全 文 ：0. 5 h后煎提 2次 ( 1小时 /次 )为好 (见样品含量
测定项 )。
3. 2　在样品纯化方面 ,比较了丙酮、乙酸乙酯及水
饱和正丁醇等溶剂的萃取及加热回流等方法 ,确定
水饱和正丁醇萃取 ,且萃取的次数为 6次 (第 7次
萃取液 T LC法检测无鞣料云实精色斑显示 )。
3. 3　以上实验结果表明 ,叶下珠中鞣料云实精的含
量因采收时间和产地的不同差异较大 ,采收期以 8,
9月采收的鞣料云实精的含量较高 ,且同种植物不
同地区的叶下珠鞣料云实精的含量也有较大的差
异 ,以西安的含量最高 ,为 1. 78% 。以海南和贵州的
含量最低 ,仅 0. 58%。 其原因可能与所采植物的生
长环境 ,样品干燥条件和存放时间等有关 ,故本数据
仅供参考。
　　致谢:本文得到赵世萍研究员的帮助 ;并由文中
所提湖北中医学院附院肝病脏象研究所等 7个单
位提供叶下珠样品 ;特致谢意!
参考文献:
[1 ]　江苏新医学院 . 中药大辞典 [M ] . 下册 . 上海:上海人民出版
社 , 1997.
[2 ]　方　蕾 ,任丽娟 . 叶下珠属植物化学和药理作用研究概况 [ J ].
国外医药 -植物药分册 , 1992, 7 ( 6): 249-255.
[3 ]　任丽娟 .叶下珠属植物化学成分研究和临床应用现状 [C ]. 全
国植物资源和植物化学学术讨论会论文摘要集 , 1995: 11-13.
[ 4]　陈玉武 ,任丽娟 . 蜜柑草抗癌有效成分研究Ⅱ 、多酚类成分的
分离与鉴定 [ J ]. 中草药 , 1997, 28 ( 4): 198-202.
菊三七组织培养的研究
黄慧莲 ,刘贤旺 ,谢　平 ,张寿文⒇
(江西中医学院 ,江西 南昌　 330006)
摘　要: 目的　探讨菊三七诱导愈伤组织的过程 ,为快速繁殖幼苗奠定基础。 方法　以菊三七的根、茎、叶为外植
体 ,采用 MS培养基 ,附加不同的植物激素进行实验。 结果　以菊三七的叶片为外植体 ,在培养基 M S+ 1. 0 mg /L
N AA+ 4. 0 mg /L 6-BA上 ,愈伤组织诱导率可达 64%。愈伤组织在适宜的分化培养基上 ,成苗率可达 86. 7%。结
论　通过诱导愈伤组织的途径 ,可以达到快速繁殖菊三七的目的。
关键词: 菊三七 ;组织培养 ;愈伤组织
中图分类号: R282. 13　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 02 159 02
Tissue culture ofGynura segetum
HUANG Hui-lian, LIU Xian-w ang , X IE Ping , ZHANG Shou-w en
( Jiangxi Colleg e of TCM , Nanchang Jiangx i 330006, China )
Abstract: Object　 To study the callus culture o f Gynura segetum ( Lour. ) M err. , so as to lay the
foundation fo r the rapid propagation of i t s breeds.Methods　 The explants used in culture were ro ot , stem
and leaf of G. segerum . The M S basal medium containing dif ferent plant ho rmones w as applied. Results　
The best explants were leaf o f G. segetum . The medium induced callus was M S basal medium containing
1. 0 mg /L N AA and 4. 0 mg /L 6-BA and the ca llus induction ra te was 64% . The sprouting rate o f the
callus transplanted to fi t ting di fferential medium was 86. 7% . Conclusion　 The rapid propagation of G.
segetum can be ca rried out by inducing callus of the plant.
Key words: Gynura segetum ( Lour. ) Mer r. ; tissue culture; callus ti ssue
　　菊三七 Gynura segetum ( Lour. ) M err. 为菊
科土三七属植物 ,以根或全草入药。 别名土三七、血
三七、天青地红、破血丹、紫三七等 ,具有止血散瘀、
止痛消肿、抗疟等功效 [1 ] ,是民间一味常用的中草
药。菊三七的生药学及其所含的化学成分、生物活
性、临床应用等已有多方面的研究 [ 2]。近年来 ,人们
逐渐认识到菊三七的药用价值而大量采挖 ,菊三七
野生资源遭受破坏 ,若不采取行之有效的措施 ,中药
资源将难以实现可持续发展。 应用组织培养的方法
进行菊三七快速繁殖是解决问题的有效方法之一。
·159·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-06-02作者简介: 黄慧莲 ( 1973-) ,女 , 2000年毕业于江西中医学院药学系 ,获中药学硕士学位 ,现为江西中医学院生药学助教 ,主要从事中药资源保护和组织培养的研究工作 ,目前正在参加国家自然科学基金和江西省教育厅等课题的研究 ,发表论文 9篇。
目前我们已从菊三七的叶片诱导出愈伤组织 ,并分
化成幼苗 ,大大提高了繁殖速度。本文报道诱导菊三
七愈伤组织以及分化成苗的实验情况。
1　材料与方法
1. 1　供试材料:菊三七全株采自本院药用植物园
(鉴定人刘贤旺 )。
1. 2　试验方法:菊三七全株用清水冲洗干净 , 75%
酒精中浸 20 s (浸泡时间不超过 1 min,否则材料会
被杀伤 ) ,用无菌水冲洗 1遍 ,再放入 0. 2% 升汞溶
液表面消毒 10 min,无菌水冲洗 3遍 ,切成适宜接
种的小块 ,接种在不同的培养基中。接种后置于培养
室内日光灯下培养 ,光强为 700 lx,每天光照 10 h,
培养温度 ( 20± 2)℃。
2　结果与分析
2. 1　取材部位对诱导愈伤组织的影响:分别取菊三
七植株的根、茎、叶接种 ,采用的培养基为 MS+
NAA 1. 0 mg /L+ 6-BA 2. 0 mg /L ,用来诱导愈伤
组织 ,置于散射光下培养。
接种 15 d后 ,小块叶片明显增厚 ,体积膨大 ,周
围先形成愈伤组织。而接种的菊三七根、茎只有少量
材料形成愈伤组织。 30 d的统计数字 (表 1)表明 ,
以菊三七植株不同部位的材料做外植体 ,其愈伤组
织诱导率差异明显 ,叶的诱导率高达 50. 9% ,根、茎
的诱导率仅为 5% ～ 6% ,这说明菊三七组织培养中
外植体的部位对愈伤组织的诱导有一定影响。
表 1　不同取材部位的诱导效果
接种部位 接种块数 诱导愈伤组织数 诱导率 (% )
根 40 2 5. 0
茎 62 4 6. 5
叶 55 28 50. 9
2. 2　培养基内激素配比对诱导愈伤组织的影响:将
菊三七的叶片剪成小块 ,接种在以下附加不同比例
激素的培养基上:
Ⅰ . M S+ N AA 1. 0 mg /L+ 6-BA 0. 5 mg /L
Ⅱ . M S+ N AA 2. 0 mg /L+ 6-BA 2. 0 mg /L
Ⅲ . M S+ N AA 1. 0 mg /L+ 6-BA 2. 0 mg /L
Ⅳ . M S+ N AA 1. 0 mg /L+ 6-BA 4. 0 mg /L
Ⅴ . M S+ N AA 1. 0 mg /L+ 6-BA 8. 0 mg /L
接种后置于散射光下培养 , 30 d后统计愈伤组织诱
导率 ,结果见表 2。
　　试验结果表明 ,菊三七叶片脱分化产生愈伤组
织受培养基中激素配比的影响 ,生长素与细胞分裂
素的比值偏小时 ,有利于提高诱导率 ,其中以加入
NAA 1. 0 mg /L+ 6-BA 4. 0 mg /L的诱导效果最
好。 但当细胞分裂素的浓度过高时 ,诱导率下降 ,且
愈伤组织较早老化。
表 2　激素配比对诱导愈伤组织的影响
培养基 接种块数 诱导愈伤组织数 诱导率 (% )
Ⅰ 50 2 4
Ⅱ 50 10 20
Ⅲ 50 26 52
Ⅳ 50 32 64
Ⅴ 50 22 44
2. 3　培养基内激素配比对愈伤组织分化成苗的影
响:菊三七愈伤组织经过一段时间的培养后 ,应转入
分化培养基诱导芽和根 ,以获取完整植株进行移栽。
将小块愈伤组织接种在以下附加不同激素的培养
基上:
Ⅰ . M S+ 6-BA 0. 5 mg /L+ N AA 0. 5 mg /L
Ⅱ . M S+ 6-BA 0. 5 mg /L+ KT 0. 5 mg /L+
N AA 0. 5 mg /L
Ⅲ . M S+ 6-BA 2. 0 mg /L+ N AA 0. 5 mg /L+
KT 0. 5 mg /L
表 3　激素配比对愈伤组织分化成苗的影响
培养基 接种愈伤组织块数 能分化成苗的块数 成苗率 (% )
Ⅰ 30 13 43. 3
Ⅱ 30 17 56. 7
Ⅲ 30 26 86. 7
　　试验结果表明 ,接种在 Ⅲ 培养基上的菊三七
愈伤组织能较快较多地分化成苗 ,而且每小块愈伤
组织在 30 d内能分化出丛生的 5～ 10颗小苗 ,培养
时间加长苗数也增加。
3　小结
目前 ,国内有关菊三七组织培养的研究还刚刚
开始 ,本文初步探讨了诱导其愈伤组织和分化成苗
的两个环节 ,研究结果表明 ,诱导愈伤组织的外植体
以菊三七的叶片为佳。在培养基 M S+ NAA 1. 0
mg /L+ 6-BA 4. 0 mg /L 上 ,叶片的诱导率可达
64% 。菊三七的愈伤组织在适宜的分化培养基上 ,成
苗率可达 86. 7% ,而且每小块愈伤组织可以分化出
多个小苗。 我们粗略统计 ,每一个菊三七叶片在
60 d内繁殖的小苗数可达 50株。另外 ,如果能直接
将诱导的菊三七愈伤组织应用于生产 ,则可以省去
分化的环节 ,而且提取原药材的费用也会降低 ,这有
待于今后对其愈伤组织进行深入的探讨。
参考文献:
[ 1 ]　全国中草药汇编编写组 . 全国中草药汇编 [M ] . (上册 ) . 北
京:人民卫生出版社 , 1975.
[ 2 ]　史清水 ,袁惠南 .菊三七研究概况 [ J] . 中草药 , 1991, 22 ( 8):
377-379.
·160· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期