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板蓝根有效部位对脂多糖致小鼠血清中 TNFα和 NO的影响
刘云海 ,林剑国 ,雷　婷⒇
(华中科技大学同济医学院附属同济医院 药学部 ,湖北 武汉　 430030)
摘　要: 目的　探讨板蓝根有效部位小鼠体内对脂多糖刺激产生 TN Fα和 NO的影响。方法　从板蓝根中提取分离
出有效部位并配制成 2% , 1% , 0. 5% 三种浓度的样品液 ;将用卡介苗致敏的小鼠随机分为 5组 ,实验组分别 ig
2% , 1% , 0. 5% 样品液各 0. 4 mL ,对照组和模型组给予相同量生理氯化钠溶液 ; 0. 5 h 后 ,实验和模型组分别尾 iv
脂多糖 800 ng /20 g , 9 h后眼眶取血 ,制备血清 ,用 ELISA法测 TN Fα,用 Griess法测 NO浓度。结果　板蓝根有
效部位高、中、低 3种样品液对脂多糖刺激小鼠释放 TN Fα和 NO均有抑制作用 ,抑制率分别为 83. 59% , 67. 92% ,
21. 61% ,对 NO抑制率分别为 98. 66% , 70. 77% , 20. 33%。 结论　板蓝根有效部位对脂多糖刺激小鼠体内释放
TN Fα和 NO有抑制作用 ,且有剂量依赖性。
关键词: 板蓝根有效部位 ;内毒素 ;肿瘤坏死因子 ( TNFα) ;一氧化氮 ( NO )
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 02 0152 03
Effect of active part from Radix Isatidis on content of TNFα
and NO induced by LPS in mice serum
LIU Yun-hai, LIN Jian-guo , LEI Ting
( Depa rtment o f Pharmacy, Tong ji Hospital o f Tong ji Medical Co lleg e, Hua zhong Univ ersity
o f Science and Tech no lo gy , Wuhan 430030, China )
　　Key words: activ e pa rt f rom Radix Isatidis; endotoxin; TN Fα; NO
　　细菌内毒素 ( endotoxin, ET)是革兰阴性菌细
胞外膜中的脂多糖 ( lipopo saccha ride, LPS)成分 ,
可刺激机体防御系统过度释放炎性因子——肿瘤坏
死因子 ( TN Fα) 及一氧化氮 ( NO )等 ,引起发热、
弥漫性血管内凝血 ( DIC)、多器官功能衰竭 ,以至死
亡。近年来的研究发现 ,β -内酰胺类抗生素可导致体
内 ET增加 [1 ] ,铜绿假单胞菌败血症的病死率仍高
达 80%～ 90% [2 ] ,并不因没有使用足量的敏感抗菌
药 ,而是因至今没有理想的抗内毒素药物。 板蓝根
( BLG)抗内毒素作用已有报道 [3～ 5] ,为了寻找 BLG
抗 ET活性物质 ,我们将其分成不同极性部位 ,用体
内外多种实验方法筛选出抗 ET活性最强的有效部
位 [6 ] ,本研究探讨该部位在小鼠体内对 LPS刺激释
放 TN Fα和 NO的影响。
1　材料与仪器
1. 1　板蓝根有效部位样品液制备:板蓝根 (产于河
北省邢台县 ,经邢台市药材公司鉴定为十字花科植
物菘蓝 Isatis indigotica fo rt的干燥根 ) 粉碎成细
粉 ,用 95% 乙醇浸泡后按常规方法渗漉提取 ,减压
浓缩至无醇味 ;用石油醚反复萃取至除尽石油醚部
·152· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
⒇收稿日期: 2002-08-02基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 39870872) ;卫生部科学研究基金资助项目 ( 98-2-110)作者简介:刘云海 ( 1942— ) ,男 ,江苏如东人 ,主任药师 , 1965年毕业于中国药科大学药学专业 ,多年来一直从事医院药学工作。
E-mai l: yh liu@ tjh. t jmu. ed u. cn
位 ,继用氯仿反复萃取得氯仿提取物 (得率
0. 8% );用硅胶进行柱层析 ,用氯仿和甲醇不同比例
溶剂作梯度洗脱 ,得板蓝根有效部位 (得率
0. 31% );用适当助溶剂 ,将此部位配制成 A ( 2% ) ,
B ( 1% ) , C ( 0. 5% ) 3种样品液 ,备用。
1. 2　动物:昆明种小鼠 , 3周龄 , 18～ 20 g ,华中科
技大学同济医学院医学实验动物中心提供。
1. 3　试剂:脂多糖 ( LPS, E. Coli O26B6 , 5 mg /支 ,
Sigma公司 ,批号 69H4022) ;卡介苗 ( BCG, 50 mg /
支 ,上海生物制品研究所 ,批号 990901,使用前用注
射用水稀释成 5 mL) ; TN Fα试剂盒 (北京邦定泰克
生物有限公司 ) ; N -1萘乙二胺盐酸盐 (分析纯 ,天
津化学试剂研究所 ) ; NaNO2 (西德进口 ,湖北大学
化工厂分装 ) ;对氨基苯磺胺 (分析纯 ,北京芳草医
药化工研究公司 )。
1. 4　仪器: M K3型酶联免疫检测仪 ( Labsyster n
Dragon公司 ) ; 1815TC型 CO2培养箱 ( Shel-Lab公
司 )。
2　实验方法
2. 1　血清样品制备: 取 30只小鼠 ,每只 ip BCG 3
mg,实验前 12 h禁食不禁水。 实验时 ,将小鼠随机
分为 5组 ,每组 6只。实验组分别 ig给予 2% , 1% ,
0. 5% 样品液 0. 4 mL,对照和模型组给生理氯化钠
液。 ig后 0. 5 h,实验和模型组每只小鼠分别尾 iv
LPS 800 ng /20 g , 9 h后 ,乙醚麻醉 ,眼眶内取血 ,取
血清于 - 20℃ 贮存备用。
2. 2　 TN Fα检测 ;用 ELISA法 ,按试剂盒说明书操
作要求进行 ,在抗人细胞因子单抗包被的酶标板上
加入系列浓度标准品溶液及 100μL待测鼠血清样
品 ,同时设空白对照 (双管法 ) , 37℃ 作用 60 min
后加入 TMB底物液显色 15 min,于 450 nm波长
处测吸光度 ( A ) 值 ,绘制标准曲线 ,结果在 10～
1 000 pg /m L呈线性关系 ,各血清样品按标准曲线
计算 TN Fα浓度。
2. 3　 NO含量测定: 用 Griess试剂法。 精密称取
NaNO2 1 g于 100 mL容量瓶中 ,加水溶解 ( 10mg /
mL) ;再精密量取 1 mL加水至 100 mL ( 100μg /
mL) ;再分别取适量稀释得到系列溶液 ;各取 50
μL,分别加 Griess液 (含 1% 对氨基苯磺胺、 0. 1%
N -1萘乙二胺盐酸盐、 2. 5% 磷酸 ) 50μL,室温放
置 10 min,于酶联免疫测定仪上 550 cm处测定各
孔 A 值 ,绘制标准曲线 ,结果在 1～ 100μg /mL呈
线性关系。 鼠血清样品 50μL加入等体积 Griess
液 ,同法检测 ,由标准曲线计算 NO浓度。
3　结果
　　小鼠经板蓝根有效部位不同浓度处理后再给予
同等剂量 LPS,其血清中 TN Fα和 NO浓度及抑制
百分率见表 1。抑制百分率按如下公式计算 [7 ]:
抑制百分率% = [ 1- (样品组 -空白对照组 ) /(模型
组- 空白对照组 ) ]× 100%
表 1　板蓝根有效部位对 LPS致小鼠血清 TNFα和 NO的影响 ( n= 6)
Table 1　 Ef fect of active part from Radix Isatidis on level of TN Fα and NO induced by LPS in mice serum (n= 6)
组别 浓度 /% LPS / ( ng· 20g- 1) TN Fα / ( pg· mL- 1) 抑制百分率 /% NO / (μg· mL- 1) 抑制百分率 /%
板蓝根 2 800 　 159. 1± 18. 4* * 83. 59 　 7. 8± 1. 7* * 98. 66
1 800 270. 3± 14. 6* 67. 20 26. 6± 12. 2* 70. 77
0. 5 800 606. 1± 72. 2 20. 61 60. 6± 6. 8 20. 33
模型　 - 800 752. 4± 222. 8 - 74. 3± 24. 3 -
对照　 - - 42. 6± 20. 9* * - 6. 9± 2. 5* * -
　　　　与模型组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
　　　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs model g rou p
　　由表可见 ,板蓝根有效部位对 LPS刺激小鼠体
内释放 TN Fα和 NO有抑制作用 ,其抑制率在浓度
2% ～ 0. 5% 呈剂量依赖性。
4　讨论
　　 TN Fα在 LPS感染性休克发病过程中的作用正
在得到越来越多的证实 ,抗 TN Fα的一些防治措施
将成为 LPS感染性休克防治的重要途径。
NO在 LPS引起脏器损伤中的作用越来越引
起重视 ,体内大量 NO释放是导致内毒素休克、低
血压及多脏器功能衰竭的主要因素之一。 NO的大
量释放可通过与超氧阴离子结合成氧化亚硝基阴离
子而对器官组织造成损伤。在内毒素引起的休克和
多脏器功能衰竭中 ,阻止 NO大量释放可防止其造
成低血压及减轻其导致的组织氧化性损伤。
小鼠对内毒素敏感性低 ,用 BCG增敏后 ,可使
LD50由 20 mg /kg降至 5 mg /kg以下 [ 8] ,本实验按
3 mg /只给予 ,增敏效果明显。
板蓝根有效部位体外对 LPS致炎性因子的影
响已有报道 [6 ]。本研究结果提示 ,板蓝根有效部位能
明显抑制 TN Fα和 NO产生 ,可能对 LPS引起的组
·153·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
织损伤起到保护作用。 该研究结果进一步论证了以
前对板蓝根的研究结论 [9, 10 ] ,该部位可用作板蓝根
抗内毒素活性物质的开发研究。
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复方玄驹胶囊免疫调节和抗炎作用的研究
贾　伟 1 ,薛　京 2 ,王永新 2 ,霍海如 3⒇
( 1. 天津大学药物科学与技术学院 ,天津　 300072; 2. 沃芬 (天津 )药业有限公司 ,天津　 300100; 3. 中国中医研究院中药研
究所 ,北京　 100700)
摘　要: 目的　观察复方玄驹胶囊的免疫调节和抗炎作用。 方法　采用小鼠或大鼠的致敏、致炎等模型 ,观察和研
究复方玄驹胶囊对动物免疫功能的影响以及对实验动物的抗炎作用。结果　复方玄驹胶囊可显著抑制小鼠腹腔毛
细血管通透性的增高以及羧甲基纤维素刺激诱发的腹腔渗出液量及其白细胞数增加 ;抑制巴豆油致小鼠耳水肿以
及棉球肉芽组织的形成 ;对小鼠的网状内皮系统吞噬功能及小鼠迟发性过敏反应有明显的抑制作用。 结论　复方
玄驹胶囊具有免疫调节作用和抗炎的作用。
关键词: 复方玄驹胶囊 ;动物炎症模型 ;类风湿关节炎 ;免疫
中图分类号: R286. 95　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 02 0154 04
Study on immunoregulatory and anti-inflammatory effects of Compound Xuanju Capsule*
JIA Wei
1 , X UE Jing
2 , WANG Yong-xin
2 , HUO Hai-ru
3
( 1. Colleg e o f Pharmaceutica l Science and Technolog y , Tianjin Univ ersity, Tianjin 300072, China;
2. Walfen Pharmaceutical Co. , L td. , Tianjin 300100, China; 3. Institute
o f Chinese Ma teria Medica , C ATCM , Beijing 100700, China )
Key words: Compound Xuanju Capsule ( CX JC) ; models of experimental inflammation; rheuma toid
a rthriti s; immuno logy
* Compound Xuanju Capsule is a Chinese herb preparation wi th Herba Epimedii , Fructus Lycii , Fruc-
tus Cnidii , and ex t ract tog ether. It has the function of expelling w ind and remov ing dampness, removing
obst ruction in the channels to reliev e pain, nourishing th e liv er and the kidney , and tranqui li zing and allay-
ing excitement.
　　目前临床上治疗类风湿关节炎所使用的抗炎镇
痛药物均有一定程度的毒副作用 ,对于需要长期服
药的类风湿关节炎等慢性炎症病人 ,这样的药物副
作用尤为明显。 近年来国内治疗类风湿的中药研究
受到重视 ,为此我们开展了这方面的新药研究 ,结果
表明蚂蚁的乙醇提取物与其他中药如淫羊藿、枸杞
·154· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
⒇收稿日期: 2002-06-05作者简介:贾　伟 ( 1965— ) ,男 ,美国密苏里大学硕士、博士 ,现为天津大学药物科学与技术学院教授 ,从事新药开发 ,药物制剂学方面的研究。 Tel: ( 022) 87402022; E-mai l: walfena@ publie. tp t. tj. cm