全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 693·
致谢；天津中医学院中《实验室及范英昌等老
师的大力协助。
Rel锄％mf
[13PozarowskiP，HallekaDH．psrzykiev．dczZ．NF—kappaB
inhibitorsesquiterpeneparth nolideinducesoncurrently8
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人参花蕾皂苷对脑缺血一再灌注损伤大鼠的抗氧化作用及其机制
张丽君1，吕文伟2，王志2，金采日3，孙连坤2。
(1．延边大学医学院附属医院心内科，吉林延吉133000；2．吉林大学基础医学院．
吉林长春130021‘3．吉林大学化学院，吉林长春130021)
有研究表明脑缺血一再灌注损伤的发病机制中
氧自由基起着重要的作用o】。人参花和花蕾平时被
人们作为有益健康的中药加入到茶、洗发露中使用，
而不作为药物来使用。Yahara等[21在干燥的高丽参
的花和花蕾混合物中分离出20(S)人参皂苷Rd、Re
和Rg。，但它们的药理作用还不清楚。本实验探讨本
校化学教研室提取的人参花营皂苷(flower—buds
ginsenoside，FBG)是否具有减轻大鼠脑淤血一再灌
注损伤的作用，并通过观察脑皮质中脂质过氧化物
丙=醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)量的变
化及超氧化物歧化酶(sOD)活性和mRNA基因
的表达探讨其作用机制。
1材料
1．1试剂和药品：谷胱甘肽和GSH购于Sigma公
司。TBA、TCA和DTND购于Wako公司。人参花
营皂苷[FBG，古有20(s)一人参皂苷Rd7．2％、20
(s)一人参皂苷Re39．1％、20(Js)一人参皂苷Rg-
3．3％]由吉林大学化学中心提供。GSH、MDA和
soD检测试荆盒均由南京建成生物工程研究所
提供。
1．2实验动物：健康Wistar大鼠，体重(25士10)
g，雌雄不拘，由吉林大学实验动物中心提供，合格证
号SCXK一(吉)2003—2004。
2方法
2．1分组、给药及造模：大鼠32只，随机分为对照
组，模型组，FBG低、高剂量组，每组8只。FBG组
于造模前分别按25、50mg／kgip给予生理盐水溶
解的FBG，每天1次，持续7d。模型组和对照组大
鼠ip等量生理盐水。模型组和FBG组大鼠通过改
良的四血管结扎法啪进行10rain短暂脑缺血处理。
太鼠用50mg／kg戊巴比妥钠ip麻醉，椎动脉用电
烙术进行永久性封闭，颈动脉用尼龙和聚乙烯管制
的扣子结扎，尼龙和聚乙烯管制的扣子可通过细小
的皮肤切口进行放松和收紧。此后用30％O：和
70％Nz混合的三氟漠氯乙烷进行吸人性麻醉。左、
右侧颈动脉被同时收紧10rain，即大鼠缺血10rain
后，再放松，使脑动脉血流进行4h再灌注，观察大
鼠死亡率。另取32只大鼠，分组，造模及给药方法
同上，脑动脉血流再灌注1h后，过量戊巴比妥钠麻
醉处死大鼠，断头取脑皮质，冻于液氟中备用。
2．2脑皮质中MDA和GsH水平的测定：脑皮质
组织冰浴匀浆，分别根据试剂盒方法测定脑皮质匀
浆中GSH和MDA的水平、SOD活性及匀浆液中
总蛋白水平。
紫謇昌荠潆等署乞臻3一)，女。吉韩省九台市A，主精匿师，研究方向为心血管疾病诊断厦治疗。Td：(。4∞)266。224
*通讯作者孙连坤Telt(0431)5619483
万方数据
·1694· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs一第36卷第11期2005年11月
2．3脑皮质SODmaNA表达的检测：脑皮质总
RNA提取参照UltraspecTM—IRNAIsolationSys—
tem(BiotecxLaboratories，INC)说明书进行，逆
转录成eDNA，进行PCR反应。SOD引物设计为正
向lGTGAAGAGCTGTCTGGGCTGT，反向：AT—
GTTGAGCCGGGCAGTGTGC，片段大小为255
bp}GAPDH的引物设计为正向：GGGTGAT—
GCTGGTGCTGAGTATGT，反向￡AAGAATGG—
GTGTTGCTGTTGAAGTC，片段大小为700bp。
SOD的PCR反应条件：变性95℃、608，退火65
℃、60s，延伸72℃、120s，25个循环。GAPDH的
PCR反应条件：变性94℃、30s，退火56℃、30s，
延伸72℃、45s，25个循环。
2．4统计分析：所有数据均以x土5表示，采用f检
验进行统计处理。
3结果
3．1各组大鼠存活率：模型组大鼠缺血10min后
再灌注4h，大鼠死亡率为50％(4／8)；而FBG组
大鼠死亡率明显低于模型组，均为12．5％(1／8)。
3．2脑皮质中MDA和GSH水平的变化：与对照
组相比，模型组大鼠脑皮质中MDA水平明显增加；
soD活性和GsH水平明显下降。与模型组相比，
FBG组MDA水平明显降低，soD活性和GSH水
平明显增加，结果见表1。
3．3脑皮质SODmRNA的表达：与对照组比较，
模型组大鼠脑皮质sODmRNA表达明显减少
(P<0．05)；与模型组比较，FBG组大鼠脑皮质
sODmRNA表达呈剂量依赖性增加(P
GAPDH(参照物)密度值的比值表示SoDmRNA
表达水平。对照组、模型组及FBG(25、50mg／kg)
组的SODmaNA表达水平分别为0．79士0．13、
0．52士0．05、0．89土0．08、1．09土0．13。
裹1大■脑皮质中MDA和GSH水平及SOD
活性的变化“士s，月一8)
Table1 ChangesofMDAandGSHlevelsandSOD
aetlvltyIncortexofrats(_士s，n28)
组别
捐量／ MDA／ SoD／ GSH／
(Ⅲg·kg‘)如mol·“g一1)／U·mg一1)fnm。lJmg一1)
与对照组比较I6P<0．05△6P<0．01
与模型组比较：4p<0．05
6P<0．05△△P<0．01wcontrolgroup
▲P<05wmodelgroup
1一Maker2-对照3一覆疆4、5-FBG(25、50mg／kg)
l-Maker2-control3-model4．5-FBG(25．50mg／kg)
田I SOD和GAPDHRT-PCR电泳结果
Fig．1ElectrophoreslsanalysisofSODand
GAPDHRT-PCRproduct
4讨论
谷胱甘肽包括还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化
型谷胱甘肽(GSSG)。细胞内99．5％以上是以
GSH的形式存在。左颈主动脉的持续闭塞可以引起
谷胱甘肽的减少“]。表明GSH可能在缺血大脑的
自由基清除中起着重要的作用。人参皂苷单体成分
对神经细胞有明显的抗缺血效应，其作用机制可能
与其提高神经细胞抗氧化能力、减少自由基的生成，
保护细胞的结构与功能有关。人参皂苷可明显提高
蒙古沙土鼠急性脑缺血脑组织中Ach水平和
ChAT的活性o]，表明人参皂苷可能通过多靶点药
物治疗效果对急性脑缺血有保护作用。
本实验结果显示，脑缺血～再灌注大鼠脑皮层中
MDA水平显著增加，而GSH水平却显著下降。
FBG组大鼠脑皮层MDA水平明显低于模型组，
SOD活性和GSH水平明显增加；sODmRNA表达
呈荆量依赖性增加。表明FBG与人参根皂苷的药
理效果非常相近。可能是通过上调SOD基因的表
达，增加脑组织细胞soD活性，抑制由脑缺血一再灌
注损伤引起的脂质过氧化物的产生和GSH的降
低，减轻由脑缺血一再灌注引起的脑组织细胞损伤。
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人参花蕾皂苷对脑缺血-再灌注损伤大鼠的抗氧化作用及其机
制
作者： 张丽君， 吕文伟， 王志， 金永日， 孙连坤
作者单位： 张丽君(延边大学医学院附属医院,心内科,吉林,延吉,133000)， 吕文伟,王志,孙连坤(吉林
大学基础医学院,吉林,长春,130021)， 金永日(吉林大学化学院,吉林,长春,130021)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 4次
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200511039.aspx