全 文 ：Cc 两居群聚在一起, 这与 RA PD 分析中 Cb 居群和
Cc 居群遗传一致度最大且聚为一类相一致; 所进行
的巢式方差分析结果显示鳞茎秋水仙碱含量的变异
有 89124% 存在于居群内个体间, 10175% 存在于
居群间。因此, 在居群内个体间选育高含量单株, 培
养无性系品种, 利用不同地理分布区高含量植株进
行杂交育种, 在 GA P 种植中具有现实的意义。
丽江山慈菇鳞茎秋水仙碱含量在居群内个体间
和居群间的变异程度及其聚类分析, 与其 RA PD 检
测分析的结果有一定的相关性, 丽江山慈菇鳞茎秋
水仙碱含量可作为其遗传变异的一个重要性状,
RA PD 分析结果可为遗传选育高含量单株、高含量
居群以及杂交选育工作的开展提供分子层次的理论
依据。
利用 DNA 片段多态性分子标记技术, 开展丽
江山慈菇居群遗传多样性和遗传结构的分析, 可为
丽江山慈菇的保护、引种驯化、遗传育种、繁育栽培
和 GA P 种植提供理论依据。在构建丽江山慈菇
RA PD 指纹图谱的基础上, 完善其DNA 指纹图谱,
对制定丽江山慈菇保护策略和措施以及 GA P 种植
标准, 有着直接的指导意义。
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柱色谱-紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮的含量
杨美华, 卢兖伟, 匡岩巍Ξ , 孙仲诒, 吴祖泽
(军事医学科学院放射医学研究所, 北京　100850)
摘　要: 目的　建立广金钱草中总黄酮的含量测定方法。方法　选用测定波长 272 nm , 以 62C2葡萄糖282C2木糖洋
芹素 (vicen in22) 为对照品, 采用柱色谱2紫外分光光度法对不同来源的广金钱草进行了总黄酮的含量测定。结果　
vicen in22 在 1018～ 2512 ΛgömL 具有良好的线性关系, 回归方程为 Y = 0. 030 9 X + 0. 016 (r= 0. 999 9) , 平均回收
率为 100182% , R SD 为 1130%。结论　该方法操作简便, 结果准确, 重复性好, 可用于广金钱草的质量控制。
关键词: 广金钱草; vicen in22; 总黄酮; 含量测定; 柱色谱2紫外分光光度法
中图分类号: R 28216　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 06 0688 03
Quan tita tive determ ina tion of tota l f lavono ids in D esm od ium s ty racif olium
by column chroma togram -UV spectrophotom etry
YAN G M ei2hua, LU Yan2w ei, KUAN G Yan2w ei, SUN Zhong2yi, W U Zu2ze
(Beijing Inst itu te of R adiat ion M edicine, A cadem y of M ilitary M idical Sciences, Beijing 100850, Ch ina)
Key words: D esm od ium sty racif olium (O sbeck) M err. ; vicen in22; to ta l f lavono ids; quan t ita t ive de2
term inat ion; co lum n ch rom atogram 2UV spectropho tom atry
　　广金钱草为常用中药, 来源于豆科山蚂蝗属植
物 金 钱 草 D esm od ium sty racif olium (O sbeck )
M err. 的干燥地上部分, 收载于《中华人民共和国药
典》2000 年版一部[1 ]。具有清热除湿, 利尿通淋之功
·886· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209215
作者简介: 杨美华 (1964—) , 女, 博士, 研究方向为生药分子鉴定、生药分析及新药研究开发。T el: (010) 62899730 (O )
E2m ail: yangm eihua15@ho tm ail. com3 河南中医学院 中药系 97 级毕业生
效。含有黄酮类、皂苷类、鞣质和生物碱等成分[2～ 5 ]。
药理研究证明, 广金钱草总黄酮具有预防草酸钙结
石形成和复发的作用[6, 7 ] , 另外还有显著的抗炎作
用[8 ] , 增加冠脉血流量等[9, 10 ]。《中华人民共和国药
典》只收载了广金钱草中黄酮、生物碱的定性检查方
法。本实验首次以黄酮中含量较高的成分 62C2葡萄
糖282C2木糖洋芹素 (vicen in22) 为对照品, 采用柱
色谱2紫外分光光度法, 测定了广金钱草中总黄酮的
含量, 为广金钱草原药材的质量控制提供了依据。
1　仪器与试药
　　UV 22501PC (岛津) UV 2V is 光谱记录仪,
T P—300 超声波清洗机。
vicen in22 对照品自制, 采用自身对照 H PL C 法
测得含量为 98% 以上。所用试剂均为分析纯。柱色
谱用聚酰胺 (60～ 90 目) (江苏临江试剂厂)。
广金钱草药材购于海南省、广东省和广西省不
同的药房和医药公司。经北京大学药学院陈虎彪教
授鉴定为豆科山蚂蝗属植物 D. sty racif olium
(O sbeck) M err. 的干燥地上部分。
2　方法与结果
211　测定波长的选择: 对照品溶液和供试品溶液
(上柱前及上柱后) 在 200～ 400 nm 进行扫描, 发现
均在 272 及 339 nm 附近有最大吸收峰, 但波长 272
nm 处的响应值比波长 339 nm 波长处的响应值大,
故选择测定波长 272 nm。
212　对照品溶液的制备: 精密称取经五氧化二磷干
燥 24 h 的 vicen in22 对照品适量, 加 50% 乙醇制成
36 ΛgömL 的溶液, 即得。
213　供试品溶液的制备: 取本品粉末 (过二号筛)
015 g (同时另取本品测定水分) , 精密称定, 置 50
mL 具塞锥形瓶中, 精密加 80% 乙醇 25 mL , 密塞,
称定质量, 超声处理 (功率 440 W , 频率 50 H z) 60
m in, 取出, 放冷, 再称定质量, 用 80% 乙醇补足减
失的质量, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 5 mL , 蒸至
近干, 残渣加 50% 乙醇使溶解, 放冷, 通过聚酰胺
柱 (60～ 90 目, 1 g, 内径 1 cm , 湿法装柱) , 以 50%
乙醇洗脱, 收集洗脱液并定容至 100 mL , 摇匀, 作为
供试品溶液。样品含量均以干燥品计算。
214　线性关系考察: 精密吸取上述对照品溶液 3,
4, 5, 6, 7 mL 分别置于 10 mL 量瓶中, 加 50% 乙醇
稀释至刻度, 摇匀, 以 50% 乙醇为空白对照, 于 272
nm 处测定吸光度, 以 vicen in22 溶液浓度为横坐
标, 吸光度值为纵坐标, 绘制标准曲线, 计算得回归
方程为: Y = 0. 030 9 X + 0. 016, r= 0. 999 9。结果表
明 vicen in22 在 1018～ 2512 ΛgömL 与吸光度具有
良好的线性关系。
215　精密度试验: 取一定浓度供试品溶液连续测定
5 次, 测定吸光度, 其 R SD 值为 0138% , 表明仪器
精密度良好。
216　稳定性试验: 取对照品及供试品溶液于室温分
别放置 0, 30, 60, 90, 120 m in 测定吸光度, 计算对照
品及供试品的 R SD 分别为 1120% , 0174%。表明对
照品及供试品溶液在 2 h 内稳定。
217　重复性试验: 精密称取同批样品 5 份, 按含量
测定方法进行测定, 平均含量为 2124% , R SD 为
1170% , 表明重现性良好。
218　回收率试验: 精密称取已知含量的广金钱草药
材 (过二号筛) 5 份, 分别精密加入 vicen in22 对照品
适量, 各份均按含量测定方法进行测定, 平均回收率
100182% , R SD 1130% (n= 5)。
219　样品测定: 按 213 项制备供试品溶液, 对 11 批
来源不同的广金钱草进行了总黄酮的含量测定, 结
果见表 1。
表 1　样品测定结果 (n= 3)
Table 1　Analytica l results of sample (n= 3)
　药材批号 来　源 含量ö% RSD ö%
200207030 海口宏发大药房 2159 0108
200207028 海南 2143 0164
200207029 海南 2141 0121
200207027 海口益民药行 1148 1144
20001220 汕头制药厂 1134 1159
20020520 广州 2121 0167
2002061301 广西 1171 0133
2002061302 广西 2126 0131
2002061303 广西 2104 0110
20010708 广州市药材公司 2128 0134
20010718 广州市药材公司 2108 0127
3　讨论
311　测定方法的选择: 黄酮类化合物含量测定方法
有比色法[11 ]、紫外分光法[12 ]等。很多文献报道总黄
酮的含量测定均以芦丁为对照品, 采用 N aNO 22
A l(NO 3) 32N aOH 为显色剂进行含量测定[13～ 15 ]。郭
亚健等[16 ]选择了一些黄酮类成分和非黄酮类成分,
照上述比色法在波长 400～ 700 nm 进行扫描测定。
结果表明, 有些黄酮类物质在 500 nm 处无最大吸
收或吸收很弱, 而有些非黄酮类物质在 500 nm 处
有最大吸收或有较强吸收。实验结果说明以芦丁为
对照品, 以 N aNO 22A l (NO 3) 32N aOH 为显色剂, 于
500 nm 进行总黄酮含量测定的方法专属性不强, 有
局限性, 准确性较差。石淋通片系广金钱草的浸膏
片, 席先蓉等[17 ]曾参照《中华人民共和国药典》测定
·986·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
槐花中芦丁含量方法, 以 N aNO 22A l (NO 3) 32N aOH
为显色剂, 对石淋通片中黄酮类化合物的含量进行
了测定。结果未见供试品溶液在 500 或 510 nm 处
与对照品有相似吸收峰, 显然用该法测定石淋通片
中总黄酮的含量是不妥的。笔者也曾采用上述方法,
以芦丁为对照品, 对广金钱草原药材进行总黄酮的
含量测定, 实验结果与席先蓉等一致。此外, 还以
vicen in22 为对照品, 以N aNO 22A l(NO 3) 32N aOH 为
显色剂, 采用上述方法, 对广金钱草中总黄酮的含量
进行了测定, 结果仍未见对照品溶液和样品溶液在
500 或 510 nm 处有吸收峰, 该结果亦表明以
N aNO 22A l (NO 3) 32N aOH 为显色剂的比色法不能
用于广金钱草中总黄酮的含量测定。从实验结果可
知, 以广金钱草黄酮中含量较高的成分 vicen in22 为
对照品, 采用柱色谱2紫外分光光度法测定其总黄酮
的含量, 操作简便, 重现性好, 结果准确。
312　提取溶剂和提取方法的选择: 实验中比较了
50% 甲醇, 30% 甲醇, 80% 乙醇超声提取或加热回
流提取样品, 结果以 80% 乙醇超声提取的样品杂
质量少, 操作简便。
313　提取时间的确定: 采用 80% 乙醇超声提取样
品, 分别测定了不同提取时间样品中总黄酮的含量,
结果在以 60 m in 时总黄酮含量最高。
314　洗脱溶剂和体积的确定: 实验中曾采用甲醇
5%～ 30% , 乙醇 10%～ 50% 洗脱, 结果以 50% 乙
醇 75 mL 即可洗脱完全。
315　本方法简便快速, 准确度高, 重现性好, 为《中
华人民共和国药典》广金钱草的质量标准的进一步
提高提供了依据。
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乌药的显微鉴别
王旭红, 徐珞珊, 秦民坚Ξ
(中国药科大学中药学院, 江苏 南京　210038)
　　乌药来源于樟科 (L au raceae) 植物乌药 L in2
d era stry chn if olia (Sieb. et Zucc. ) V allar 的干燥
块根, 是一应用历史久远的常用中药, 早在《本草拾
遗》中已有记载, 陈藏器谓:“乌药生岭南、邕州、容州
及江南, 树生似茶, 高丈余, 一叶三桠, 叶青阴白。根
状似山芍药及乌樟, 根色黑褐。”苏颂谓:“以天台者
·096· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209229