全 文 ：复方积雪草颗粒提取工艺研究
李阳春 1, 2 ,孙静芸 2* ,姚新生 1
( 1. 沈阳药科大学中药学院 ,辽宁 沈阳　 110016; 2. 浙江省中医药研究院 ,浙江 杭州　 310007)
摘　要: 目的　研究复方积雪草颗粒最佳提取工艺。 方法　采用正交试验法进行优选 , HPLC法测定积雪草苷、黄
芪甲苷的含量。结果　乙醇浓度、溶媒量、提取时间、提取次数对积雪草苷、黄芪甲苷提取率均有显著影响。结论　
最佳提取工艺为药材 10倍量 50%乙醇 ,提取 2次 ,每次 3 h。
关键词: 复方积雪草颗粒 ;正交试验 ;积雪草苷 ;黄芪甲苷 ;高效液相色谱
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0903 03
Investigation on extracting process for Compound Jixuecao Granula
*
LI Yang-chun
1, 2 , SUN Jing-yun
2 , YAO Xin-sheng
1
( 1. Schoo l o f Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical Univ er sity , Shenyang 110016, China;
2. Zh ejiang Academy o f TCM , Hang zhou 310007, China)
Key words: Compound Jixuecao Granula; orthogonal test; asiaticoside; ast rag alosideⅣ ; HPLC
* Compound Jixuecao Granula is a Chinese prescri tio n made of Herba Centellae, Radix Astragal i , Se-
men Persicae , etc. It i s used in the t rea tment of the disease of urina ry and immune sy stems.
　　复方积雪草颗粒为医院制剂 ,由积雪草、黄芪、
桃仁等药材组成 ,用于泌尿系统及免疫系统等疾病 ,
特别在治疗肾脏纤维化方面疗效较好。积雪草为伞
形科植物积雪草 Centella asiatica ( L. ) Urb.的干燥
全草 ,有清湿热、解热消肿的功能。主要含积雪草苷
( asiaticoside)、羟基积雪草苷 ( madecassoside)等三
萜皂苷类化合物 [1 ]。 黄芪为豆科植物蒙古黄芪 As-
t ragalus membranaceus ( Fisch. ) Bge. v ar.
monghol icus ( Bge. ) Hsiao的干燥根 ,有补气固表、
利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能。主要含有黄芪甲
苷、黄芪苷、异黄芪苷等三萜皂苷类化合物和黄酮、
多糖等 [2 ]。两者的有效成分均易溶于水 ,故考虑将两
者合并提取。 本研究以积雪草苷和黄芪甲苷为考察
指标 ,采用正交试验法优选提取工艺的最佳条件 ,为
生产提供依据。
1　材料与仪器
积雪草由浙江昌化药材公司提供 (浙江产 ) ,黄
芪由甘肃省定西县中国药材公司提供 (甘肃产 ) ,经
杭州市药品检验所鉴定积雪草为伞形科植物积雪草
C . asiat ica ( L. ) U rb.的干燥全草 ,黄芪为豆科植
物蒙古黄芪 A. membranaceus ( Fisch. ) Bge. v ar.
monghol icus ( Bge. ) Hsiao的干燥根。积雪草苷对照
品 (批号 877-9901)、黄 芪甲 苷 对照 品 (批 号
07819807)均由中国药品生物制品检定所提供。 甲
醇、乙腈为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯。
日本岛津 LC— 10AT高效液相色谱仪 , SPD—
10A检测器。
2　方法与结果
2. 1　试验因素水平:设定乙醇浓度 ( A)、提取时间
( B)、溶媒量 ( C)、提取次数 ( D) 4因素 3水平 (表 1)。
表 1　因素水平表
Table 1　 Factors and levels
水平 因　　素
A /% B /h C /倍 D/次
1 30 1 6 1
2 50 2 8 2
3 70 3 10 3
2. 2　积雪草苷测定
2. 2. 1　色谱条件 [3 ]: 色谱柱为 Fupelco si lTM LC—
18— DB ( 15 cm× 4. 5 cm, 5μm) ,柱温为室温 ,流动
相为甲醇 -水 ( 55∶ 45) ,流速为 1 mL /min,检测波长
为 204 nm。在此条件下 ,供试品中积雪草苷峰与其
他峰能达到基线分离 ,积雪草苷色谱峰的保留时间
约为 13. 5 min。
2. 2. 2　线性关系考察: 精密称取积雪草苷对照品
·903·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2003-02-21作者简介:李阳春 ( 1975— ) ,女 ,浙江东阳人 ,浙江中医学院讲师 , 1997年在沈阳药科大学获学士学位 ,现为沈阳药科大学 2001级在职硕士研究生 ,主要研究方向为天然药物化学。 Tel: ( 0571) 86613601
* 通讯作者　 Tel: ( 0571) 88082214-3210
2. 4 mg ,加甲醇制成 0. 48 mg /mL的溶液 ,作为对
照品溶液。精密吸取上述对照品溶液 1, 5, 10, 15, 20
μL,注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条件测定峰
面积。以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标作线性回
归 ,回归方程为 Y = 95 404. 4X - 4 721. 6, r =
0. 999 92。表明积雪草苷进样量在 0. 48～ 9. 6μg与
峰面积呈良好的线性关系。
2. 2. 3　供试品测定方法: 每份回流提取液滤过 ,滤
液蒸干 ,残渣用甲醇溶解并定容至 50 mL,分别精密
吸取 2 mL,稀释至 10 mL,微孔滤膜 ( 0. 45μm)滤
过 ,滤液作为供试品溶液。 取 10μL进样测定。
2. 2. 4　精密度试验: 取供试品溶液按上述色谱条件连
续进样 5次 ,结果积雪草苷峰面积 RSD为 0. 40%。
2. 2. 5　重现性试验:按供试品测定方法 ,对同一批
供试品依法测定 5份 ,结果积雪草苷峰面积 RSD为
0. 76% 。
2. 2. 6　回收率试验:取已测知积雪草苷含量的供试
品 ,平行 5份 ,分别精密加入积草苷对照品 0. 35
mg,按含量测定方法操作 ,计算 5次平均回收率为
102. 7% , RSD为 2. 82% 。
2. 3　黄芪甲苷测定
2. 3. 1　色谱条件 [4 ]:色谱柱为 Shimadzu V P— ODS
( 150 mm× 4. 6 mm ) ,柱温为室温 ,流动相为乙腈 -
水 ( 1∶ 2) ,流速为 1 m L /min,检测波长为 200 nm。
在此条件下 ,供试品中黄芪甲苷与其他峰能达到基
线分离 ,黄芪甲苷色谱峰的保留时间约为 6. 6 min。
2. 3. 2　线性关系考察: 精密称取黄芪甲苷对照品
2. 2 mg ,加甲醇制成 0. 44 mg /mL的溶液 ,作为对
照品溶液。精密吸取上述对照品溶液 1, 5, 10, 15, 20
μL,注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条件测定峰
面积。以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标作线性回
归 ,回归方程为 Y = 19 794. 37X + 734. 84, r =
0. 999 6。表明黄芪甲苷进样量在 0. 44～ 8. 8μg与
峰面积呈良好的线性关系。
2. 3. 3　精密度试验:取供试品溶液按上述色谱条件连
续进样 5次 ,结果黄芪甲苷峰面积 RSD为 0. 55% 。
2. 3. 4　重现性试验: 按供试品测定方法 ,对同一批
供试品依法测定 5份 ,结果黄芪甲苷峰面积 RSD为
0. 83%。
2. 3. 5　回收率试验:取已测知黄芪甲苷含量的供试
品 ,平行 5份 ,分别精密加入黄芪甲苷对照品 0. 25
mg ,按含量测定方法操作 ,计算 5次平均回收率为
98. 2% , RSD为 2. 34%。
2. 3. 6　供试品测定方法: 同 2. 2. 3项 ,取供试品溶
液 10μL进样 ,测定。
2. 4　正交试验结果与分析:以积雪草苷、黄芪甲苷
为指标 ,按 L9 ( 34 )正交设计安排试验。 每份取积雪
草、黄芪粗粉各 50 g ,回流提取。由于无空白列 ,做了
重复试验。结果见表 2。方差分析见表 3, 4。
　　直观分析结果表明 ,以积雪草苷为评价指标 ,影
响因素的大小顺序为 A> B> C> D;以黄芪甲苷为
评价指标 ,影响因素的大小顺序为 A> C> B> D。方
差分析结果表明 ,以积雪草苷、黄芪甲苷为考察指
标 ,因素 A, B, C, D差异均有显著性。以积雪草苷为
考察指标 ,最佳工艺条件为 A2 B3 C2D2 ;以黄芪甲苷
为考察指标 ,最佳工艺条件为 A3 B1 C3D2。 鉴于积雪
草为处方中君药 ,对试验结果综合考虑结果 ,以
A2 B3 C3D2 ,即加 10倍量的 50%乙醇 ,提取两次 ,每
次 3 h为复方积雪草颗粒的最佳提取工艺。
2. 5　最佳工艺验证试验:取积雪草、黄芪各 100g ,
表 2　 L9 ( 34 )正交试验结果
Table 2　 Results of L9 ( 34 ) orthogonal test
试验号 A B C D 积雪草苷 /%
X 1 X 2 X
黄芪甲苷 /%
Y1 Y2 Y
1 1 1 1 1 0. 155 0. 149 0. 304 0. 102 0. 101 0. 203
2 1 2 2 2 0. 188 0. 176 0. 364 0. 151 0. 142 0. 293
3 1 3 3 3 0. 231 0. 233 0. 464 0. 142 0. 146 0. 288
4 2 1 2 3 0. 366 0. 348 0. 714 0. 261 0. 257 0. 518
5 2 2 3 1 0. 323 0. 336 0. 658 0. 216 0. 209 0. 425
6 2 3 1 2 0. 384 0. 373 0. 757 0. 226 0. 234 0. 460
7 3 1 3 2 0. 252 0. 249 0. 501 0. 405 0. 385 0. 790
8 3 2 1 3 0. 156 0. 162 0. 318 0. 095 0. 092 0. 187
9 3 3 2 1 0. 310 0. 325 0. 635 0. 210 0. 221 0. 431
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
积雪草苷
1. 132 1. 519 1. 379 1. 597
2. 129 1. 340 1. 713 1. 622
1. 454 1. 856 1. 623 1. 490
0. 997 0. 516 0. 334 0. 132
黄芪甲苷
0. 784 1. 511 0. 850 1. 059
1. 403 0. 905 1. 242 1. 543
1. 408 1. 179 1. 503 0. 993
0. 724 0. 606 0. 653 0. 550
·904· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
表 3　以积雪草苷为指标方差分析表
Table 3　 Var iance analysis with asiaticoside as marker
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 　 0. 086 2 0. 043 774 P < 0. 01
B 0. 023 2 0. 012 207 P < 0. 01
C 0. 01 2 0. 005 90 P < 0. 01
D 0. 001 5 2 0. 008 13. 5 P < 0. 01
误差 Se 0. 000 5 9 0. 000 06
　　F 0. 05 ( 2, 9)= 4. 26　F 0. 01 ( 2, 9)= 8. 02
表 4　以黄芪甲苷为指标方差分析表
Table 4　 Var iance analysis with astragalosideⅣ as marker
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 　 0. 043 2 0. 021 5 483. 75 P < 0. 01
B 0. 031 2 0. 015 5 348. 75 P < 0. 01
C 0. 036 2 0. 018 405. 00 P < 0. 01
D 0. 030 2 0. 015 337. 50 P < 0. 01
误差 Se 0. 000 4 9 0. 000 04
　　F 0. 05 ( 2, 9)= 4. 26　F 0. 01 ( 2, 9)= 8. 02
按最佳工艺条件进行提取 (n= 3) ,提取液滤过 ,滤液
蒸干 ,残渣用甲醇溶解并定容至 100 mL,分别精密
吸取 2 mL,稀释至 10 mL, 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,
滤液作为供试品溶液。分别采用 HPLC法按前述色
谱条件测定积雪草苷、黄芪甲苷含量 ,结果积雪草苷
转移率为 65. 2% ,黄芪甲苷为 56. 1%。
3　讨论
　　提取溶剂浓度选择是根据积雪草苷、黄芪甲苷
的理化性质 ,分别以水 , 40% , 70% , 95%乙醇溶液 8
倍量 ,提取两次 ,每次 2 h。供试品经处理后 ,以积雪
草苷、黄芪甲苷对照品为对照 ,采用 T LC法 [ 2 ] ,定量
点样 ,以氯仿-甲醇 -水 ( 13∶ 7∶ 2)的下层溶液为展
开剂 , 10%硫酸乙醇溶液显色 ,结果 40% ～ 60%乙
醇斑点明显 ,故设定 30% , 50% , 70%乙醇为提取
溶剂。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
[2 ]　 Zheng H Z. Modern Stud y and App lication of Chinese Materia
Medica (中药现代研究与应用 ) [M ]. Vol Ⅰ . Bei jing:
Xueyuan Pres s, 1997.
[3 ]　 Chen Y, Jiang Y. Determination of asiaticoside and made-cas-
soside inCentel la asia tica ( L. ) Urban by RP-HPLC [ J] . Chin
Tra dit Pat Med (中成药 ) , 2000, 22( 3): 227-228.
[4 ]　 Sh a S Y, Xu L S. The Analysis Method of Ef f ect ive Con-
st ituents in Ch inese Mater ia Med ica (中草药有效成分分析法 )
[M ] . Bei jing: People s M edical Publi shing House, 1997.
强极性大孔吸附树脂对三七皂苷的分离纯化研究
欧来良 ,史作清* ,施荣富 ,王　重 ,王瑞芳
(南开大学 吸附分离功能高分子材料国家重点实验室 高分子化学研究所 ,天津　 300071)
摘　要: 目的　探索一种高效、实用的分离纯化三七皂苷的技术。 方法　根据三七皂苷的结构特征 ,选用强极性吸
附树脂 ADS-2,并对 ADS-2树脂的吸附性能进行了系统研究。 采用 HPLC法对产品中人参皂苷 Rg1 , Re, Rb1和三
七皂苷 R1进行了测定。 结果　 ADS-2树脂对三七皂苷具有较高的吸附选择性 , 50%乙醇作为脱附剂 ,产品中有效
成分含量为: 人参皂苷 Rg1 31. 7% , Re 5. 40% , Rb1 5. 79% ,三七皂苷 R1 29. 7% ,产率为 7. 75%。结论　大孔 ADS-
2吸附树脂对三七皂苷的分离纯化简单、高效 ,易于工业化生产。
关键词: ADS-2吸附树脂 ;三七皂苷 ;吸附分离
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0905 03
Studies on separation and purification of saponins fromPanax notoginseng
with strongly polar macroporous adsorption resin
OU Lai-liang, SHI Zuo-qing, SHI Rong-fu, W ANG Zhong, WANG Rui-fang
( Sta te Key Labo ra tor y o f Functional Po lymeric Materials for Adso rption and Sepa ration,
Institute of Polyme r Chemistr y, Nankai Univ er sity , Tianjin 300071, China)
Key words: ADS-2 po rous adso rption resin; saponins of Panax notoginseng ( Burk. ) F. H. Chen; ad-
sorption and sepa ra tion
　　三七为我国传统中药材 ,具有化瘀止血、活血定 痛之功效 ,主要含有皂苷、黄酮、甾醇、多糖等成分。
·905·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-10-29基金项目:国家自然科学基金资助项目 (29974015)
* 通讯作者　 Tel: ( 022) 23503935