定红景天及愈伤组织中的红景天苷



全 文 :中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月·1241·
人参单产数据计算,一个年采收面积为10hm2的参
场,如果在7月15日采收(可收获27.9×104kg鲜
参)将比9月1日采收(可收获33.5×104kg鲜参)
少收获5.6×104kg鲜人参,按市场最低价格20元/
kg计算,损失价值高达112万元。同样如考虑到折
干率(表2),如在7月15El采收10×104kg鲜人参
进行加工将比在9月1日采收同样量的鲜人参损失
3×104kg,价值60万元。此外,提早采收的人参加
工后的商品性状较差(主要是抽沟严重),市场售价
会降低[2]。因此,综合考虑所测定的数据和评估生产
成本、市场等多方面因素,长白县人参的最佳采收期
应定在每年的9月1日~10月1日一个月的范围
内。如果加工厂的加工能力限制,采收时间也只能宽
限于8月15日~10月15日。
应该补充说明的是,由于我国参区南北纬度宽,
海拔高低不一,致使各参区气候不一致,因此,各参
区的参根收获期不能统一。如靖宇二参场试验,从9
月11日起,每5天收根一次,到10月1日止。结果
表明9月16~21日起收为佳,此期加工红参成品率
为28%~29.2%,比9月11日高1%~2.2%,比10
月1日高4.4%~4.8%。又如辽宁省新宾和桓仁等
地试验,在1979~1981三年间,每年都在8月10、
15、25日,9月1、5、10、15、25日,10月5、15日起
收,比较鲜参产量、折干率、成品参质量,结果证明以
8月下旬~9月中旬为好,其中9月上旬最佳。此期
不仅鲜根重比其它各时期高3.58%以上,而且出货
率高1%~2.5%,加工的红参色泽纯正,无抽沟,皂
苷量则与其他时期没有显著差异D]。
长自县所产人参可在四年生即可收获;每年的
最佳采收期在9月1日到10月1日,合理的宽限采
收期可定在8月15日~10月15日。
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HPLC法测定红景天及愈伤组织中的红景天苷
盛长忠h2,毕浩1,张向飞1,齐一伯1,元英进2,姜燕1
(1.天津天士力集团生物技术和生物制品研究开发中心,天津300402;2.天津大学化工学院,天津300072)
由于生境狭窄、生殖障碍、开采过度等原因,红
景天野生资源已几近枯竭,红景天愈伤组织和细胞
的大规模培养成为重要的替代途径[1]。红景天苷是
红景天属(RhodiolaL.)植物中一种重要的活性成
分,其量的高低是评价该属植物药用价值的重要指
标之一[2]。用HPLC法测定红景天苷的研究已有报
道[3“]。为了配合红景天愈伤组织和细胞培养的研
究,建立了红景天属植物及其愈伤组织中红景天苷
测定的HPLC方法,测定了4种不同来源的红景天
和来源于深红红景天R.coccinea(Royle)A.Bor.
的愈伤组织中的红景天苷。
1实验部分
1.1 仪器与试剂:Agilent1100高效液相色谱仪
(配备四元泵,VWD检测器,真空脱气机,柱温箱),
Hpchem工作站,超声洗涤’器(RelianceDigital
Medisafe),Sartorius十万分之一电子天平,0.22
pm滤器。
红景天苷对照品由中国药品生物制品检定所提
供。红景天材料见表l,均经南开大学生命科学学院
王树芳教授鉴定。愈伤组织由生长于天山一号冰川
的深红红景天幼芽诱导而来,培养在添加6一BA
1mg/L和NAA0.5mg/L的MS固体培养基中,24
℃培养,30d收获,60℃烘干备用。样品提取所用甲
醇为分析纯,HPLC用甲醇为色谱纯,水为超纯水。
收稿日期:2004—09—13
作者简介:盛长忠(1970一),男。山东人,副研究员,博士,1999年获南开大学植物学硕士学位,2002年获南开大学遗传学博士学位,2002
年11月一2004年11月在天津大学一天士力集团从事博士后研究,现在天士力集团研究院工作,研究方向为生物技术制药。
Tel:(022)26736527E—mail:sczhong@eyou.com
万方数据
·1242· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月
1.2 色谱条件:色谱柱HypersilC。s—ODS柱
(250mm×4.6mm,5pm),流动相为甲醇一水(15:
85),体积流量为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波
长为276nm。
1.3对照品溶液的配制:准确称取0.01g对照品
红景天苷,置10mL量瓶中,用15%甲醇溶解并定
容至刻度,该储备液的质量浓度为1.0g/L,再逐步
稀释,配成质量浓度为1、5、8、10、20、50、80、100
mg/L的系列红景天苷对照品溶液。
1.4供试品溶液的制备:将干燥的红景天根和愈伤
组织用粉碎机粉碎,过200目筛。分别准确称取0.5
g,用20mL石油醚分2次浸泡,每次30min,滤过
弃滤液。然后用70%甲醇20mL分两次超声波浸
提,每次30min,1200r/min离心10min,合并上
清,分别定容至30mL,并用0.22肛m滤过,制成供
试品溶液。
2 结果
2.1色谱峰的鉴定:红景天苷对照品、深红红景天
根及愈伤组织样品溶液的色谱分析结果见图1,根
据对照品洗脱峰的保留时间确定样品溶液中红景天
苷的峰。
2.2线性回归方程的制备:取一系列不同质量浓度
0 2 4 6 8 1012141618 0 2 4 6 8 1012141618
t{min
图1红量天苷对照品(a)和深红红景天根样品溶液(b)及其愈伤组织样品溶液(c)的色谱图
Fig.1Chromatogramsfsalidroside(a),R.coccineasample(b),anditscallussample(c)
的红景天苷对照品工作液,按上述色谱条件,进样 表1样品中红景天苷测定(弹一3)
10业L,以峰面积(y)对对照品溶液的质量浓度(x)
进行线性回归分析,得回归方程Y一3.5241X+
1.4352,r=0.9996(咒=5),红景天苷在5~80
mg/L线性关系良好。
2.3精密度试验:取深红红景天样品溶液,重复进
样5次,每次5肛L,按上述色谱条件测定峰面积,
RSD一1.80%。
2.4重复性试验:分别取红景天根样品和愈伤组织
样品各5份,按照1.4分别制备样品溶液,按色谱条
件测定,计算质量分数,RSD分别为1.75%和
1.22%。
2.5加样回收率试验:准确称取已知红景天苷量的
深红红景天根样品5份,每份0.2g。精密称定,取4
份分别加入红景天苷对照品储备液1mL(1.0
mg),另一份不加对照品溶液,按照1.4操作制备样
品溶液,根据已定色谱条件测定红景天苷。结果红景
天苷的平均回收率为98.9%(RSD一1.68%)。
2.6样品测定:分别准确吸取1.4中已制备的红景
天根样品溶液5pL、愈伤组织样品溶液10pL重复
进样5次,另进对照品溶液(50mg/L)10t-tL,按照
上述色谱条件测定峰面积,用外标法计算质量分数
(图1,表1)。
3讨论
3.1 红景天苷的提取方法:以R.crenulata为材
Table1 Determinationofsalidrosidein amples(一一3)
料,考察了i00%和70%两种浓度的甲醇溶液分别
在10、30min超声处理下重复两次提取对实验结果
的影响(表2)。结果表明甲醇浓度和超声处理时间
对提取效果影响很大,实验号4所得的红景天苷量
最高,达1.35mg/g,故实验所描述的提取红景天苷
的实验采用实验号4的方法。
表2超声时间和甲醇浓度对红景天苷提取的影响
Table2 Effectofultrasonictimeandmethanol
concentrationonextractofsalidroside
3.2红景天苷的量与品种:上述红景天品种都含有
红景天苷,但不同产地、不同品种红景天苷的量差异
很大,新疆天山的R.coccinea的红景天苷最高,达
7.36mg/g,而新疆的R.kirilowii中红景天苷最低,
a
lL4
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月·1243·
仅为0.69mg/g。
3.3 红景天的愈伤组织/细胞培养:由于野生资源的
匮乏,通过愈伤组织和细胞培养生产所需要的目标产
物愈来愈引起人们的重视与关注。实验表明来源于
R.coccinea的愈伤组织能够产生红景天苷,质量分
数为2.68mg/g,同野生R.coccinea相比,愈伤组织
中红景天苷不够高,但通过高产细胞株系的筛选和培
养条件的探索与优化,将可以达到或超出天然来源的
含量口]。利用红景天愈伤组织/细胞的大规模培养生
产有关活性代谢产物将具有广阔的前景。.
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HPLC法测定祖师麻中紫丁香苷
齐香君,李楠,单燕凤,彭友慧
(陕西科技大学生命科学与工程学院,陕西咸阳 712081)
祖师麻系瑞香科植物黄瑞香Daphnegiraldii
Nifshe,药用其茎皮和根皮。主要产于甘肃、四川、陕
西、山西等省山区。文献记载有祛风除湿、活血散瘀
等作用。民间广泛用于治疗疼痛、跌打损伤、风湿性
关节炎和支气管炎等症。近年来亦有将药材制成祖
师麻膏药、祖师麻注射液、祖师麻风湿膏等治疗各种
疼痛。紫丁香苷为其活性成分之一,为了更好地控制
祖师麻及其制剂的质量,本实验采用反相高效液相
色谱法,对陕西眉县、四川I、甘肃产祖师麻中紫丁香
苷的测定方法进行了研究,为更好地完善该药材及
其制剂的质量控制标准提供依据。
1仪器与试药
高效液相色谱仪,包括AT.ChromC。。柱(_-z-州
药物研究所),1525Binary色谱泵,2487双波长紫
外检测器,Breeze色谱工作站(美国Waters公司);
760双光束紫外可见分光光度计(上海精密仪器有
限公司);KQ一250DE医用数控超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司);DHG一9123A电热恒温
鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。
紫丁香苷对照品(98.5%,陕西省中药研究所实
验室提供);祖师麻(购于陕西、四川I、甘肃医药采购
站)由陕西中医学院中药系雷国莲教授鉴定;乙腈、甲
醇为色谱纯,娃哈哈纯净水;其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
收稿日期:2005—02—12
2.1 色谱条件:色谱柱:AT.ChromC18柱(150
mm×4.6mm,5弘m);流动相:乙腈一水(1:9);体积
流量:1.0mL/min;柱温:室温;检测波长:223
nm[13;在该色谱条件下,样品中紫丁香苷与其他组
分分离效果良好,对照品与样品色谱图见图1。
一一! /\:.—.—.—..—JL、,.,.—.————.——.—。————J、-,.—.——。一
1 2 3 4 5 6 ”8 9 10
t/min
1一紫丁香苷
1-syringin
图1对照品(A)与样品(B)色谱图
Fig.1Chromatogramsfreferenceubstance(A)
andsample(B)
2.2对照品溶液的配制:精密称取干燥至恒重的紫
丁香苷对照品10.5mg至50mL量瓶中,加甲醇溶
解并稀释至刻度,配制成质量浓度为210/-g/mL的
紫丁香苷对照品溶液。
2.3 供试品溶液的配制嘲:精密称取干燥至恒重的
祖师麻粉末1.0g,加人适量水作为提取溶剂,经超
声3次提取(每次50min,50℃,功率80%),合并3
万方数据
HPLC法测定红景天及愈伤组织中的红景天苷
作者: 盛长忠, 毕浩, 张向飞, 齐一伯, 元英进, 姜燕
作者单位: 盛长忠(天津天士力集团,生物技术和生物制品研究开发中心,天津,300402;天津大学化工学
院,天津,300072), 毕浩,张向飞,齐一伯,姜燕(天津天士力集团,生物技术和生物制品研究
开发中心,天津,300402), 元英进(天津大学化工学院,天津,300072)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(8)
被引用次数: 4次

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