全 文 ：A-对照 ( 12 h )　 B～ D-青蒿酯钠 30, 60, 90μg /m L ( 12 h)　 E-对照 ( 24 h )　 F～ H-青蒿酯钠 30, 60, 90μg /m L ( 24 h)
图 2　青蒿酯钠处理后 BEL-7402细胞的流式细胞仪分析
相关调节基因中 Bax、 Bak、 Bal、 Bal-Xs基因等 ;抑
制凋亡发生的有:突变型 p53、 Ced-9相关调节基因
中 Bcl-2、 Bcl-x1、 Mcl-1和 pRB等。目前认为细胞凋
亡可以不通过 p53依赖性途径 ,而通过 p53非依赖
性途径 [5～ 8 ]。 分化诱导细胞因子如白细胞介素 -6
( IL-6)、白血病抑制因子 ( L IF) ,生长抑制细胞因子
如转化生长因子 ( TGF-B) , DN A损伤剂 MMS
( M ethylmethane Sulfate) 诱导 p53-非依赖性途径
的凋亡 ,并且研究发现 MyD116 ( myeloid di fferen-
tiation prima ry response gene )、 MyD118家族的
MyD118、 Gadd45、 CR6以及 p21、 Bax和 bcl-2等基
因参与调控此种类型的凋亡途径 [ 9]。本实验 West-
ern blot结果显示青蒿酯钠诱导的凋亡细胞中 p53、
p21表达与对照组相比无明显变化 ,而 Bcl-2蛋白
表达水平随药物作用时间的延长呈降低的趋势 ,表
明青蒿酯钠诱导肝癌细胞凋亡的分子机制是 p53
非依赖性的 ,即与 p53、 p21无关 ,而与凋亡调节基
因 bcl-2下调有关。
参考文献:
[ 1 ]　杨小平 ,潘启超 ,梁永钜 . 青蒿酯钠抗肿瘤作用 [ J] . 癌症 ,
1997, 16( 3): 186-188.
[ 2 ]　张　星 ,杨小平 ,潘启超 ,等 . 青蒿酯钠抗人肝癌 ( Bel-7402)
与诱导凋亡 [ J ]. 中草药 , 1998, 29( 7): 467-469.
[ 3]　Woerdenbag H J, Moskal T A, Pras N, et al . Cytotoxicity of
artemisinin related endoperoxides to eh rlich as cites tumor cells
[ J ]. J Nat Prod, 1993, 56( 6): 849-856.
[ 4]　 Shim ura M , Ishizaka Shimura M , Ishizaka You, et al . Char-
acterri zation of room tem pereture ind uced apoptosis in HL-60
[J ]. J FEBS Let t , 1997, 417: 379-384.
[ 5 ]　秧茂盛 ,肖建初 .青蒿琥酯对腺苷酸环化酶的影响 [ J] . 中国
药理学会通讯 , 1997, 14( 1): 17.
[ 6 ]　 Macfarlane M , Jon es N A, Dive C, et al . DN A damaging a-
gen ts induce bo th p53-dependent and p53-independen t apopto-
sis in immature thymocytes [ J] . Mol Pharmacol, 1996, 50
( 4): 900-911.
[7 ]　 Tomhlk o Tamura, Masahik o Ishinara, Marcs Lamphler, et
al . AnIRF-1-depend et pathway of DN A damageinduce-
dapoptosi s in mi togen-activated T lymphocytes [ J] . Natu re,
1995, 376( 17): 596-599.
[8 ]　 Gartenhaus R B, Wang P, Hof fmann P. Induction of the
W AF1 /CIP1 protein and lapoptosis on h uman T-cell oeud emia
virus type I-transs fo rmed-lymphocy tes af teu t reatment wi th
Ad ramycin b y using a p53-independent pathway [ J ]. Proc Natl
Acad Sci USA, 1996, P3: 265-268.
[ 9 ]　 Liehermann D A, Hoffmann B, Steinm an R A. M olecular
cont ros of grow th orres e and apoptosis I p53-dependent and
ind ependen t pathways [ J] . Oncogene, 1995, 11( 1): 199-210.
神农 33注射液减轻环孢素 A肾毒性的实验研究
崔　桅 ,张雅敏 ,潘　霖 ,何振梅 ,高仲阳
(天津市第一中心医院 ,天津　 300192)
摘　要: 目的　观察神农 33注射液减轻环孢素 A ( Cs A)肾毒性的作用效果。方法　建立大鼠急性 CsA肾毒性模
型 ,观察神农 33注射液治疗前后病理学改变和体重、血清尿素氮 ( BUN )及肌酐 ( Cr ) 的动态变化 ;用硫代巴比妥
法、放免法及 Western Blo t法检测组织内丙二醛 ( MDA)、前列腺素 I2 /血管紧张素 A2 ( PG I2 / TXA2 )及热休克蛋
白 70 ( HSP70)的含量。结果　神农 33注射液治疗后的组织病理改变较轻 ,未见明显的体重减轻及血清 BUN、 Cr
的进行性增高 ,局部组织 MDA、 PGI2 / TX A2及 HSP70的含量明显低于 CsA肾中毒组。结论　神农 33注射液能有
·821·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
收稿日期: 2001-12-31基金项目:天津市卫生局基金 (局 996KYZ-17-2)作者简介:崔桅 ,女 , 1988年毕业于天津市第二医学院药学系 ,主管药师 ,学士学位 ,从事中药注射液的研制、生产及开发等工作 ,发表论文 13篇 ,现承担天津市卫生局科研基金项目两项。 Tel: ( 022) 23366917转 20108　 E-mai l: s hanjiazhizi@ yahoo. com. cn
效减轻 CsA所致的肾毒性损伤。
关键词: 环孢素 A;肾毒性 ;器官移植
中图分类号: R285. 53　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 09 0821 03
Experimental study of SHENNONG 33 INJECTION on reducing
nephrotoxicity of cyclosporin A
CUI Wei , ZHANG Ya-min, PAN Lin, HE Zhen-mei , GAO Zhong-yang
( Tianjin First Centr al Hospital, Tianjin 300192, China)
Key words: cyclospo rin A; nephro toxicity; org an t ransplanta tion
　　神农 33注射液是我院研制并多年应用于临床
的中药制剂 ,具有活血化瘀 ,改善微循环的作用 [1 ]。
对由 LPS诱导的急性肺损伤具有保护作用 [2 ]。本实
验拟在急性环孢素 A ( Cs A) 肾毒性模型的基础上
观察神农 33注射液的保护作用。
1　材料与方法
1. 1　实验材料: CsA由诺华公司提供 ;神农 33注
射液由铁道部十八局中心医院制剂室提供 ;血清尿
素氮 ( BUN) 及肌酐 ( Cr) 试剂盒分别购自上海科
华 -东菱诊断用品有限公司及科欣生物技术诊断所 ;
丙二醛 ( MDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究
所 ; PGI2 /TX A2放免试剂盒购自解放军总医院科技
开发中心放免所。
1. 2　实验方法
1. 2. 1　动物与分组: 雄性 SD大鼠 24只 (军事医学
科学院实验动物中心提供 ) ,体重 200～ 300 g。实验
前动物于实验室条件下饲养 1周后随机分为 3组 ,
每组 8只。
1. 2. 2　方法:空白对照组 ig等体积生理盐水 ,连续
7 d。 CsA中毒组 ig CsA 30 mg /kg· d,连续 7 d。神
农 33注射液治疗组 ig CsA 30 mg /kg· d,连续 7
d,同时尾 iv 神农 33注射液 8 mL /kg· d,连续 7
d。处死大鼠后取双侧肾 ,一部分用 10% 甲醛固定 ,
另一部分置 - 70℃ 深低温冰箱保存备检。
1. 3　观察指标: 每日记录大鼠体重的变化 ;实验第
0, 3, 7日断尾取血 ,分离血清 ,测定 BUN及 Cr值 ;
病理切片 , HE染色 ,常规病检 ;参照试剂盒说明 ,用
硫代巴比妥 ( TBA) 法测定组织 MDA的含量 [3 ] ;
于实验第 7日断尾取血 ,分离血浆 ,参照放免试剂
盒说明书测定血浆 PGI2 /TX A2含量 ; Western Blot
法 [4 ]测定组织 HSP70的含量。
1. 4　统计学处理: 实验数据用 x± s表示 ,并进行 t
检验。
2　结果
2. 1　体重、 BUN及 Cr的变化:体重变化如图 1所
示 ,对照组体重逐渐降低 ,试验组则变化不明显。
BUN及 Cr的动态变化如表 1和图 2所示 ,试验组
血清 BUN、 Cr水平随服用 CsA时间的延长而逐步
升高。
A-空白组　 B-神农 33　 C-肾中毒组
图 1　大鼠体重的变化
表 1　大鼠给药后血清 BUN、Cr的含量 ( x± s )
组别 BUN (mmol /L) Cr (μmol /L)
对照 5. 84± 1. 61* 72. 92± 7. 06*
CsA中毒 13. 47± 0. 80 105. 61± 10. 52
神农 33 8. 11± 0. 89* 79. 00± 7. 87*
　　与 CsA中毒组相比: * P < 0. 05
A-空白对照组　 B-神农 33注射液　 C-CsA肾毒性模型组
图 2　大鼠血清 Cr及 BUN随时间变化图
2. 2　肾组织中 MDA含量的变化: 如图 3所示 ,
CsA中毒组肾组织中 MDA显著升高 ,而治疗组则
升高不明显。
2. 3　血浆 PGI2 / TX A2的变化: 如表 2所示 , CsA
中毒组 TX B2、 6-keto-PGF1α含量明显高于空白对照
组 ,但神农 33治疗组的 TXB2明显低于 CsA中毒
组 ,该组 6-keto-PGF1α /TXB2比值亦明显高于 CsA
中毒组。
2. 4　肾组织 HSP70的表达: 空白组肾组织局部
HSP70的表达轻微 ,而中毒组 HSP70的表达明显
·822· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
表 2　对 TXB2 , 6-keto-PGF1α含量及
6-keto-PGF1α /TXB2的比值影响
组别 TXB2
(pg /mL)
6-k eto-PGF1α
( pg /ml)
6-keto-PGF1α /
TXB2
空白对照 646. 07± 143. 95 78. 07± 11. 32 0. 12± 0. 02
CsA中毒 1 221. 25± 144. 65* 108. 40± 17. 23* 0. 09± 0. 02*
神农 33 923. 45± 68. 39* △ 111. 86± 10. 86* 0. 12± 0. 01△
　　与空白对照组比: * P < 0. 05;　与 CsA中毒组比: △ P < 0. 05
A-中毒组　 B-治疗组　 C-对照组
图 3　肾组织 MDA的含量
升高 ,神农 33注射液治
疗组 HSP70增高程度
较低。
2. 5　病理学表现: 各组
肾小球及肾小血管未见
明显异常 ,神农 33治疗
组的肾小管上皮可见空
泡样变性 ,未见坏死 ,而
CsA中毒组肾小管上
皮可见明显坏死、崩解 ,
见图 4。
3　讨论
CsA的肾毒性作用目前主要认为有两方面 [5 ] ,
首先通过 CsA的缩血管作用影响肾脏的血流动力
学 ;其次脂质过氧化损伤肾脏实质细胞 ,造成肾功能
失代偿。本实验发现短期内大剂量服用 CsA能造成
大鼠体重明显降低、伴有 BUN、 Cr的明显升高。 我
们根据以往神农 33注射液系列实验研究的结果 ,
确定实验动物的用量为 8 mL /kg· d,用药后症状
改善明显 ,病理检查亦证实损伤较轻 ,说明该注射液
确有减轻 Cs A的肾毒性作用。
PGI2为一扩血管物 , TX A2则为一强效的促进
血管收缩物质 ,两者在体内的半衰期均很短 ,而测其
相对稳定的代谢产物 6-keto-PGF1α和 TXB2即可反
映局部微血管的舒缩状态。我们发现 Cs A肾中毒时
TX A2的含量明显升高 ,比值降低 ;注射神农 33后
TX A2的合成受抑制 ,两者比值较空白组未见明显改
变。 该结果证实神农 33能抑制 TX A2的合成 ,改善
微循环 ,增加局部肾血流量 ,从而减轻了 CsA的肾
毒性。
A-CsA肾毒性模型组　 B-神农 33注射液治疗组　 C-空白对照组
图 4　实验动物组织病理学表现
MDA是脂质过氧化的中间代谢产物 , M DA的高低
能反映局部组织受过氧化损伤的严重程度 [5 ]。 实验
发现神农 33能明显抑制 Cs A中毒引起的 MDA的
升高 ,表明神农 33亦可通过抑制脂质过氧化减轻
肾脏损伤。
据文献报道 [6 ] CsA能诱发非典型的热休克反
应 ,造成热休克蛋白 27 ( HSP27)的升高 ,并认为可
能与 CsA肾毒性有关。我们观察了 Cs A中毒时肾
组织局部 HSP70的表达情况 ,结果发现中毒组肾组
织局部 HSP70的表达亦有明显升高 ,而治疗组
HSP70增高程度较少 ,说明神农 33能减轻 Cs A诱
发的非典型热休克反应所致的肾损伤 ,同时提示肾
组织局部 HSP70的表达与 Cs A肾毒性相关 ,能否
作为肾移植术后 CsA肾中毒的相对特异性检测指
标尚有待进一步研究。
综上所述 ,神农 33注射液可作为肾移植术辅
助用药 ,以减轻 CsA所致的肾毒性损伤 ,改善肾功
能 ,延长移植肾存活时间。
参考文献:
[ 1]　邓云峰 ,朱伯臣 ,赵洪波 .神农 33注射液在急性脑梗塞治疗中
的应用 [ J] . 临床荟萃 , 1997, 12: 259-260.
[2 ]　王学谦 ,胡晓翌 ,李　瑾 ,等 . 血浆血小板激活因子与急性肺损
伤相关性及“神农 33”注射液对其影响的观察 [ J ]. 中国危重病
急救医学 , 1999, 11( 2): 105-108.
[3 ]　 Ohkaw a H, Ohish i N, Yangiao K. As say for lipid p eroxida-
tion in animal ti ssue by thiobarbi tu ric acid reaction [ J] . Anal
Biochem, 1979, 95: 351-362.
[ 4]　 Sam brook J, Frit sch E F, Maniatis T. 分子克隆指南 [M ] .第
2版 .北京:科学出版社 , 1993.
[ 5 ]　 De Mat tos A M, Olyaei A J, Bennet t W M. Neph rotoxicity of
immunosuppres sive drugs: long-term consequences and ch al-
lenges for the fu ture [edi torial ] [ J ] . Am J Kid ney Dis, 2000,
35( 2): 333-346.
[6 ]　 Suleymanlar G, Suleymanlar J, Sh api ro I, et al . Possible role
of lipid peroxidat ion in cyclosporine neph rotoxici ty in rat [ J].
Transplan t Proc, 1999, 26: 2888-2889.
·823·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期