全 文 ：最小 ,表明射干与野鸢尾间的亲源关系较近 ; 4和 10
( yw与 yyw间遗传距离 )的柱高最大 ,野鸢尾与鸢
尾的亲源关系较远。
4. 2　 讨 论: 在 中 药 材的 RAPD研 究 中 , 用
HDeasy
TM
Plant Mini kit提取 DNA的纯度高 ,降解
少 ,成本高 ,而 CTAB法提 DNA纯度较低及有部分
降解 ,成本较低。本研究发现即使模板中含有一定量
杂质和部分将降解时 ,在筛选了合适的引物后 ,控制
合适的模板浓度、 Mg2+ 的浓度、退火温度及反应的
循环数同样能达到有效扩增。两种方法提取的 DNA
扩增结果一致 ,并且重复性较好。 因此用 CTAB法
提取的总 DNA模板能满足 RAPD法对模板的要
求。在传统的形态分类学中 ,野鸢尾被划分为鸢尾
属 ,而射干被划分为射干属。小分子化学成分的研究
及细胞遗传学实验都证明有着密切的亲源关
系 [2, 8, 9 ]。本实验通过总 DNA核酸大分子随机扩增 ,
结果表明射干与野鸢尾有较近的亲源关系 ,支持小
分子化学研究的结果 ,有待于进一步的研究。
参考文献:
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金线莲 RNA提取方法的改进
唐明娟 ,郭顺星
(中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京　 100094)
摘　要: 目的　有效提取金线莲 RN A,为研究内生真菌促进其生长机制奠定基础。方法　 C TAB法制备 RN A, 1%
琼脂糖凝胶电泳 ,凝胶成像仪照相。结果　提取的 RN AA260 /A230为 2. 054, A260 /A280为 1. 818,产量达 154. 35μg /g。
电泳条带清晰 , RNA完整性好。 结论　用该方法能高质高量地制备富含多糖和酚类化合物的药用植物 RN A。
关键词: 金线莲 ;酚类化合物 ;多糖 ; RN A
中图分类号: R282. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 10 0937 03
Improved method of extracting RNA from Anoectochilus roxburghii
T ANG Ming-juan, GUO Shun-xing
*
( Institute o f Medicinal Plant Development, Chinese Academy of M edical Science
and Peking Union Medical Colleg e, Beijing 100094, China )
Abstract: Object　 Effectiv ely ex t racting RN A from Anoectochilus roxburghii ( Wall. ) Ldl. lays a
foundation to research the mechanism o f endomycorrhiza promo ting i ts g row th. Methods　 RNA was pre-
pared by CTAB, electrophoresis on 1% ag roses g el and pho to a re taken wi th M uti Image
TM
Light Cabinet.
Results　 The ratio s of RN A A260 /A230 and A260 /A280 were 2. 054 and 1. 818, respectiv ely. And the yield
w as 154. 35μg /g f resh. The bands w ere clea r on ag rose gel and integ ri ty of RN A was good. Conclusion　
RNA with high quali ty and high quanti ty is isolated by the method o f CT AB for medicinal plants wi th high
·937·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
收稿日期: 2002-04-05基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( No 39970018) ;高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金资助项目 ( 199950)作者简介:唐明娟 ( 1972-) ,女 ,四川达县人 ,博士学位 , 1998年考入中国医学科学研究院药用植物研究所硕士 , 2000年转为同专业博士 ,研究方向为药用植物分子技术。 Tel: 010-62889921　　 E-mail: mingjt@ soh u. com; mingj t1153@ sina. com
* 联系人: Tel: ( 010) 62899729
concentra tions of po lysaccharides and phenolics.
Key words: Anoectochilus roxburghii ( Wall. ) Ldl. ; phenolic compounds; po lysaccharides; RN A
　　金线莲 Anoectochilus roxburghii ( Wall. ) Ldl.
为兰科开唇兰属名贵药用植物 ,野生于台湾、福建、
广西等地。该植物具清热凉血、祛风利湿、强心利尿、
平肝等功效 ,主治肾炎、肺炎、糖尿病、风湿病等
症 [1 ]。在自然状态下 ,金线莲生长缓慢 ,加之过度采
挖 ,药源近于枯竭。采用组织培养技术进行金线莲幼
苗的快繁 ,可以促进金线莲的生产发展和缓解医药
市场的供求矛盾。关于金线莲的研究报道不多 ,内容
主要涉及药用价值、组培、生药鉴定、化学、金线莲内
生真菌分离 [2 ]、金线莲内生真菌原生质体制备与再
生 [3 ]等方面。而金线莲的分子研究未见报道。中国医
学科学院药用植物研究所真菌室工作表明 ,当金线
莲与内生真菌建立共生关系后能明显地促进金线莲
增高增重 [4 ]。 这样在快繁的基础上结合共生可加快
金线莲工业化生产。但内生真菌促生的分子机制是
什么呢?采用 mRNA差异显示技术可提供菌根共生
的重要参考价值。 该技术的关键首先是要提取高质
量 RNA。而金线莲富含多糖和酚类化合物 ,采用常
规 RNA提取方法不能有效提取 RNA。本文参照一
种快速简便的 CTAB法 [5 ]获得了高产高质的金线
莲 RNA。这为从分子方面研究药用植物菌根共生机
制奠定了基础 ,具有重要的理论和生产实践意义。
1　材料和方法
1. 1　材料: 以福建金线莲 A. roxburghii ( Wall. )
Ldl.组培苗为材料。
1. 2　方法
1. 2. 1　溶液: ( 1) SST E: 1 mmol /L EDTA ( pH
8. 0) ; 1. 0 mol /L NaCl; 0. 5% SDS; 10 mmol /L
Tril-HCl ( pH: 8. 0)。 ( 2)抽提 buf fer: 2% CTAB
( hexadecy lt rimethylammonium bromide ) ; 2%
PV P( polyvinyl py rrolidinone) ; 100 mmo l /L Tris-
HCl ( pH 8. 0) ; 25 mmol /L EDT A; 2. 0 mol /L Na-
Cl; 0. 5 g /L spermidine; 2% β -mercaptoethanol;氯
仿 -异戊醇 ( 24∶ 1) ; 10 mo l /L LiCl。
1. 2. 2　步骤: ( 1)打开水浴锅调至 65℃ ,向离心管
中加入 8 mL抽提 buffer和 160μLβ -巯基乙醇。上
下倒置离心管混匀 ,拧紧管口 , 65℃预热。( 2)称 1～
2 g金线莲苗 ,用液氮研磨后移入水浴锅中的离心
管 ,捏住离心管 ,充分混匀 , 65℃温育 7 min左右
(中间晃动离心管一次 )。 ( 3)加入 8 m L氯仿 -异戊
醇 ( 24∶ 1) ,上下剧烈振荡 10 s, 10 000 r /min常温
离心 20min。( 4)取上清液 ,加入等体积氯仿 -异戊醇
( 24∶ 1)抽提两次。 ( 5)取上清液 ,加入 1 /4体积 10
mo l /L LiCl , 4℃沉淀 RNA 6 h或过夜。 ( 6) 4℃ ,
10 000 r /min离心 20 min。 ( 7)去净上清液 ,加入
500μL SSTE溶解沉淀加入等体积氯仿 -异戊醇
( 24∶ 1)混匀后 4℃ 12 000 r /min离心 20 min。
( 8)取上清液 ,加入 2倍体积无水乙醇 , - 20℃沉淀
2 h或- 70℃沉淀 30 min。 ( 9) 4℃ , 12 000 r /min
离心 20 min后去上清液 , 70% 乙醇洗沉淀 2次 ,晾
干。 ( 10)加入 50μL 0. 1% DEPC处理的水 , 55℃溶
解沉淀 10 min。 ( 11)取 1μL测吸光值 ( A)。 ( 12)取
1μL稀释 5倍后进行 1%琼脂糖凝胶电泳 ,并且凝
胶成像仪成像。
2　结果与分析
1-接菌处理的金线莲
RN A　 2-不接菌金线莲
RN A(对照 )
图 1　 RNA 1%琼脂
糖电泳图
2. 1　结果: 对于纯 RNA来
说 , A260 /A280比值为 1. 70～
2. 0, A260 /A230大于 2. 0。已知金
线莲含有较多的酚类化合物和
多糖。在提取 RNA过程中会
与 RNA结合造成 RNA大量
丢失。采用经典的异硫氰酸胍
法 , A260 /A230和 A260 /A280比值
分别为 0. 0569和 1. 413 (表
1) ,说明制备的 RNA含较多
的小分子和蛋白污染 ,产量很
低。 而改用该 CT AB法提取
RNA A260 /A230和 A260 /A280比
值分别为 2. 054和 1. 818(表
1)。 说明无小分子和杂蛋白 ,
RN A质量好。 且 RNA产量比用异硫氰酸胍法高
16. 96倍。 电泳分析发现 28 s、 18 s两条带清晰 ,说
明 RNA未降解 ,完整性好 (图 1)。
表 1　不同方法提取的 RNA质量和产量比较
比值 CTAB 异硫氰酸胍
A 230 　 　 0. 238 　 　　 0. 0809
A 260 0. 489 0. 065
A 280 0. 269 0. 046
A 260 /A230 2. 054 0. 0569
A 260 /A280 1. 818 1. 413
RN A产量 (μg /g f resh ) 154. 35 9. 10
2. 2　分析:目前用分子生物学方法研究药用植物报
道较少 ,探索一种有效提取含大量酚类化合物和多
·938· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
糖的药用植物 RNA是十分必要的 ,这对深入研究
药用植物提供了重要参考。 用异硫氰酸胍法不仅由
于使用苯酚导致 RNA沉淀为红棕色 ,而且 RNA产
量和质量均很差。 其主要原因是由于酚类化合物氧
化后不可逆地结合到核酸上并与 RNA共沉淀 [6 ]。
为解决酚类氧化问题 ,用 PV P和 β -巯基乙醇作还原
剂 ,氯仿代替苯酚除蛋白。结果制备的 RNA无色且
使 RNA的 poly A尾损失减到最小。多糖和 CTAB
的去除是采用 2 mol /L氯化钠。高浓度氯化钠有助
于多糖的去除 [7 ]和溶解 CTAB-RNA复合物。 另外
该法提取的 RNA中含有少量的 DNA会影响差异
显示实验的进行 ,所以必须用 DNAaseⅠ 处理才能
合成 cDN A。 目前我们已用该方法制备的 RN A合
成了 cDN A片段 ,大小为 0. 2～ 1 kb,这说明 RNA
质量好。
参考文献:
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中药材白芍的 X射线衍射 Fourier谱鉴定
吴云山1 ,王树春2 ,李兰燕1 ,贺浪冲 2 ,郑启泰 1 ,吕　扬 1
( 1. 中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 ,北京　 100050;　 2. 西安交通大学 药学院 ,陕西 西安　 710061)
摘　要:目的　建立中药材白芍的新鉴定分析方法。方法　采用粉末 X射线衍射 Fourier谱鉴定法。结果　通过对
1个白芍对照品、 1个白芍标本和 3个白芍中药材进行实验、分析 ,获得了白芍的标准 X射线衍射 Fourier图谱及特
征标记峰值。 结论　 X射线衍射 Fourier谱鉴定法可用于中药材白芍的鉴定。
关键词: 中药材鉴定 ; X射线衍射 Fourier图谱 ;白芍
中图分类号: R282. 710. 3　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 10 0939 03
Identification on root of Paeonia lact iflora by X-Ray diffraction Fourier pattern method
WU Yun-shan
1 , W ANG Shu-chun
2 , L I Lan-yan
1 , HE Lang-chong
2 , ZHENG Qi-tai
1 , LU
　· ·
Yang
1
( 1. Institute of Ma teria Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical Co lleg e,
Beijing 100050, China; 2. Co llege o f Pharmacy, X i an Jiao tong Univ e rsity , Xi an 710061, China )
Abstract: Object　 To develop a new identification and analysis method o f the roo t of Paeoniae lacti-
f lore Pall. Methods　 Powder X-ray dif f raction Fourier pa t tern wa s used. Results　 Experiments and ana l-
y sis were carried out on fiv e samples. The standa rd X-ray diff raction Fourier pa ttern and characteristic
di ff raction peaks w ere obtained by one of the roo t o f P . lactif lora control, o ne o f the roo t of P. lacti f lora
sample, and three of the root o f P . lacti f lora Chinese medicinal ma terials. Conclusion　 This method can
be used fo r identi fica tion on Chinese medicinal materials of the roo t of P. lact if lora.
Key words: identification on Chinese medicinal materials; X-ray dif f raction Fourier pa ttern; the roo t
o f Paeoniae lactf lore. Pall.
　　白芍为毛莨科植物芍药 Paeonia lact if lora
Pall.的干燥根。夏、秋两季采挖 ,洗净 ,除去头尾及
细根 ,用水煮后去皮晒干。白芍为常用中药材 ,性苦、
味酸微寒 ,归肝、脾经。有平肝止痛、养血调经、敛阴
·939·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
收稿日期: 2002-01-18基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 29775034)作者简介:吴云山 ( 1978-) ,男 ,山西人 ,在读硕士研究生 ,研究方向为药物的 X射线衍射分析研究。 Tel: ( 010) 63165214
* 通讯作者