全 文 ：。1316· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
andpseudoephedrineinMAHUANGTANGbyGC—MSand
effectofcompatiblemedicinalherbsonconcentrationof
componentsindecoctionEJ]．ChinTraditHerbDrugs(中草
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HPLC法测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱中杂质
刘祥东h2，梁琼麟1，罗国安H，王义明1，刘清飞1
(1．清华大学化学系，北京100084；2．江西中医学院，江西南昌330006)
摘 要：目的 建立盐酸麻黄碱(E)和盐酸伪麻黄碱(PE)中杂质的高效液相色谱HPLC测定方法。方法用RP
C，。色谱柱，以20mmol／LKH2PO。水溶液一甲醇(96：4)为流动相，检测波长为210nm，分析时间为20min。结果
6种麻黄生物碱均达到基线分离；混合对照品连续进样6次，色谱峰面积RSD均小于1．0％；对照品质量浓度在选
定范围内呈现良好的线性关系(R2>o．999)；各成分最低检出限分别为：去甲基麻黄碱(NE)为0．05t-g／mL，去甲基
伪麻黄碱(NPE)为0．04btg／mL，E和PE为0．1btg／mL，甲基麻黄碱(ME)和甲基伪麻黄碱(MPE)为0．2／一g／mL；
各成分的加样回收率均大于97．1％；6个待测样品均被检测出不同程度的杂质。结论本方法分离度好、精密度
高、专属性强、灵敏度高，可用于麻黄生物碱类药物中杂质成分的定性和定量测定。
关键词：盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；高效液相色谱；杂质
中图分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)09—1316—04
Determinationofimpurityinephedrinehvdrochlorideand
pseudoephedriney ochloridebyHPLC
LIUXiang-don91’2，LIANGQiong—linl，LUOGuo—an¨，WANGYi—min91，LIUQing—feil
(1．DepartmentofChemistry，TsinghuaUniversity，Beijing100084，China；2．JiangxiCollege
ofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330006，China)
Abstract：ObjectiveTodevelopanHPLCmethodfordeterminationofimpuritiesinephedrine
hydrochloride(E)andps udoephedrineydrochloride(PE)．MethodsA11ofephedrinealkaloids
referencesubstancesandsamplesw reseparatedWitha 20mmol／LaqueousKH2P04containing4％
methanolbufferunderisocraticelutionbyusinga C18reversed—phasecolumnwithin20min，andthe
detectionwavelengthwas210nm．ResultsSixephedrinealkaloidsreferencesubstanceswerebase—line
separatedndwerelinearinconcentrationofselection(R2>0．999)．Therelativestandarddeviation
(RSD)ofchromatogramareaw s1essthan1．O％forallofthemaftersixsuccessiveinj ctions．The
detectionl mitwas0．05弘g／mLfornorephedrine(NE)，0．04／19／mLfornorpseudoephedrine(NPE)，0．1
／19／mI。forEandPE，and0．2btg／mLformephedrine(ME)andmepseudoephedrine(MPE)，respectively
(S／N≥3)．Therecoveryratewasmorethan97．1％forsixephedrinealkaloids．Underthismethod
system。alloftheabove—mentionedsixsamplesw retestedandfoundtocontainsomeoftheimpurityat
differentlevels．ConclusionThisdevelopedmethod，whichisverysimple，perfectp ecision，high
sensitivity，andselectivity，canbeusedforthequalitativendquantitativedeterminationofimpuritiesof
ephedrinealkaloid—typesamples．
Keywords：ephedrinehydrochloride(E)；pseudoephedrinehydrochloride(PE)；HPLC；impurity
盐酸麻黄碱(ephedrinehydrochloride，E)和盐酸伪麻黄碱(pseudoephedrinehydrochloride，PE)
收稿日期：2004—12—24
基金项目：科技部重大专项基金资助项目(2002BA906A29—3，2002DEA20021—3，2001BA701A36—18)
作者简介：刘祥东(1980一)，男，江西南康人，江西中医学院中药化学与成分分析专业在读硕士。
*通讯作者罗国安
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1317·
是麻黄中的两个主要活性成分，两者为非对映异构
体，均具有多方面的药理作用[1]，是许多OTC药物
中的常用配伍成分，也可用于某些化合物定量时的
内标成分嘲。作为原料药《中国药典}2000年版(二
部)规定E和PE的质量分数均不得低于99．O％。
现在应用的麻黄碱和伪麻黄碱主要有两个来源途
径，从麻黄中提取而来和由合成而来，目前仍以提取
得来的居多。麻黄中除了麻黄碱和伪麻黄碱之外，还
有4种主要的生物碱类成分——甲基麻黄碱
(ME)、甲基伪麻黄碱(MPE)、去甲基麻黄碱(NE)
和去甲基伪麻黄碱(NPE)。这4种麻黄生物碱的结
构与E和PE相近，是两者中常见的杂质成分。近年
来，麻黄碱和伪麻黄碱的提取纯化、区分鉴别及相互
转化技术在不断取得新的进展，提取技术如水蒸气
蒸馏法、离子交换法、酸水煮提法[3]、微波法[4j、生物
碱膜提取法[5]、超临界流体萃取法[63；区分鉴别技术
有电喷雾质谱法[7]；相互转化技术如以冰醋酸为溶
剂、乙酐为催化剂的一步转化法[83等。本实验采用反
相高效液相色谱法建立了麻黄碱和伪麻黄碱两个原
料药中杂质成分的定性和定量检测方法。
1仪器与试药
Waters2695高效液相色谱仪；Waters2996
PDA检测器；SZ一93自动双重纯水蒸馏器(上海亚
荣生化仪器厂)。
盐酸麻黄碱(E，批号：05106一l，质量分数
99．28％)、盐酸伪麻黄碱(PE，批号：16340—1，质量
分数99．3％)、甲基麻黄碱(ME，批号：13525—1，质
量分数99．4％)、甲基伪麻黄碱(MPE，批号：13535—
1，质量分数100．0％)、去甲基麻黄碱(NE，批号：
14511-1，质量分数99．6％)、去甲基伪麻黄碱
(NPE，批号：14532一S，质量分数99．33％)。对照品
均购自ChromaDex公司。E和PE样品由中国医药
对外贸易公司提供。甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分
析纯，自制二次水。
2方法与结果
2．1对照品溶液配制：精密称取6种麻黄生物碱对
照品适量，用甲醇分别配制单一对照品储备液，储存
于4‘C冰箱中。精密吸取6种麻黄生物碱单一对照
品储备液一定体积，置于10mL量瓶中，加流动相
至刻度，混匀，作为混合对照品储备液。该储备液中
各成分的最终质量浓度分别为NE：15．1弘g／mL；
NPE：6．33>g／mL；E：14．9pg／mL；PE：15．3
>g／mL；ME：16．0弘g／mL；MPE：14．9>g／mL。
2．2供试品溶液的配制：取样品约0．5g，精密称
定，用适量流动相使其完全溶解。将此溶液转移至
100mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，备用。
2．3 色谱条件：PhenomenexSyn rgiPolar—RPC18
色谱柱(150mm×4．6mm，4肚m)，配有PolarRP
Cartridges预柱；流动相为20mmol／LKH2P04水一
甲醇(96：4)；体积流量为1．2mI。／rain；柱温为30
。C；进样量为20弘L；检测波长为210nm。
2．4工作曲线的制备：将混合对照品储备液分别稀
释3、4、6、10、15、30、40倍，配制成混合对照品的系
列质量浓度，每个质量浓度分别进样3次。以3次进
样的色谱峰面积平均值对质量浓度作线性回归，得
各成分回归方程。NE：Y一42000X一1．35，R2—
0．9990；NPE：Y一42500X一1000，R2—
0．999；E：y一39900X一45400，R2=0．9999；
PE：y一39700X一7710，R2=0．9998；ME：y一
36400X～1100，R2—0．9986；MPE：y一37100
x一3740，R2—0．9996。由于最低质量浓度的混合
对照品溶液中ME和MPE两个成分的质量浓度接
近检出限，偏差较大，故在作回归方程时将其舍去，
只取前面6个质量浓度的数据。
2．5检出限试验：将混合对照品溶液(对照品母液
稀释30倍)逐步稀释进样，当稀释2．5倍时ME和
MPE最低检出(S／N≥3)，稀释5倍时E、PE和
NPE最低检出，稀释10倍时NE最低检出。以对照
品原质量浓度计算得各成分的最低检出限分别为
NE：0．05弘g／mL，NPE：0．04Fg／mL，E、PE：0．1
弘g／mL，ME、MPE：0．2pg／mL。
2．6专属性试验：用流动相空白溶剂进样。表明系
统无污染，对检测结果无干扰。用6种麻黄生物碱单
一成分对照品溶液分别进样，再用混合对照品溶液
进样，单一成分的色谱峰保留时间与混合对照品中
对应成分的色谱峰保留时间相比较，各色谱峰彼此
吻合，表明方法专属性良好。
2．7精密度试验：麻黄生物碱混合对照品溶液连续
进样6次，各成分的色谱峰保留时间和峰面积RSD
分别为NE：0．014％、0．417％，NPE：0．015％、
0．723％，E：0．021％、0．471％，PE：0．021％、
0．737％，ME：0．028％、0．275％，MPE：0．038％、
0．904％。
2．8稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0、
12、24、48h进行测定，考察E和PE峰面积的RSD
分别为0．837％、0．915％(咒一4)。
2．9 重现性试验：取同一样品(E批号20040101，
PE批号：20030905)，平行制备供试品溶液5份，用
万方数据
·1318· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
流动相稀释1000倍，测定，E和PE色谱峰面积的
RSD分别为4．09％、5．380A(咒=4)。
2．10加样回收率试验：取批号：20040101样品，用
流动相稀释100倍后，取500肛L，加入等体积混合
对照品溶液(对照品母液稀释6倍)，平行处理3份，
进样分析，用回归方程计算。同时，取稀释后样品
500肛L，与等体积流动相混合，进样计算原样品中各
麻黄生物碱的量。按计算加样回收率[回收率=(测
得量一原样品中的量)／加入量×100％]，结果回收
率和RSD分别为NE：103．2％、4．94％，NPE：
102．1％、7．34％，E： 97．1％、4．48％，PE：
102．3％、9．01％，ME：99．3％、8．90％，MPE：
99．2oA、6．60％(挖=3)。
2．11样品测定：分别取6个批号的样品母液各1
mL置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度。同法再
稀释2次，将样品液稀释至原母液的1000倍，用
0．45弘m滤膜滤过至自动进样小瓶中，连续进样3
次，以色谱峰保留时间自动匹配出原料药中的主成
分，由对应的回归方程计算其质量分数，从而得出相
应的杂质的质量分数。色谱图见图1，结果见表l。
c《3
胁 82 l i sn n 八厂＼
一fLJL一』＼、／＼——
l—PE2一E 3一NE4一NPE5-ME6一MPE
图1 PE样品(A)、E样品(B)，混合对照品溶液
(C)和空白溶剂(D)的HPLC图谱
Fig．1HPLCcbromatogramsfPEsample(A)，E
sample(B)，mixedreferencesubstances(C)，
andblanksolution(D)
取6个批号的样品母液各lmL置10mL量瓶
中，用流动相稀释至刻度，其中主成分为PE的3个
样品直接用o．45肛m滤膜滤过至自动进样小瓶中；
主成分为E的3个样品用流动相再稀释1倍，用
0．45pm滤膜滤过至自动进样小瓶中。每个样品均
连续进样3次，以色谱峰保留时间自动匹配出原料
中的杂质成分，根据对应的回归方程直接计算杂质
的质量分数。结果见表2。
表1样品中各成分测定结果(n一3)
Table1 Determinationofcomponentsinsamples(雄一3)
表2样品杂质测定结果锄一3)
Table2 Determinationofimpurityinsamples(聘一3)
批号 杂质 杂质／％
NPE0．0333
NPE0．0332
NPE0．0398
NE 0．191
NE 0．186
NE 0．19l
主成分质量分数／％
99．967
99．967
99．960
99．809
99．814
99．809
20030905
20030906
Z0030907
20040101
20040102
20040103
3讨论
流动相中加入KH。PO。可以明显改善色谱峰的
拖尾，这是由于KH。PO；缓冲盐体系控制系统的pH
值。但过高的盐浓度容易导致盐析，堵塞液相管路及
色谱柱，因此在不影响分离的情况下，应尽量减小缓
冲盐的浓度。试验考察10、20、50、80、100mmol／L5
个浓度水平。结果表明，当盐浓度达到20mmol／L
时，增加KH。PO。浓度对分离无明显影响。最后确定
采用20mmol／L的KHzP04。
甲醇的比例在本实验中会较大程度地影响各成
分的出峰时间，增大比例可缩短分析时间，但分离度
降低，反之则分离度好，但分析时间长。
增大流动相的体积流量可以缩短分析时间，且
峰形变窄，但柱压升高，对色谱柱不利，体积流量过
小则色谱峰扩散严重。试验考察了1．0、1．1、1．2、
1．3、1．4、1．5mL／min6个水平，经过对比优化，最
后确定1．2mL／min。
对6种麻黄生物碱类成分进行了外标法定量方
法的研究，并采用两种方法对原料药PE和E进行
杂质的测定，不仅测定其杂质的量，而且通过保留时
间匹配出其中的杂质成分。根据第1种方法测定的
结果，3个E样品中的杂质比3个PE样品中的杂
质的量要高，因此在用第2种方法测定时，将两者稀
释成不同的质量浓度，以减小因样品质量浓度过大
而产生的色谱柱过载，影响测定结果。
等焉篡m跚一玑吼“乳豇卜二
R一
万方数据
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超滤膜纯化夏天无总碱的研究
朱才庆1’2，余华¨，范其坤1，熊胜泉1，徐丽英1，魏东芝2
(1．江西省药物研究所天然药物研究室，江西南昌330029；2．华东理工大学
生物反应器工程国家重点实验室，上海200237)
摘 要：目的 探讨应用超滤膜分离技术纯化夏天无总碱工艺。方法 采用不同截留分子的膜组件、操作参数进行正
交设计，以与原阿片碱相关的各种指标考察不同膜组件及操作参数对膜分离效果的影响。结果 截留相对分子质量
为6×103～1．0×104的PS膜具有较好的膜分离效果，选择压力0．08MPa、料液温度40℃、进料体积流量2．8L／
min的操作参数工作效率更高。结论利用膜分离工艺制备的夏天无注射液澄清、色泽好，显示出更强的药效作用。
关键词：夏天无总碱；原阿片碱；膜分离；药效作用
中图分类号：R284．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)09—1319一04
PurificationofRhizomaCorydalisDecumbentistotalkaloids
byultrafiltrationmembranetechnology
’ ZHUCai—qingh2，YUHual*，FANQi—kunl，XIONGSheng—quanl，XULi—yin91，WEIDong—zhi2
(1．DepartmentofNatura]Medicine，InstituteofMater aMedicaofJiangxiProvince，Nanchang330029，China；2．State
KeyLaboratoryofBioreactorEngineering，EastChinUniversityofScienceandTechnology，Shanghai200237，China)
Abstract：ObjectiveToexplorethpossibilityforapplicationofultrafiltrationmembranetechnology
topurifyRhizomaCorydalisDecumbentistotallkaloids(RCDTA)．MethodsBasedontheindexrelated
toprotopine，toinvestigatetheeffectofdifferentaperturemembraneandorthogonaltestofseparation
parametersonmembranesaparationefficiencyofXiatianwuI jection．ResultsThePSmembranewith
6×103—1．0×104interceptionmolecularweighthadbetterseparationefficiencya dthepreferredop ration
parametersw e0．08MPaofpressure，40℃ofliquidtemperature，and2．8L／minofliquidspeed．
ConclusionXiatianwuI jectionpreparedbyultrafiltrationmembranetechnologyis clearwithgood
colourandbetterd ugfunction．
Keywords：RhizomaCoryd lisDecumbentisto alalkaloids(RCDTA)；protopine；membrane
separation；drugfunction
夏天无为罂粟科植物伏生紫堇Corydalis
decumbenS(Thunb．)Pers．的干燥块茎，是一种有
镇痉止痛、活血去瘀和降压行气功效的民间常用中
草药。目前临床上用于各种类型的高血压和其后遗
收稿日期：2004一11—28
基金项目：江西省重大科技攻关项目(赣科发计字[2002164号)
作者简介：朱才庆(1973一)，男，江西信丰人，工学博士，现为华东理工大学与江西省药物研究所联合培养博士后，研究方向为天然药物
有效成分的分离纯化。Tel：(0791)8105994E—mail：zhucqing@sohu．com
*通讯作者余华Tel：(0791)8106317Fax：(0791)8101739E—mail：jxyuhua@sina．eom
万方数据
HPLC法测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱中杂质
作者： 刘祥东， 梁琼麟， 罗国安， 王义明， 刘清飞， LIU Xiang-dong， LIANG Qiong-lin，
LUO Guo-an， WANG Yi-ming， LIU Qing-fei
作者单位： 刘祥东,LIU Xiang-dong(清华大学,化学系,北京,100084;江西中医学院,江西,南昌,330006)
， 梁琼麟,罗国安,王义明,刘清飞,LIANG Qiong-lin,LUO Guo-an,WANG Yi-ming,LIU Qing-
fei(清华大学,化学系,北京,100084)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(9)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200509013.aspx