全 文 ：·药剂与工艺·
葛根芩连汤不同配伍对葛根素含量的影响
戴开金 ,罗佳波 ,谭晓梅 ,吴昭晖
(第一军医大学 中药制剂研究重点实验室 ,广东 广州　 510515)
摘　要:目的　建立 HPLC测定葛根芩连汤各配伍组合中葛根素含量的方法 ,研究配伍对葛根素含量的影响。方法
采用 L8 ( 27 )正交设计及统计软件 SPSS10. 0统计分析 ,以 HPLC测定葛根素的含量。 结果　黄芩、黄连、甘草对方
中葛根素含量的影响差异不存在显著性 ,两两交互作用差异不具有显著性。 实验中观察到凡是黄连与葛根的配伍
组合中皆有沉淀产生 ,并且发现沉淀中含有一定量的葛根素。 结论　黄芩、黄连、甘草对葛根素的含量没有显著性
影响。 含黄连和葛根配伍煎液产生的沉淀中含葛根素可能与 pH值的改变有关。
关键词: 葛根芩连汤 ;配伍 ;葛根素 ;高效液相色谱
中图分类号: R283. 2; R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0506 03
Influence of various compatibilities on puerarin content in Gegen Qinlian Decoction
DAI Kai-jin, LUO Jia-bo, TAN Xiao-mei, WU Zhao-hui
( Key Labo rato ry of Pharmaceutical Resear ch o f TCM , First M ilitar y Medical Univ ersity , Guang zhou 510515, China)
Abstract: Object　 To set up the quantitative method for determining the puerarin in Gegen Qinlian
Decoction ( GQD) by RP-HPLC and to study the change of puera rin contents in va rious combinations of
GQD. Methods　 L8 ( 27 ) o rthogonal design and statistic analy sis ( SPSS 10. 0) w ere used, the puerarin con-
tents in the samples w ere determined by HPLC. Results　 Inf luence of Radix Scutellaria , Rhizoma Cop-
t idis and Radix Glycyrrhizae Preparata on the puera rin content in GQD was insigni ficant. And interactions
betw een two of three w ere insignificant too. In this experiment , pupera rin in the sedimentation was found
in the compatible decoction of Rhizoma Coptidis and Radix Puerariae. Conclusion　 The puerarin content
is not ma rkedly influenced by Radix Scutellaria , Rhizoma Coptidis and Radix Glycyrrhizae Preparata.
Maybe, the change of pH is relevant to the sedimentation in the compatible decoction contained Rhizoma
Copt idis. and Radix Puerariae
Key words: Gegen Qinlian Decoction ( GQD); compa tibili ty; puerarin; HPLC
　　葛根芩连汤由葛根、黄连、黄芩、甘草 4味药组
成 ,出自《伤寒论· 太阳篇》 ,有解表清里、升清止利
之功 ,经过长期临床应用 ,疗效显著。 该方配伍对主
要化学成分的影响研究报道较少 ,本实验主要研究
了配伍对葛根素含量的影响 ,并对加入黄连和葛根
所产生的沉淀物进行了分析 ,为从事该方的研究提
供一些参考资料。
1　仪器与试药
　　美国惠普 HP-1100高效液相色谱仪 , G1315A
紫外-可见光二级管阵列检测器 ; 410A型 pH计 (美
国 ORION ) ;甲醇 (分析纯、色谱纯 ) ,乙腈 (色谱
纯 ) ;葛根素对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;葛
根、黄芩、黄连、甘草药材由广东省药材公司提供 ,经
本校中药鉴定教研室刘传明讲师鉴定 ,分别为豆科
植物野葛 Pueraria lobata Ohw i,唇形科植物黄芩
Scutellaria baicalensis Geo rgi干燥根茎 ,毛茛科植
物黄连 Coptis chinensis Franch. 干燥根茎 ,豆科植
物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 干燥根茎 (经
蜜制 )。
2　方法与结果
2. 1　葛根芩连汤中葛根素含量测定方法的建立 [1, 2 ]
2. 1. 1　色谱条件: 色谱柱: Zorbax SB-C18柱 ( 250
mm× 4 mm, 5μm);流动相: 甲醇 -乙腈 -水 ( 12∶
8∶ 80) ;流速: 1. 0 mL /min;柱温:室温 ;检测波长:
250 nm。色谱图见图 1。
2. 1. 2　标准曲线: 精密称取葛根素对照品约 10
mg ,置 50 mL容量瓶中 ,加流动相溶解 ,定容制成
对照品溶液。精确吸取溶液 0. 5, 1, 2, 4, 6, 8 mL于
10 mL容量瓶中 ,用流动相定容。以浓度对峰面积进
行线性回归 ,得到方程: Y= 38. 745 2X - 2. 184 5,
·506· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-09-23基金项目:国家自然科学基金面上重点项目 ( 39970886)
1-葛根素　 2-葛根芩连汤　 3-葛根芩连汤沉淀物　 4-缺葛根阴性
1-puerarin　 2-GQD　 3-GQD sedimentation
4-sam ple wi th out Rad ix Puerar iae
图 1　HPLC色谱图
Fig. 1　HPLC chromatograms
r= 0. 999 9。 结果表明葛根素在 10. 01～ 160. 16
μg /mL线性关系良好。
2. 1. 3　供试品溶液及缺葛根阴性液的制备 [3 ]: 按处
方配比取葛根芩连汤各味药 (葛根 15 g ,黄芩 9 g ,
黄连 9 g ,甘草 6 g )饮片 3份及缺葛根阴性 3份 ,
加水 400 mL,先煎葛根 20 min,余药共煎 30 min,
煎两次 ,趁热粗过滤 ,合并滤液。 90℃ 定容至 1 000
m L,取 10 mL,放冷 ,加甲醇 35 mL,超声 10 min,
过滤 ,用相同比例醇水溶液洗涤 ,定容至 50 mL。取
5 mL水浴蒸干 ,用流动相溶解 ,定容至 10 mL,膜过
滤 ,即得。 每个样品进样 3次 ,测定 ,计算得葛根素
含量为 0. 428 3 g /剂 , RSD为 2. 02% 。
2. 1. 4　精密度试验:取葛根素对照品溶液重复进样
5次 ,葛根素峰面积的 RSD= 0. 62% 。取全方样品
液重复进样 5次 ,葛根素峰面积的 RSD= 0. 99%。
结果表明 ,精密度较好。
2. 1. 5　稳定性考察:取葛根素对照品和样品液各一
份 ,在制备后 4, 8, 12, 16, 24 h测定葛根素的浓度 ,
其 RSD分别为 0. 18% , 0. 44%。 结果表明在 24 h
内溶液稳定。
2. 1. 6　回收率试验: 精密量取缺葛根阴性液 10
m L,置 50 mL量瓶中 ,加入葛根素对照品约 6 mg ,
按 2. 1. 3项下“加甲醇 35 mL……”起 ,同法制得供
试样品 ,进样 ,测定葛根素浓度 ,计算回收率。求得平
均回收率为 98. 97% , RSD= 0. 55% (n= 4)。
2. 2　配伍对葛根芩连汤中葛根素含量的影响: 以黄
芩、黄连、甘草为因素 ,用药和不用药为水平 ,采用
L8 ( 2
7
)正交表设计试验 ,因素水平及结果见表 1, 2。
　　采用 SPSS10. 0统计分析软件 ,结果表明在
0. 05水平下 ,黄连、黄芩、甘草对葛根素含量的影响
差异无显著性 (P 值分别为 0. 208、 0. 506、 0. 208) ,
且两两交互作用影响差异也不显著。
表 1　因素水平表
Table 1　 Factors and levels of orthogonal design
水平 因　　　　素
A黄芩 B黄连 C甘草
1 用药 用药 用药
2 不用药 不用药 不用药
表 2　 L8 ( 27 ) 正交设计及结果
Table 2　 L8 ( 27 ) orthogonal design and result
试验
次数 A B A× B C A× C B× C 空白
葛根素含量
/( g· 剂 - 1 )
1 1 1 1 1 1 1 1 0. 435 6
2 1 1 1 2 2 2 2 0. 437 1
3 1 2 2 1 1 2 2 0. 463 4
4 1 2 2 2 2 1 1 0. 450 8
5 2 1 2 1 2 1 2 0. 445 6
6 2 1 2 2 1 2 1 0. 446 6
7 2 2 1 1 2 2 1 0. 476 1
8 2 2 1 2 1 1 2 0. 440 6
2. 3　含黄连、葛根煎液的 pH值及沉淀物中葛根素
的含量测定:在实验过程中发现凡含黄连和葛根的
各配伍均有沉淀产生 ,故对沉淀进行考察。各配伍药
液的煎法按 2. 1. 3项下至“……合并滤液” ,滤液放
冷 ,离心 ,用 pH计测上清液 pH值。 沉淀用水洗 3
次 , 60℃ 干燥至恒重 ,研细称重 ,精确称取约 0. 05
g ,甲醇 40 m L超声提取 0. 5 h,过滤 ,洗涤 3次 ,定
容至 50 mL,取 5 mL吹干 ,加流动相溶解 ,定容至
10 mL,微孔滤膜过滤 ,测定 ,结果见表 3。
表 3　配伍溶液 pH值及沉淀中葛根素的含量
Table 3　 pH of compatible decoctions and
puerarin content in sedimentat ion
配伍组合 pH值 葛根素含量 /( g· 剂 - 1)
葛根 5. 23 < 0. 001
黄连 3. 73 -
黄连+ 葛根 4. 39 0. 020
黄连+ 黄芩+ 葛根 4. 36 0. 029
黄连+ 葛根+ 甘草 4. 15 0. 072
葛根芩连汤 4. 25 0. 031
　　从表 3可以看出 , p H值从低到高的顺序为: 黄
连煎液的 pH值 <含黄连、葛根配伍煎液的 pH值
<葛根单煎液的 pH值。 含葛根与黄连配伍的煎液
沉淀物中葛根素含量远大于葛根单煎液。
3　讨论
3. 1　实验结果表明黄连与葛根合煎产生沉淀 ,并且
发现沉淀中含有一定量的葛根素 ,约占煎液中葛根
素总量的 5%～ 20% 。葛根素沉淀的原因可能是黄
连的存在导致合煎液的 pH值降低 ,降低了葛根素
的溶解度 ,从而在较低温 ( 90℃ 以下 )下析出。 亦
有可能是沉淀过程中的包合、夹带所致。产生沉淀的
·507·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
机制及沉淀物中是否含有新的物质、该物质是否具
有药理作用有待进一步的研究。
3. 2　本实验采用正交设计及统计软件对该方进行
实验设计及分析 ,结果表明 ,在 0. 05水平下 ,黄芩、
黄连、甘草对葛根素的含量的影响差异无显著性 ,说
明黄芩、黄连、甘草在该汤中对葛根素的含量没有影
响 ,但是由于黄连与葛根合煎能产生沉淀 ,因此在制
剂过程中要加以注意。
3. 3　在本实验中所采用的高效液相色谱条件下 ,各
配伍煎液中没有发现新物质的色谱峰。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. Vol I.
[ 2 ]　 Wu Z H, Tan X M, Luo J B. Determination of puerarin in
Gegen Qinlian Micropi ll by HPLC [ J] . Chin J Exp Tradi t
Med Form (中国实验方剂学杂志 ) , 1999, 5( 6): 10-12.
[ 3 ]　 Fan B T. Pharmacy of TCM (中药药剂学 ) [M ]. Shanghai:
Shanghai Science and Tech nology Publis hers, 1999.
止眩颗粒剂的提取工艺研究
文红梅 1 ,李　伟 1 ,彭国平 1 ,朱　荃 1 ,张正行 2
( 1. 南京中医药大学 ,江苏 南京　 210029; 2. 中国药科大学 ,江苏 南京　 210009)
摘　要: 目的　优选止眩颗粒剂的制备工艺。方法　以 23-乙酰泽泻醇 B、白术内酯Ⅰ 提取率和固形物得率为指标 ,
采用正交试验法对止眩颗粒剂的提取工艺进行优选 ,并以小鼠镇静作用的药效学验证。 结果　优化工艺为: 泽泻、
白术先以 12倍量 70% 乙醇分 2次回流提取 ,每次 2 h;再以 14倍量水分 2次煎煮 ,每次 2 h。提取物对小鼠有明
显的镇静作用。 结论　该工艺合理 ,有效成分提取效率高。
关键词: 止眩颗粒剂 ;正交试验 ; 23-乙酰泽泻醇 B;白术内酯Ⅰ ;镇静作用
中图分类号: R284. 2; R286. 02; R286. 13　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0508 03
Study on extraction technology of Zhixuan Granula
W EN Hong-mei
1 , L I W ei
1 , PENG Guo-ping
1 , ZHU Quan
1 , ZHANG Zheng-xing
2
( 1. Nanjing Univ ersity o f TCM , Nanjing 210029, China; 2. China Pharmaceutica l Univ er sity , Nanjing 210009, China )
Abstract: Object　 To optimize the preparation procedure for Zhixuan Granula ( ZXG) . Methods　
The optimum ex tracting conditions o f ZXG were selected by o rthogonal test wi th the activ e components:
23-acetate alisol B, at ractyleno lide I, and dried ex t ract as the index, i t mice sedation o f ZX G was clarified
by pha rmacodynamics. Results　 The optimum prepa ra tion procedure w as as follows: Rhizoma Alismatis
and Rhizoma Atractylodis Macrocephalae were ex t racted w ith alcohol fi rst , adding 12-fold 70% alcohol by
ref lux ing , ex t racting tw ice, 2 h once, then ex t racted w ith w ater, adding 14-fold w ater, ex tracting tw ice,
2 h once. The ex t ract show ed the obvious ef fect on sedation of mice. Conclusion　 The optimum prepara-
tion procedure is reliable, wi th high er ex t racting ratio of the activ e components.
Key words: Zhixuan Granula ( ZX G) ; o rthogonal test; 23-aceta te aliso l B; at ractylenolide I; sedation
　　止眩颗粒剂处方源于《金匮要略》中的“泽泻
汤” ,由泽泻和白术两味中药组成。具利水除饮、健脾
制水之功 ,用于饮停心下、头目眩晕、胸中痞满、咳逆
水肿等症。由于泽泻中含有泽泻醇类物质 ,该类成分
具有利水渗湿作用 ,与泽泻主要药效相吻合 ;白术中
含有白术内酯类成分 ,该类成分与泽泻汤的健脾制
水的功效相吻合。 又考虑到两味药的水提液中富含
多糖、氨基酸等成分。 因此 ,本实验采用正交试验法
设计先醇提再水煎工艺 ,以泽泻、白术的活性成分为
指标 ,再通过药效学试验验证 ,优化出泽泻、白术共
煎的最佳工艺。
1　实验材料
　　泽泻购于福建省药材公司 ,经本校中药鉴定教
研室王春根教授鉴定 ,为泽泻科植物泽泻 Alisma
orientale ( Sam. ) Juzep. 的干燥块茎。 白术购于浙
江省磐安县药材公司 ,经鉴定为菊科植物白术 A-
tractylodes macrocephala Koidz. 的干燥根茎 ,符合
《中华人民共和国药典》标准。
·508· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-12-13基金项目:国家中医药管理局青年基金项目 ( 97Y014)作者简介:文红梅 ( 1965— ) ,女 ,山东蓬莱人 ,副教授 ,中国药科大学 2000级博士生 ,从事药物分析研究。 Tel: ( 025) 6798188