全 文 ：· · 中草药 第 卷第 期 年 月
·
药理与临床
·
白蔡芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡
李 莹‘ , 药立波 , , 王 立峰‘ , 韩 炯 ‘ , 韩月恒‘ , 刘新平‘ , 林树新 , 俞 强
第四军医大学 生物化学与分子生物学教研室 , 陕西 西安 第四军医大学 病理生理学教研室 ,
陕西 西安 中国科学院上海药物研究所 , 上海
摘 要 目的 研究 白黎芦醇诱导 胃癌细胞脱落凋亡的作用 。 方法 采用细胞形态学观察 、 一 和 细胞染
色和流式细胞仪检测 , 观察白黎芦醇 、 、 对脱落培养 胃癌细胞 、 和
的生长状态 、 细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用 。 结果 倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生
长 , 白黎芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团 流式细胞仪检侧和 一 和
细胞染色表明 白黎芦醇可分别阻滞脱落培养的 、 和 细胞于 。 , 、 、
期 , 并可诱导这 株胃癌细胞发生脱落凋亡 , 其中白葬芦醇诱导 细胞脱落凋亡 比例达 肠 , 远高于其他
两株 胃癌细胞 。 结论 白黎芦醇可诱导 胃癌细胞发生脱落凋亡 。
关键词 白墓芦醇 脱落凋亡 胃癌细胞
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
‘ , 一 , 一 ‘ , ‘ , 一 ‘ ,
一 ’ , 一 , , ‘
,
, ’ , , , , 二
, 一 ,
, , ,
, ,
一 八 ,
, 。 , , ,
, 盯 , 。
正常来源的上皮细胞或内皮细胞如果失去基质
的 支 持 , 会 发 生 凋 亡 , 这 一 现 象 称 为 脱 落 凋 亡
户 」。 脱落凋亡的意义在于防止脱落的细胞
种植于其他不适当的地方继续生长 。 然而很多恶性
肿瘤细胞从瘤体上脱落后并不发生凋亡 , 而是迁徙
到其他部位再次生长 , 这种存在于肿瘤细胞 的抗脱
落凋亡现象是肿瘤发生转移 的主要原因之一〔, 一 〕。
胃癌的发病率和恶性程度 比较高 , 是易于转移的恶
性肿瘤 。 本实验在前期实验中所获得的具有抗脱落
凋亡特性 的胃癌细胞株 的基础上 , 选择近年非常
有发展前景的天然抗肿瘤药物白黎芦醇 , 观察其阻
止肿瘤转移的活性 , 即诱导 胃癌细胞脱落凋亡的作
用 , 以期为临床治疗肿瘤和肿瘤转移提供理论依据 。
材料
普 通 实 验 材 料 人 胃癌 细 胞 株 和
购 自中国科学 院上海细胞库 , 由
收稿 日期 一 一
基金项 目 国家 自然科学基金 , 军队“ 十五 ”科研基金重点课题
作者简介 李 莹 一 , 女 , 安徽六安人 , 博士 , 讲师 , 主要从事肿瘤细胞信号转导及抗肿瘤药物的筛选 。
一
通讯作者 一
中草药 第 卷第 期 年 月 · ·
西安西京医院消化 内科全军重点实验室惠赠 。
一 培养基 , 公 司 新生牛血清 , 杭州 四
季青生物工程公司 、 一 , 公
司 琼脂粉 北京百灵克公司 分装
流式细胞仪 , 一 公司
。
药物 白黎芦醉 由西安市天行健生物制品有限
公司提供 , 由虎杖中提取 , 纯度 , 用 配
成 , 分装 , 一 ℃ 储存 。
方法
细胞培养 细胞采用含 小牛血清的
一 培养基 , 置 于 ℃ 含 的细胞培
养箱中培养 。 胰蛋 白酶和 消
化 、传代细胞 。
细胞脱落培养模型 的建立 参照文献方法困 ,
将 溶于无水 乙醇的 一 辅于
直径 为 的 培养皿 中 , 室温干燥 , 重复
上述步骤一次 。 使用前用 洗 遍 , 紫外线消毒 ,
将 细 胞接 种 于 一 包 被 的 培 养皿
中 。 由于 一 为一种阴离子聚合物 , 铺在平
皿底部 , 细胞无法贴壁 , 只能在培养皿 中悬浮生长 ,
借此来模拟细胞的脱落培养状态 。
形态学观察细胞生长状态 调整单细胞至
, 接种 于上述制备好的脱落培养皿 内 , 实验
组加人 白黎芦 醇 、 、 , 对照组
加人等体积 , 孵育 后 , 倒置显微镜下连
续时间点观察细胞的形态学改变 。
流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 调整单细胞
至 护 , 接种于 一 包被 的培养皿
中 , 同时加人 白黎芦醇与细胞共 同孵
育 , 对照组加人同体积 。 培养 后收集细
胞 , 离心 , 吸弃上清液 , 洗
次 , 沉淀细胞后用含小牛血清的 重悬 , 加人无
水 乙醇 , 使含小牛血清 , 含 乙醇 , 总体积为
, 于 管中置 一 ℃ 固定保存 。 检
测 时 , 用 洗 细胞 次 , 吸弃上 清液 , 加人
, ℃ 水浴消化 , 再加人
置 暗处染 色 后上机检测 。 用
软件获取单个细胞 个 , 用
软件分析细胞周期及凋亡峰 。 实验重复 次 , 结
果以 王士 表示 , 用 统计软件进行两组样
本均数 检验 。
一 和 染色检测细胞凋亡 调整单
细胞至 , 接种于上述制备好 的脱落培养
皿 内 , 实验组加人 白黎芦醇 , 对照组加
人同体积 , 作用 后收集细胞 , 和
一 双染细胞 一 是一种 依赖性
结合蛋 白 , 能与翻转到膜外 的 高亲和力特异性
结合 , 流式细胞仪检测分析 , 获得 个象限的值 。 第
象限代表细胞收集过程 中出现的损伤细胞
, 第 象 限代 表 晚 期 凋 亡 细 胞 和 坏 死 细 胞
, 第 象限代表正常细胞 一 一 , 第
象限代表早期凋亡细胞 一 。 实验重复 次 ,
统计各组凋亡 、坏死细胞 早期凋亡细胞所 占比例 ,
结果 以 王士 表示 , 用 统计软件进行组间
检验 。
结果
对脱落培养胃癌细胞形态学的影响 胃癌细胞
、 和 脱落培养时 , 聚集成
比较大 的细胞 团 , 正 常生长 , 具有抗脱落凋亡 的特
性 。 这种聚集现象是其保持存活的方式之一 。 。
白黎芦醇作用 于细胞 , 细胞聚集成 团
的现象受 到 明显抑制 , 白黎芦醇作用
时 , 细胞完全呈现单个散在 的状态 , 药物浓度
越高 , 作用时间越长 , 抑制现象越明显 。
对脱落培养 胃癌细胞周期的影 响及诱导脱落
凋亡 的作用 将 白黎芦醇分别作用于
脱落培养的 、 和 细胞
。 流式细胞仪 分析细胞周期发现 , 药物对
脱落培养的不同胃癌细胞系的细胞周期的影响是不
一致的 , 分别使 、 和 细胞
阻滞于 。 、 、 期 。 同时 还检测到细
胞 出现 了不 同程度 的凋 亡峰 , 其 中 白葬芦醇诱导
细胞脱落凋亡 比例达 士 , 高
于其他两株 胃癌细胞 , 表示 细胞 比其他两
种细胞对药物更加敏感 , 结果见表 。
将
·
白黎芦 醇作用 于脱 落 培 养 的
表 白蔡芦醉对脱落培养的胃癌细胞周期及
脱落凋亡的影响 士 ,
士 , 碑
细胞周期
。 ,
凋亡率
防
日
对照
白黎芦醇
对照
白蒙芦醇
对照
白蔡芦醇
士 士 士 士
士 士 士 土 讨
士 士 士
,
士
士 士 士 士 每
士
,
士 士 士
士 士 士 士 赞 份
与对照组 比较 ‘ 尸 。 , · 。
件 , 苍
· · 中草药 第 卷第 期 年 月
、 和 细 胞 后 , 用
一 和 染 色 , 分析凋亡细胞和死亡
细胞 , 结果表 明 , 与对照组相 比 , 白黎芦醇组 出现 了
较多凋亡和死亡的细胞 , 见表 。
表 白落芦醉对胃瘤细胞的诱导脱落
凋亡作用 士 ,
士 , 一
细胞 组别 凋亡坏死细胞 比例
对照 士
白黎芦醇
,
士
·
”
对照 士
白蔡芦醇 土
· ’ ‘
对照 士
白蔡芦醉
·
士
·
”
与对照组 比较 “
份 书
讨论
白黎芦醇 , 化学名 为茂三 酚 , 分子式 ,
相对分子质量 , 是一种天然 的植物抗毒素 。
目前在桑甚 、 花生 、 葡萄等 种植物 中发现有 白黎
芦醇川 。 近年研究发现 白黎芦醇对乳腺癌
、
前列腺
癌 、 皮肤癌等多种肿瘤细胞 的生长均具有显著的抑
制作用 〔卜‘“ 〕, 是非常有前景的天然抗肿瘤药物 。 虽
然有多种 因素可 以促进肿瘤细胞发生脱落凋亡 , 从
而抑制肿瘤 的转移 , 但迄今少有关于 中药在脱落凋
亡方面的研究 。 因此 , 本实验在前期实验所获得的抗
脱落凋亡 胃癌细胞株 的基础上圈 , 观察 白葬芦醇诱
导 胃癌细胞脱落凋亡的作用 , 为寻找有效 的抗肿瘤
药物 , 尤其是抑制肿瘤转移的药物提供理论依据 。
本实验所选择 的 胃癌细胞 、
和 均具有抗脱落凋亡 的特性 , 脱落培养 时
细胞聚集成团川 。 肿瘤细胞这种相互聚集成团的表
现是其逃离脱落凋亡的的 自救反应 。 白黎芦醇作用
于脱落培养的 胃癌细胞后 , 细胞聚集成 团的现象受
到抑制 , 细胞转变为单个散在的状态 。 这一现象的发
生可能是 由于 白黎芦醇影响了与细胞勃附相关的信
号分子的改变 , 导致细胞表面薪附分子表达水平下
降的结果 , 因而这一现象可能是 白黎芦醇诱导 胃癌
细胞脱落凋亡的机制之一 。 本实验还观察到白黎芦
醇使 株 胃癌细胞阻滞于不同的细胞周期 , 此结果
一方面说明白黎芦醇可能通过影响细胞周期蛋 白 ,
从而抑制细胞周期 , 进一步抑制细胞的生长 , 另一方
面也说明白黎芦醇对不同细胞的细胞周期的影响方
式是不一致的 , 因此其对不 同细胞周期蛋 白的调控
也是不一致 的 。 流式细胞仪检测 、 一 和
染色实验都证明 , 白黎芦醇可诱导这 株 胃癌细胞
发生不 同程度 的脱落凋亡 , 其 中 细胞对药
物诱导凋亡的敏感性强于其他两种 胃癌细胞 。 本实
验结果表 明 , 白黎芦醇可诱导 胃癌细胞发生脱落凋
亡 , 并且不 同的细胞对于药物 的反应性和敏感性是
不一致的 , 其确切的作用机制还有待于进一步研究 。
〕 “ 一
一 ” 〔〕 ’ , ,
〔 , 一
〕 , ,
一
〕 , 〔〕
〔万, , , 一
·
〔 〕 , , ,
一 〔〕
·
月 中草 药 ,
, 一
〕 , , , 以
。 〕
以 材七 第 四军 医 大学学报 , ,
一
」 , , 一
, 一 , 一
一
〕 , ,
一
〔 」 , ,
」
· ‘ , , 一
〔 〕 , , ,
〔〕 八 ￡刀 , ,
一
〕 , , ,
〕了 , , 一
〕 ,
〕 山 , ,
一
《中国药学文摘 》、 中国药学文摘数据库 网络版 、 光盘 年 征订启事
中国药学文献数据网络系统即《中国药学文摘 》刊物 、数据库网络版 、 数据库光盘是国家科技部重点扶植 、 国家食品药品监督管理局主管的
我国药学文献大型检索和查询系统 。 该系统于 年创建 , 主要收载国内外公开发行的 余种医药学及相关学科期刊的药学文献 , 以文摘 、
简介 、题录等形式进行报道 。
《中国药学文摘 》为月刊 , 内容同中国药学文摘数据库 , 开本 , 每期 页左右 , 每期约 万字 , 全年 元 。订阅者可直接与国家食品药
品监督管理局信息中心《中国药学文摘 》编辑部联系 。 开户名称 国家食品药品监督管理局信息中心 开户行 建设银行北京展览路支行 , 账号
发行部 北 京市西城 区北礼士路 甲 号 邮编 编辑部 北京市海淀 区文慧园南路 甲 号 邮编
电话 、 , 一 传真 一 , 联系人 郭媛媛 刘琪 。