全 文 ：　　选取上述最佳条件进行验证试验。在A 3B 1C 1D 2
试验条件下, 一级萃取物中鼠尾草酸的含量为
35124% (n= 3) ; 在A 1B 3C 3D 3 条件下, 二级萃取物
中鼠尾草酸的含量为 55190% (n= 3)。由此证明上
述最佳试验条件是可信的。
5　结论
511　无论是对一级分离还是二级分离, 4 因素影响
萃取物中鼠尾草酸含量的大小顺序都是: 分离压
力> 萃取温度> 萃取压力> 分离温度。
512　从正交试验结果可知, 以萃取物中鼠尾草酸含
量为指标, 对于一级分离, 超临界CO 2 流体萃取迷
迭香中抗氧化活性成分的最佳试验工艺条件: 萃取
压力 40 M Pa、萃取温度 55 ℃、分离压力 5 M Pa、分
离温度 70 ℃; 对于二级分离, 超临界CO 2 流体萃取
迷迭香中抗氧化活性成分的最佳试验工艺条件: 萃
取压力 20M Pa、萃取温度 75 ℃、分离压力 15M Pa、
分离温度 80 ℃。
513　通过两级分离, 可使萃取物中的鼠尾草酸的含
量达到 56111%。如此高的含量为迷迭香中抗氧化 活性成分的进一步开发利用提供了依据。References:[ 1 ]　T u P F, Xu Z H. Chem ical constituen ts and their app licationfrom ro sem ary [J ]1 N at P rod R es D ev (天然产物研究与开发) , 1998, 10 (3) : 622681[ 2 ]　Paris A , Strukel J B, Renko M , et a l. Inh ib ito ry effect ofcarno so lic acid on H IV 21 p ro tease in cell2free assays [J ]1 JN a t P rod , 1993, 56 (8) : 1426214301[ 3 ]　 Inatan i R , N akatan i N , Fuw a H. A ntiox idative effect of theconstituen ts of ro sem ary (R osm arinus of f icina lis L. ) and theirderivatives [J ]1 A g ric B oil Chem , 1983, 47 (3) : 52125281[ 4 ]　R ichheim er S L , M atthew W , Bernart, et a l. A n tiox idan t ac2t ivity of lip id2so lub le pheno lic diterpenes from ro sem ary [J ]1J A OCS , 1996, 73 (4) : 50725141[ 5 ]　Seno rans F J , Ibanez E, Cavero S, et a l. L iqu id ch ro2m atograph ic2m ass spectrom etric analysis of supercrit ical flu idex tracts of ro sem ary p lan ts [J ]1 J Ch rom a tog r A , 2000, 870:49124991[ 6 ]　L opez2Sebastian S, Ramo s E, Ibanez E, et a l. D earom atizit ionof an tiox idan t ro sem ary ex tracts by treatm en t w ith supercrit i2cal carbon diox ide [J ]1 J A g ric F ood Chem , 1998, 46: 132191[ 7 ]　 Ibanez E, O ca A , M urga G, et a l. Supercrit ical flu id ex trac2t ion and fractionation of differen t p rep rocessed ro sem aryp lan ts [J ]1 J A g ric F ood Chem , 1999, 47: 1400214041
地黄在加工炮制过程中 HPLC 谱图的变化
温学森1, 杨世林2, 马小军2, 郑俊华3Ξ
(11 山东大学药学院, 山东 济南　250012; 21 中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所, 北京　100094;
31 北京大学药学院, 北京　100083)
摘　要: 目的　考察地黄在加工炮制过程中糖类成分的变化。方法　在加工炮制的 4 个不同阶段 (65 ℃烘焙 0, 1 和
6 d, 以及烘干样品切片后常压蒸制 4 h)取样, 热水提取。色谱条件为: Sugar2pak21 型阳离子凝胶柱 (柱温 80 ℃) , 水
为流动相 (流速为 017 mL öm in) , 示差折光检测器检测。结果　鲜地黄中有 3 种主要成分, 分别为水苏糖 (11%～
15% )、蔗糖 (0130%～ 0192% )和梓醇 (0127%～ 0188% )。经过加工炮制, 不同阶段的H PL C 色谱图发生了显著变
化。烘焙 1 d 后出现一个显著的单糖峰 (保留时间为 1012 m in, 推定为半乳糖) , 生地黄中该峰更加显著, 同时出现了
棉子糖的色谱峰。熟地黄中, 果糖和葡萄糖的色谱峰十分显著。结论　根据H PL C 色谱图的变化, 认为在烘焙阶段,
鲜地黄中水苏糖发生了脱半乳糖反应, 而在炮制熟地黄时, 由于蒸制又发生了脱果糖反应。地黄加工炮制的主要目
的之一可能在于使水苏糖降解, 减轻胀气副作用。
关键词: 地黄; 加工炮制; 高效液相色谱; 水苏糖; 梓醇
中图分类号: R 28411; R 286102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 02 0153 04
HPLC chroma togram changes w ith processing for roots of R ad ix R ehm ann iae
W EN Xue2sen1, YAN G Sh i2lin2, M A X iao2jun2, ZH EN G Jun2hua3
(1. Schoo l of Pharm aceu tical Sciences, Shandong U niversity, J inan 250012, Ch ina; 2. Inst itu te of M edicinal P lan t
D evelopm ent, Ch inese A cadem y of M edical Sciences and Pek ing U nion of M edical Co llege, Beijing 100094,
Ch ina; 3. Schoo l of Pharm aceu tical Sciences, Pek ing U niversity, Beijing 100083, Ch ina)
Abstract: Object　To invest iga te the saccharide changes of R ad ix R ehm ann iae w hen being p rocessed.
M ethods　T he fresh roo ts w ere to rref ied at 65 ℃ and samp led at 0, 1, and 6 d. T he samp les and 4 h2
·351·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
Ξ 收稿日期: 2003205222
基金项目: 国家自然科学基金重点资助课题 (39930220)
steam ed slices of tho se dried roo ts w ere ex tracted w ith ho t w ater respect ively. T he ex tracts w ere sub jected
to H PL C analysis, Sugar2pak21 co lum n at 80 ℃,w ith w ater as the mob ile phase at 017 mL öm in and detect2
ed by R ID. Results　T here are th ree p rincipal componen ts in the fresh roo ts, i. e. stachyo se (11% —
15% ) , sucro se (0130% —0192% ) , and cata lpo l (0127% —0188% ). In the p rocessing of the fresh roo ts,
the H PL C ch rom ato ram s of the ex tracts d iffered to each o ther rem arkb ly. O n the ch rom atogram of roo ts
to rref ied fo r 1 d, one dist inct mono saccharide peak disp layed at 1012 m in, w h ich is likely to be galacto se,
and it becom e p rom inen t in the dried roo ts together w ith raff ino se. In steam ed ones, the peak s of fructo se
and gluco se becam e ou tstanding. Conclusion 　A cco rding to the H PL C ch rom atogram s, the degalacto2 sy2
la t ion of stachyo se m ay take p lace du ring to rrifying, w h ile defructo syla t ion du ring steam ing. O ne of the
p rincipal pu rpo ses of the p rocessing m ay be fo r stachyo se degradat ion fo r its f la tu lence2cau sing character.
Key words: R ad ix R ehm ann iae; p rocessing; H PL C; stachyo se; ca tapo l
　　地黄是我国最常用中药材之一, 以鲜地黄、生地
黄和熟地黄入药。为了探明其作用机制, 日本学者进
行了大量基础研究, 已经从地黄中分离鉴定了近
100 种化合物[1～ 5 ], 并对糖类进行了比较深入的研
究。目前已经证明多糖和低聚糖是地黄的重要活性
成分[5～ 8 ]。
　　K itagaw a 等从怀地黄中分离出蔗糖和甘露
醇[3 ]。Tomoda 等揭示了地黄的中性组份主要为糖
类成分, 包括葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、棉子糖、甘
露三糖、水苏糖、毛蕊糖和甘露醇等, 碱性组份含有
葡萄糖胺等[4 ]。Kubo 等分析了不同来源的不同加工
炮制地黄, 发现多数含有棉子糖族及其脱果糖类成
分 (defructo syla t ion p roduct ) , 只是含量有较大区
别, 随着加工炮制, 水苏糖含量大幅度下降, 葡萄糖
和果糖明显增加[2 ]。
　　为了进一步了解地黄在加工炮制过程中糖类成
分的变化, 本实验采用 H PL C 法, 分析了地黄在不
同加工炮制阶段H PL C 色谱图的变化规律。
1　材料和方法
111　材料: 所用地黄为笔者收集并鉴定。经茎尖脱
毒处理的品种, 于 4 月中旬将试管苗经练苗后移栽
至中国医学科学院药用植物研究所试验田, 未经脱
毒的样品直接于 4 月中旬将块根切段在相同条件下
栽培, 常规管理, 10 月底收获。
选各品种典型植株 1 株,“北京 1 号”脱毒与带
毒植株各取 3 株, 取每株中的最大块根 (直径 7～ 9
cm )。从块根中部切一圆片, 约 3～ 6 g, 精密称重, 研
磨匀浆, 加沸蒸馏水 50 mL , 沸水浴中加热 10 m in,
趁热抽滤, 残渣加沸水 20 mL 提取两次。合并滤液
加水至 100 mL , 摇匀后取 2 mL 经 0145 Λm 微孔滤
膜滤过, 滤液待测。
　　另取“北京 1 号”脱毒植株 6 株, 收获大块块根
共 20 块, 65 ℃烘焙。1 d 后于中部切片作为加工中
期样品; 烘至恒重后 (6 d) , 切片作为生地黄样品; 将
生地黄切片 (厚约 3 mm ) , 称重, 常压下连续蒸制 4
h, 作为熟地黄样品。溶液提取制备方法同上。
112　分析条件:W aters 510 型色谱仪, Sugar2pak21
型阳离子凝胶交换柱 (0165 cm ×30 cm ) , 流动相为
水, 流速为 017 mL öm in, 示差检测器, 柱温 80 ℃, 进
样 5 或 10 ΛL。
　　鲜地黄样品根据峰面积用外标法计算含量, 每
个样品测量 3 次, 根据峰面积平均值计算糖的含量。
糖类对照品由中国林业科学院分析测试中心提供,
梓醇对照品购自中国药品生物制品检定所 (批号:
080829803)。
2　结果与讨论
211　地黄糖类色谱峰的识别: 由于凝胶色谱具有分
子筛的作用, 糖类按相对分子质量顺序出峰, 相对分
子质量相近的糖类难以良好分离。在本色谱条件下,
鲜地黄各色谱峰分离良好, 而生地黄和熟地黄的色
谱峰出现重叠, 见图 1。各对照品的色谱图见图 2。
　　鲜地黄色谱图中可见比较明显的 6 个峰, 其中
保留时间在 612～ 613 m in 的峰为主要峰, 占总峰面
积的 90% 以上。根据对照品的色谱图可知其应为水
苏糖。保留时间在 717 m in 的峰为二糖, 如蔗糖和麦
芽二糖, 在鲜地黄中, 其应为蔗糖。
　　保留时间在 818 m in 的色谱峰为梓醇。在地黄
木质部提取液中加入梓醇对照品水溶液后, 相应峰
面积增加, 因此确定该峰为梓醇的色谱峰。
　　由于葡聚糖对照品 (相对分子质量为 10 000)的
出峰时间为 514～ 515 m in, 因此保留时间在 413～
416 m in 相连的两个色谱峰应为多糖峰。512 m in 的
峰可能为毛蕊糖。
　　1012 m in 的色谱峰在鲜地黄中不明显, 但在烘
焙中期、生地黄和熟地黄中均十分显著, 根据其出峰
时间推断应为单糖, 由于未得到相应的对照品, 故难
·451· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
A 2鲜地黄　B2烘焙 1 d　C2生地黄　D 2熟地黄
A 2fresh roo t of R ad ix R ehm ann iae　B2roo t to rrified fo r 1 d
C2roo t to rrified fo r 6 d　D 24 h2steam ed slices of dried roo t
图 1　地黄 (北京 1 号)不同加工品的 HPLC 图谱
F ig. 1　HPLC chromatogram s of processed
Rad ix Rehm ann iae
12葡聚糖　2, 52棉子糖　32梓醇　42水苏糖
62蔗糖　72麦芽糖　82葡萄糖　92果糖
12glucan　2, 52raffino se　32catalpo l　42stachyo se
62sucro se　72m alto se　82gluco se　92fructo se
图 2　各对照品的 HPLC 图谱
F ig. 2　HPLC chromatogram s of reference substances
以确定, 但其不可能是葡萄糖和果糖, 因为两者的保
留时间分别为 913 m in 和 1113 m in。根据以往的研
究结果, 在地黄中含量较多的单糖应为半乳糖。保留
时间在 617 m in 的色谱峰在鲜地黄中未出现, 在生
地黄和熟地黄中十分明显, 根据对照品色谱图可标
定其为棉子糖, 其中可能含有其他三糖类成分。
212　鲜地黄中相关成分的含量分析: 由于部分对照
品出现了降解或含有少量杂质, 故地黄和水苏糖采
用葡聚糖定量, 蔗糖用麦芽二糖定量, 梓醇用葡萄糖
定量。各成分含量见表 1。
　　从表 1 可见, 各品种中均以水苏糖含量最高, 为
鲜重的 11%～ 15%。地黄折干率通常为 25% , 故水
苏糖在生地黄中的含量应在 44%～ 60%。有关地黄
中水苏糖的含量有不同的报道[2, 4, 9 ] , 可能与品种、
加工方法和测定方法有关。Tomoda 等采用气相色
谱法测得生地黄中水苏糖含量为 4813% [4 ] , 与本实
验结果接近。其他成分含量变化较大, 除本身含量不
同外, 可能与本实验测定方法的灵敏度较低有关。
表 1　鲜地黄中主要成分含量
Table 1　Con ten ts of pr inc ipa l componen ts
in fresh Rad ix Rehm ann iae
品种
含　量ö%
水苏糖 蔗糖 梓醇
来源
北京 1 号 13. 23 0. 92 0. 27 山东曲阜
13. 12 0. 81 0. 31
13. 10 0. 59 0. 71
11. 75 0. 88 0. 88
14. 16 0. 56 0. 52
10. 90 0. 79 0. 57
土城 12. 28 0. 56 0. 73 河南温县
邢疙瘩 14. 02 0. 50 0. 79
8525 13. 42 0. 47 0. 68
H 1 14. 66 0. 60 0. 44
金状元 14. 68 0. 37 0. 71
七顶葵 12. 40 0. 89 0. 63
红薯王 13. 84 0. 42 0. 66
千层叶 12. 76 0. 47 0. 57
829 13. 03 0. 30 0. 68 山东菏泽
　　梓醇是地黄的主要成分之一, 有关其含量报道
相差较大。K itagaw a 报道为 0111% [3 ] , 罗燕燕等报
道鲜地黄中梓醇含量达 217%～ 1016% [10 ] , 刘根成
等报道为 017%～ 412% [11 ] , 笔者采用本系统经对
10 个品种分析后, 发现鲜地黄中梓醇含量在
0127%～ 0188%。
213　地黄 H PL C 色谱图在加工炮制过程中的变
化: 鲜地黄的色谱峰中, 水苏糖最为显著, 蔗糖和梓
醇也较明显。文献报道鲜地黄提取液中还检测到毛
蕊糖、棉子糖、甘露三糖、葡萄糖、果糖等[2, 4 ]。在本测
定系统中, 这些糖未在鲜地黄水提液中形成明显色
谱峰, 可能与检测器的分辨率较低有关, 也可能当棉
子糖含量很低时, 被埋在水苏糖色谱峰的尾部, 或可
能前人在提取分离过程中水苏糖等发生分解所致。
　　烘焙 1 d 后, 半乳糖的色谱峰 (1012 m in) 变得
十分明显, 并且在生地黄中更加突出。除鲜地黄中的
原有峰依然存在外, 生地黄中棉子糖 (617 m in) 的峰
十分显著, 这说明在鲜地黄的烘焙过程中, 水苏糖发
生了分解, 生成了棉子糖和半乳糖。果糖 (1113 m in)
和葡萄糖 (913 m in) 的峰已经出现但还不明显。此
外, 还出现一个保留时间为 811 m in 的未知峰。
　　熟地黄的色谱图与鲜地黄和生地黄的相比, 突
出的变化为水苏糖含量相对减少, 而棉子糖相对增
·551·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
加; 葡萄糖和果糖变得十分显著, 而梓醇的色谱峰变
得不明显。发生这种显著变化的原因可能在于经过
蒸制后水苏糖 (也可能包括棉子糖)发生了脱果糖反
应, 从而使果糖的含量增加, 形成的甘露三糖可能在
棉子糖的位置出现。梓醇分解可能是葡萄糖增加的
主要原因。人体肠道内不含降解棉子糖族糖类的 Α2
半乳糖苷酶, 因此水苏糖等进入下部肠道后, 可使双
歧杆菌等大量繁殖, 有利于人体健康, 但可产生大量
氢气、二氧化碳和甲烷, 被认为是造成肠道胀气的主
要因素[12 ]。根据本实验结果, 我们认为, 地黄加工炮
制的主要目的可能在于降解水苏糖, 避免由此造成
的不良反应。
　　由于本测试条件的限制, 地黄加工品中各糖类
组份的色谱峰不能完全分开, 无法准确定量。但从
H PL C 色谱图的变化来看, 本系统可清楚地反映地
黄在加工炮制过程中主要成分的变化, 为进一步了
解地黄加工炮制机制奠定了基础, 同时H PL C 图谱
还可作为地黄加工炮制的质控措施。
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人参白虎汤配伍规律研究
——不同配伍条件下钙离子含量变化
丁选胜, 戴德哉, 汤晓　Ξ
(中国药科大学 药理研究室, 江苏 南京　210009)
摘　要: 目的　通过研究不同配伍条件下钙离子含量变化, 探讨人参白虎汤配伍规律。方法　采用直接滴定法测定
人参白虎汤中各单味药物及不同配伍组别和全方中钙离子含量。结果　单味药物中, 仅石膏和炙甘草中含有钙离
子; 当石膏与其他药物配伍合煎后, 钙离子含量提高; 在保持原方配伍比例条件下, 全方中的钙离子含量高于其他
配伍组别。结论　石膏与其他药物配伍合用后, 钙离子含量提高。
关键词: 人参白虎汤; 配伍规律; 钙离子含量
中图分类号: R 286102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 02 0156 03
·651· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
Ξ 收稿日期: 2003206223
基金项目: 教育部振兴行动计划资助; 江苏省博士后基金资助
作者简介: 丁选胜 (1962—) , 男, 安徽广德人, 中国药科大学博士后。T el: (025) 83271453　E2m ail: dxs0162@ sina. com