全 文 ：薄层扫描法测定前列通片中盐酸小檗碱的含量
邓海鸣1,汪锦飘2*
( 11 广州中一药业有限公司,广东 广州 510130; 21 中山大学孙逸仙纪念医院, 广东 广州 510140)
前列通片是国家中药保护品种,主要含有黄柏、
黄芪、车钱子等。具有清热解毒、清利湿浊、理气活
血、消炎止痛、祛瘀通淋的功效。用于急性前列腺
炎、前列腺增生。黄柏具有清热燥湿、泻火解毒的功
效,为方中主药,其主要活性成分为小檗碱。本实验
采用薄层扫描法对盐酸小檗碱的含量进行了测定,
为前列通片的质量控制提供依据。
1 仪器与试剂
瑞士 CAMAG TLC Scanner 3 薄层色谱扫描
仪, M et tler AE100万分之一天平,手动点样器(瑞士
CAMAG Nanomat Ó ) , 自动薄层板涂布器 (瑞士
CAMAG) ;硅胶 G(青岛海洋化工厂) , 盐酸小檗碱
对照品 ( 中国药品生物制品检定所, 批号: 713-
9003) ,前列通片(广州中一药业有限公司) , 所用试
剂均为分析纯。
2 方法与结果
211 对照品溶液的配制:精密称取盐酸小檗碱对照品
适量,加无水乙醇制成 0105 mg/ mL的对照品溶液。
212 供试品溶液的配制:取前列通片 20片, 研成细
粉,称取样品约 1 g, 精密称定,置于 50 mL 量瓶中,
加盐酸-甲醇( 1B50)溶液适量, 超声处理 30 min, 取
出静置,加盐酸-甲醇( 1B50)溶液至刻度,滤过。弃
去初滤液, 精密吸取续滤液 10 mL, 水浴蒸至约 1
mL,加入 1 g 中性氧化铝拌匀,蒸干, 置于中性氧化
铝柱( 100~ 200目, 5 g, 内径 15 mm)上,用无水乙
醇60 mL 洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加无水乙醇
1 mL 使溶解,即得。
213 缺黄柏阴性对照溶液的配制:按处方量取缺黄
柏的各药材,按工艺流程制成干膏,照 212项下方法
制备阴性对照溶液。
214 薄层色谱条件: 薄层板:硅胶 G 板( 20 cm @ 10
cm) ;展开方式: 上行展开;展距: 8 cm;展开剂: 苯-醋
酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水( 6B3B115B115B015) ; 预
饱和条件: 另槽加入等体积的浓氨水试液, 预平衡
15 min。
215 薄层扫描条件: 荧光扫描, 光束狭缝为 6100
mm @ 0120 mm ,灵敏度中等, 激发波长为 366 nm。
216 空白试验:取供试品溶液和缺黄柏的阴性对照
溶液,依法扫描测定,结果其他组份对盐酸小檗碱的
测定无干扰。
217 标准曲线及线性范围:精密称取盐酸小檗碱对
照品 0153 mg于 10 mL量瓶中,加无水乙醇溶解并稀
释至刻度。精密吸取1, 2, 3, 4, 5 LL 分别点于同一薄
层板上,依法展开,取出, 晾干,按拟定的扫描条件测
定各斑点的峰面积值。以峰面积积分值对点样量进
行线性回归,得回归方程: Y= 2291902+ 8951358 X ,
r= 01998 8。结果表明盐酸小檗碱在 01053~ 01265
Lg 与峰面积积分值呈良好的线性关系。
218 精密度试验
21811 同板精密度试验:精密吸取盐酸小檗碱对照
品溶液 2 LL 点于同一薄层板上 5个点,展开,取出,
晾干,测定盐酸小檗碱峰面积,结果 RSD= 0146%。
21812 异板精密度试验:精密吸取同一盐酸小檗碱
对照品溶液 1 LL, 分别点于 5块不同的薄层板上,
依法测定盐酸小檗碱峰面积,结果 RSD= 2186%。
219 稳定性试验:精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液
2 LL,点于薄层板上,依法展开, 扫描测定盐酸小檗
碱峰面积, 每隔 1 h 扫描测定 1 次, 结果 RSD =
1158% ( n = 6) ,表明对照品溶液在 5 h 内稳定。精
密吸取供试品溶液 2 LL, 点于薄层板上, 依法展开,
扫描测定盐酸小檗碱峰面积,每隔 1 h测定 1次,结
果 RSD= 2126%,表明供试品溶液在 5 h 内稳定。
2110 重现性试验: 取同一批号样品, 共取 5份,按
212项下方法制备供试品溶液, 依法进行扫描,测定
盐酸小檗碱峰面积,结果盐酸小檗碱含量为01282 6
mg/ g, RSD= 2128%。
2111 回收率试验:采用加样回收法。取已测得盐
酸小檗碱含量的样品粉末(含盐酸小檗碱约 01169
mg)共 5份,精密称定, 置于 50 mL 量瓶中,分别精
密加入盐酸小檗碱对照品溶液适量(含盐酸小檗碱
约 01179 mg) , 按 212项下方法制备供试品溶液,扫
描测定, 计算回收率, 结果平均回收率为 99173%,
#892# 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 35 卷第 8 期 2004年 8月
* 收稿日期: 2003-11- 08
RSD= 2127%。
2112 样品测定:取 6批样品,按供试品溶液制备方
法操作,依法扫描测定,结果见表 1。
表 1 前列通片中盐酸小檗碱测定结果 ( n= 6)
Table 1 Results of berberine hydrochloride
in Qianlietong Tablet ( n= 6)
批 号 盐酸小檗碱/ ( mg#g- 1)
D00112 01338 7
E00007 01497 1
E00017 01294 7
E00018 01291 6
099R 01572 6
102R 01727 4
3 讨论
311 前列通片原标准简单, 只有薄层色谱鉴别, 本
实验采用薄层扫描法对前列通中盐酸小檗碱含量进
行了测定。从结果来看,本方法简单、准确、稳定,重
现性好,为前列通片质量标准的提高提供了依据。
312 曾试用盐酸-乙醇( 2B100)溶液提取,结果杂质
较多,杂质的去除难得到满意的效果,且盐酸小檗碱
的量较用盐酸-甲醇( 2B100)溶液提取少。而比较不
同浓度的盐酸-甲醇溶液( 5B100、10B100, 15B100)进
行提取,发现盐酸-甲醇( 2B100)溶液提取最完全,且
回收率较好。
新疆紫草中多糖的超声提取工艺优选
乔秀文1,兰 卫2,李洪玲1,曾宪佳1, 石志强1*
( 11 石河子大学师范学院,新疆 石河子 832003; 21 石河子大学药学院,新疆 石河子 832003)
紫草根药用,含多种萘醌类化合物 ) ) ) 紫草素
及其衍生物, 具有显著的抗生育、抗炎、抗肿瘤、杀
菌、抗病毒、保肝和免疫调节等作用。紫草中还含有
多糖。紫草多糖具有抗病毒活性,能够激活巨噬细
胞的吞噬功能,增强 T 淋巴细胞的数量和活性, 抑
制 DFH 强度,促进 T 淋巴细胞的免疫应答作用, 具
有促进机体非特异性免疫和特异性的细胞免疫作
用。为促进紫草多糖的应用, 本实验采用超声波法
对紫草多糖进行提取, 以期找出超声法提取紫草多
糖的最佳工艺条件。
1 仪器与试药
722光栅分光光度计(上海精密科学仪器厂) ,
DL ) 360A超声波清洗器(上海之信仪器厂) , 电子
天平(北京赛多利斯天平仪器厂) , HH ) S恒温水浴
锅, DZKW ) C 电子恒温水浴 (北京光明医疗仪器
厂)。
新疆紫草 Ar nebia euchroma ( Royle ) Johnst1
经石河子大学药学院生药教研室王琪、成玉怀老师
鉴定,试剂均为分析纯。
2 方法与结果
211 因素水平的确立: 根据预试,影响紫草多糖超
声提取率的主要因素有超声提取时间、次数和固液
比等,选择的因素水平见表 1。
212 超声波法提取紫草多糖:准确称取紫草干燥粉
表 1 因素水平表
Table 1 Factors and levels
水 平 因 素
A超声时间/ min B超声次数/次 C固液比/ ( g#mL- 1)
1 15 1 1B9
2 25 2 1B12
3 35 3 1B15
末 331330 0 g,分别用不同倍量的水浸不同时间,超
声不同时间、次数后, 抽滤, 滤液减压浓缩至 100
mL,加 4倍量的无水乙醇沉淀, 放置 12 h 以上, 抽
滤,沉淀干燥称重,即得多糖粗提物。将多糖粗提物
分别加入无水乙醇、丙酮各 50 mL 反复抽吸,抽滤,
沉淀物用 100 mL 蒸馏水溶解, 放置后, 离心, 取上
层清液再加入 4倍量无水乙醇沉淀, 抽滤,沉淀物在
60 e 烘干至恒重,即得多糖提取物。
称取相同质量的各次提取的多糖提取物, 置 50
mL 量瓶中,用水溶解后分别加入 6 mL 苯酚溶液和
30 mL 浓硫酸, 30 e 恒温 30 min后,冷水浴冷却至
室温,加水至刻度, 在 490 nm 处测定吸光度, 以不
加样为空白,测定结果见表 2, 数据方差分析见表 3。
213 验证试验: 称取紫草 100 g , 加入蒸馏水 900
mL,于 20 e 下恒温提取 25 m in,滤过后滤渣再次分
别加入 600 mL 蒸馏水, 恒温超声提取 1 次。合并
两次提取液, 测定紫草多糖吸光度,重复 3次,求得
吸光度为 01683。
#893#中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 35 卷第 8 期 2004年 8月
* 收稿日期: 2004-01- 04