全 文 ：改善大鼠的神经功能缺损, 缩小脑梗死面积 (P <
0105, 0101) , GC s 具有神经保护作用。
312 对抗氧化酶活性及M DA 含量的影响: 结果见
表 2。大鼠手术 24 h 后, 脑组织 SOD 活性明显下
降,M DA 含量显著升高, 与假手术组比较差异显著
(P < 0101)。GC s 显著升高脑组织 SOD , GSH 2Px 活
性, 降低M DA 含量 (P < 0105, 0101)。
表 2 GCs 对脑缺血大鼠脑组织 SOD , GSH-Px
活性及MDA 含量的影响 (x±s, n= 8)
Table 2 Effect of GCs on activ ities of SOD and GSH-Px,
and con ten t of MDA in bra in tissue of cerebra l
ischem ia rats (x±s, n= 8)
组 别
剂 量ö(m g·kg- 1) SODö(U ·m g- 1) GSH 2Pxö(U ·m g- 1) M DAö(nmo l·m g- 1)
假手术 - 7184±01313 3 2102±0149 0139±01043 3
模型 - 6172±0174 1173±0151 0162±0110
GC s 125 8108±01433 3 2169±01943 0138±01093 3
250 7188±01453 3 3105±01723 3 0129±01123 3
银杏叶片 50 6199±0169 3108±01353 3 0147±01043 3
与模型组比较: 3 P < 0105 3 3 P < 0101
3 P < 0105 3 3 P < 0101 vs model group
4 讨论
脑卒中患者以局部脑缺血为多见, 而人类缺血
性脑卒中的好发部位多在大脑中动脉及其分枝, 故
选择阻断大脑中动脉形成局灶性脑缺血的模型与人
类脑卒中最为相似。本实验采用插线法阻断大脑中
动脉造成脑缺血损伤模型, 研究 GC s 对脑缺血损伤
的影响。结果观察到大鼠手术后 12, 24 h 所有动物
均出现了神经症状, 脑组织出现明显的梗死灶, 缺血
24 h 时尤为明显, 说明模型制备成功。
氧自由基在脑缺血损伤中起着重要作用。正常
机体氧自由基产生与清除处于动态平衡, 脑缺血时,
防御系统受损, 氧自由基生成增加, 攻击生物膜, 发
生脂质过氧化, 多价不饱和脂肪酸被破坏, 生成毒性
中间产物 (如脂氢过氧化物) 及终末产物丙二醛
等。丙二醛可交联蛋白质和磷脂上的氨基, 降低膜流
动性, 致细胞变形, 功能受损, GC s 经证实有抗氧化
作用, 包括抗脂质过氧化、清除超氧阴离子、抑制并
清除羟自由基的作用[1 ]。本实验测定了大鼠脑缺血
状态下 SOD、GSH 2Px 活性的变化, 结果在脑缺血
24 h 时, 脑组织 SOD 的活性明显降低, GSH 2Px 变
化不大,M DA 含量显著升高。而 GC s 能显著改善
大鼠的神经症状, 缩小脑梗死范围, 提高 SOD、
GSH 2Px 活性, 并降低M DA 含量。表明 GC s 具有
神经保护作用, 可能是通过升高脑组织抗氧化酶活
性, 抑制脂质过氧化反应来保护脑组织免受缺血的
损伤。GC s 的这种抗氧化作用可能与其结构中含有
酚羟基有关, 具体机制有待进一步研究。
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丹酚酸 B 及欧芹素乙对溶血磷脂酰胆碱刺激
牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响
王杰松1, 芮耀诚2, 倪震宇3, 刘昌叶1, 常 华1Ξ
(11 解放军第 306 医院, 北京 100101; 21 第二军医大学药学院, 上海 200433;
31 成都军区联勤部药品仪器检验所, 四川 成都 610003)
摘 要: 目的 研究溶血磷脂酰胆碱 (L PC) 对牛主动脉平滑肌细胞 (BA SM C) 增殖的影响及丹酚酸 B 和欧芹素
乙的抑制作用。方法 体外培养BA SM C, 用M T T 法测定细胞增殖。结果 L PC 在 215×10- 9～ 215×10- 6 göL 剂
·266· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209226
作者简介: 王杰松 (1966—) , 男, 安徽怀宁人, 博士, 副主任药师, 主要从事心脑血管药理学研究。 T el: (010) 66356171
量依赖性地促进 BA SM C 增殖; 丹酚酸 B (1×10- 9～ 1×10- 6 mo löL ) 和欧芹素乙 (1×10- 7～ 1×10- 3 mo löL ) 浓
度依赖性地抑制 L PC 的作用。结论 L PC 可促进 BA SM C 增殖, 丹酚酸 B 和欧芹素乙可抑制 L PC 的作用。
关键词: 溶血磷脂酰胆碱; 平滑肌细胞; 丹酚酸 B; 欧芹素乙
中图分类号: R 28515 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670 (2004) 06 0662 03
Effect of sa lv ianol ic ac id B and im pera tor in on prol ifera tion of bov ine arter ia l
sm ooth m uscular cells st im ula ted by lysophospha tidylchol ine
W AN G J ie2song1, RU I Yao2cheng2, N I Zhen2yu3, L IU Chang2ye1, CHAN G H ua1
(11N o. 306 Ho sp ita l of PLA , Beijing 100101, Ch ina; 2. Schoo l of Pharm acy, T he Second M ilitary M edical U niversity,
Shanghai 200433, Ch ina; 3. Inst itu te fo r D rug and instrum ent Contro l, Chengdu M ilitary A rea, Chengdu 610003, Ch ina)
Key words: lysopho sphat idylcho line (L PC) ; smoo th m u scu lar cells; sa lviano lic acid B; impera to rin
血管平滑肌细胞 (V SM C) 是血管中膜的单一
细胞,V SM C 增殖不仅是动脉粥样硬化 (A S) 发生
发展的基本组成成分, 而且是病变部位最早出现的
成分。溶血磷脂酰胆碱 (L PC) 是氧化修饰低密度脂
蛋白 (LDL ) 的重要组成成分, 能引起多种病理生
理反应。L PC 可由血管内皮细胞、平滑肌细胞或其
他血液细胞成分产生。L PC 作用主要表现在心血管
系统, 如对心肌细胞电生理的影响[1 ] , 损伤心肌细胞
改变心肌收缩性能[2 ]。缺血心肌局部L PC 堆积, 能
引起类似缺血的电生理效应[3 ]。
欧芹素乙为中药前胡和白芷根部的有效成分,
具有抗炎作用[4 ]。欧芹素乙体外对肿瘤坏死因子2Α
(TN F2Α)、白细胞介素21Α ( IL 21Α) 和白细胞介素21Β
( IL 21Β) 诱导的牛脑微血管平滑肌细胞增殖具有拮
抗作用[5～ 7 ]。丹酚酸B 是丹参的水溶性有效成分之
一。体外实验显示丹酚酸B 具有强的抗氧化作用,
并且对心脑血管循环系统有一定的保护作用, 可防
止血栓形成, 血管痉挛等[8 ]。本实验主要研究 L PC
对牛主动脉平滑肌细胞 (BA SM C) 增殖的影响, 并
观察丹酚酸B 和欧芹素乙的抑制作用。
1 材料与方法
111 主要试剂: Eagle’s M EM 培养基、胰蛋白酶
(1∶250) 均为 Gibco 产品; L 2Α2溶血磷脂酰胆碱:
Sigm a 公司产品; 新生小牛血清 (NBS) : 上海华美
生物技术公司产品; 噻唑蓝 (M T T ) : Sigm a 公司产
品; 丹酚酸 B 和欧芹素乙: 纯度> 9915% , 第二军医
大学药学院天然药物化学教研室提供。
112 BA SM C 的分离培养[9 ]: 新生小牛放血处死,
使用无菌器械取其胸主动脉。在超净台上无菌条件
下小心剥除主动脉外膜上的结缔组织, 在没有侧枝
血管一侧剪取方形的主动脉块, 放入D 2H ank s 缓冲
液中漂洗 2～ 3 次, 剔除内膜和外膜, 将只含平滑肌
的中膜剪成 1 mm ×1 mm 左右的小块, 贴附于细胞
培养瓶底面, 37 ℃, 5% CO 2孵箱中贴壁 30 m in, 加
入含 20% NBS 的M EM 培养基, 每 3 d 换液 1 次。
待细胞从边缘爬出, 小心剔除组织块, 继续培养至细
胞铺满瓶底, 此时进行传代培养。用 0125% 的胰蛋
白酶消化, 待细胞间隙增大, 弃去胰蛋白酶溶液, 加
含 10%NBS 的M EM 培养基, 吹打使分散均匀, 每
1 瓶传 3 瓶。实验中使用 2～ 6 代细胞。
113 L PC 对 BA SM C 增殖的影响: BA SM C 以每
孔 1×104细胞接种于 96 孔细胞培养板, 孵育 24 h,
吸弃培养液, 加入含不同浓度 L PC (215×10- 9～
215×10- 6 göL ) 的培养液, 继续孵育 44 h, 每孔加
入 5 göL M T T 溶液 20 ΛL , 4 h 后小心吸弃培养液,
每孔加入 100 ΛL DM SO , 振荡 10 m in, 使紫色结晶
充分溶解, 在 490 nm 波长处测定吸光度 (A ) 值。
114 丹酚酸 B 和欧芹素乙对 L PC 诱导 BA SM C
增殖的抑制作用: BA SM C 以每孔 1×104细胞接种
于 96 孔细胞培养板, 孵育 24 h 后, 吸弃培养液, 加
入用培养液稀释的 215×10- 7 göL L PC, 再分别加
入丹酚酸 B (1×10- 9～ 1×10- 6 mo löL ) 和欧芹素
乙 (1×10- 7～ 1×10- 3 mo löL ) , 继续孵育 48 h, 在
终点前 4 h 每孔加入 5 göL M T T 溶液 20 ΛL , 下面
操作同 113 项, 测吸光度 (A ) 值。
115 统计学处理: 数据均用 x ±s 表示, 显著性检验
采用 t 检验。
2 结果
211 L PC 促进 BA SM C 增殖: L PC (215×10- 9～
215×10- 6 göL ) 剂量依赖性地促进 BA SM C 增殖,
在 215×10- 8 göL 时促进作用达到极显著水平
(P < 0101) , 见表 1。
212 丹酚酸 B 和欧芹素乙对 L PC 刺激 BA SM C
增殖的抑制作用: 丹酚酸B 和欧芹素乙均能剂量依
赖性地抑制 L PC (215×10- 7 göL ) 促进 BA SM C
增殖作用 , 丹酚酸B 在1×10- 8mo löL 时作用达到
·366·中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
表 1 L PC 对 BASM C 增殖的影响 (x±s, n= 5)
Table 1 Effect of L PC on BASM C
prol iferation (x±s, n= 5)
组别 终浓度ö(g·L - 1) A 490
空白 - 0128±0101
L PC 215×10- 9 0130±0104
215×10- 8 0138±01023 3
215×10- 7 0144±01023 3
215×10- 6 0145±01043 3
与空白组比较: 3 3 P < 0101
3 3 P < 0101 vs b lank group
显著水平 (P < 0105) , 1×10- 7 mo löL 时作用即达
到极显著水平 (P < 0101)。欧芹素乙在 1×10- 5
mo löL 时作用显著 (P < 0105) , 在 1×10- 3 mo löL
时作用非常显著 (P < 0101) , 见表 2。
表 2 丹酚酸 B 和欧芹素乙对 L PC 刺激 BASM C
增殖的抑制作用 (x±s, n= 5)
Table 2 Inh ibitory effect of sa lv ianol ic ac id B and
imperator in on prol iferation of BASM C
stimulated by L PC (x±s, n= 5)
组别
终浓度ö(mo l·L - 1) A 490 组别 终浓度ö(mo l·L - 1) A 490
空白 - 0129±0102 欧芹素乙 1×10- 7 0145±0103
L PC - 0147±0106△△ 1×10- 6 0141±0104
丹酚酸B 1×10- 9 0144±0102 1×10- 5 0139±01013
1×10- 8 0138±01023 1×10- 4 0138±01013
1×10- 7 0136±01013 3 1×10- 3 0134±01013 3
1×10- 6 0136±01013 3
与空白组比较: △△P < 0101;
与L PC 组比较: 3 P < 0105 3 3 P < 0101
△△P < 0101 vs blank group; 3 P < 0105 3 3 P < 0101 vs L PC group
3 讨论
增殖的V SM C 是A S 早期斑块中的主要成分。
损伤部位继续发展为A S 斑块还是被抑制取决于有
丝分裂原诱导的平滑肌细胞增殖[10 ]。血清中存在不
同类型的平滑肌细胞有丝分裂原, 如某些血管活性
激素如儿茶酚胺, 多肽类有丝分裂原如生长因子、
IL 21、内皮素 (ET ) 等。本实验结果表明,L PC 在 ng
水平即能显著促进平滑肌细胞增殖, 说明L PC 是一
种作用较强的 BA SM C 有丝分裂原, 其可能通过刺
激血管平滑肌细胞增殖, 在 A S 发生发展过程中起
重要的作用。由此可见, 抑制L PC 促增殖活性的药
物对A S 预防治疗具有重要价值。本实验选用了两
种不同类型的心血管系统保护药物——丹酚酸B
和欧芹素乙进行研究, 丹酚酸B 在体内外均具有较
强的抗氧化作用, 欧芹素乙具有较强的抗炎作用。本
实验结果表明两种药物均能剂量依赖性地抑制
L PC 的促增殖作用。由于丹酚酸B 和欧芹素乙属于
作用机制完全不同的两种类型的药物, 提示L PC 的
促增殖作用可能是多途径的, 但L PC 及药物的具体
作用机制需进一步研究。
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·466· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月