全 文 ：表 3　其他苯乙醇苷类成分的峰面积对比
Table 3　Compar ison of peak area for other
phenylethano id glycosides
名　称 Po liumo2
side
管花肉
苁蓉苷
B
肉苁蓉
苷C
肉苁蓉
苷D
异洋丁
香酚苷
盐 生 肉
苁 蓉 苷
A
酒苁蓉 0. 0 1 64914 21. 7 482. 3 62. 1 69. 2
苁蓉片 0. 0 59. 7 3. 2 25. 3 4. 2 1. 2
野 生 盐
生 肉
苁蓉
32. 5 635. 1 88. 4 528. 5 37. 1 57. 3
盐 生 肉
苁 蓉
培 养
细胞
100. 0 100. 0 100. 0 100. 0 100. 0 100. 0
　　以盐生肉苁蓉培养细胞内所含各物质的峰面积为 100% , 其他
样品为相对值
T ak ing area of substances of cu ltu red S a lsa cells as 100% , and
value of o thers is relative
倍。其中松果菊苷质量分数为 6310 m gög, 是酒苁蓉
的 814 倍, 野生盐生肉苁蓉的 111 倍; 洋丁香酚苷质
量分数为 3212 m gög, 是酒苁蓉的 2618 倍, 野生盐
生肉苁蓉的 610 倍; 而 2′2乙酰基洋丁香酚苷质量分
数仅为 015 m gög, 低于酒苁蓉和野生盐生肉苁蓉。
Po liumo side、肉苁蓉苷 C、异洋丁香酚苷和盐生肉
苁蓉A 在盐生肉苁蓉愈伤组织细胞中含量较高, 而
管花肉苁蓉苷B 在酒苁蓉中含量较高, 肉苁蓉苷D
在天然盐生肉苁蓉中含量较高。
上述结果表明, 盐生肉苁蓉培养细胞中所含主
要成分和野生盐生肉苁蓉基本相似, 只是含量不同,
从整体上看, 盐生肉苁蓉培养细胞中所含成分种类
较多, 且大部分含量较高。考虑到类叶升麻苷和松果
菊苷为肉苁蓉中主要的苯乙醇苷类活性成分, 而这
两种物质在细胞中的含量均高于天然肉苁蓉, 因此
可以利用植物细胞培养的方式, 大量生产盐生肉苁
蓉细胞, 然后从中提取苯乙醇苷类活性成分, 作为天
然肉苁蓉的替代品。
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2071
RP-HPLC 法测定五味子中原儿茶酸的含量
许育海1, 晁若冰Ξ
(四川大学华西药学院, 四川 成都　610041)
　　五味子是木兰科植物五味子 S ch isand ra ch i2
nensis (T u rcz. ) Baill. 的干燥成熟果实, 习称“北五
味子”, 是一种常用中药, 其味酸, 性甘、温, 归肺、心、
肾经, 作用收敛固涩, 益气生津, 补肾宁心[1 ]。五味子
药材主要含有挥发性成分、木脂素类及酸性成分。关
于五味子成分含量测定的文献报道较多, 主要集中
于其木质素类成分[1 ]和挥发性成分[2 ]。有文献报道,
五味子中含有的原儿茶酸, 能降低心肌耗氧量, 拮抗
肾上腺素所致的耗氧量增加, 提高心肌耐氧能力, 减
慢心律, 改善缺血中心区的乳酸和 K+ 的产生, 显著
缩小心肌梗死范围[3 ]。五味子及其制剂中原儿茶酸
的含量测定尚未见文献报道。本实验建立了 H PL C
法测定五味子药材中原儿茶酸的含量, 结果表明, 该
方法简便、准确, 可以用于五味子药材中原儿茶酸含
量的测定。
1　仪器与试药
　　日本岛津 L C—6A 高效液相色谱仪, SPD—
6AV 紫外2可见检测器, 岛津 C—R 4A 色谱数据处
·718·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
Ξ 收稿日期: 2003210205
作者简介: 许育海 (1976—) , 男, 陕西蒲城人, 现为四川大学华西药学院 2001 级硕士研究生, 研究方向为药品质量的评价与控制。3 通讯作者　T el: (028) 85501454　Fax: (028) 85501454　E2m ail: chao rb@ 163. net
理机; L una 5 Λ C 18 (2) 色谱柱 (150 mm ×4160
mm , 5 Λm ) ; 水为超纯水, 乙腈为色谱纯; 原儿茶酸
(化学纯, 成都市科龙化工试剂厂) ; 原儿茶酸鉴别用
对照品 (中国药品生物制品检定所, 80929201) ; 乙
醇、醋酸铵、冰醋酸均为分析纯, 辽宁、河北、吉林、韩
国产五味子药材购自成都五块石中药批发市场, 五
味子 020801、011001、021101 由雅安三九药业有限
公司提供, 以上药材经四川大学华西药学院生药教
研室王天志教授鉴定。
2　方法与结果
211 　色谱条件: L una C 18 (2) 色谱柱 (150 mm ×
4160 mm , 5 Λm ) ; 检测波长: 258 nm ; 流动相: 乙腈25
mmo löL 醋酸铵溶液2冰醋酸 (6∶94∶1) ; 体积流
量: 110 mL öm in; 柱温: 35 ℃, 色谱图见图 1。3 2原儿茶酸3 2p ro tocatechu ic acid
图 1　原儿茶酸对照品 (A) 和五味子
药材样品 (B) 的 HPLC 色谱图
F ig. 1　HPLC chromatogram of protocatechuic ac id (A)
and S. ch inens is sample (B)
212　原儿茶酸对照品的制备: 由于目前尚无含量测
定用原儿茶酸对照品, 用市售化学纯的原儿茶酸经
重结晶制得对照品, 测得原儿茶酸对照品的熔点为
201 ℃～ 203 ℃, 和文献值 (200 ℃～ 202 ℃) [4 ]基本
一致; 其红外光谱和鉴别用原儿茶酸对照品的红外
光谱一致; 用 H PL C 法进行有关物质检查, 未检出
其他杂质; 用酸碱滴定法测定纯度为 9918% , 符合
作为含量测定用对照品的要求。
213　对照品溶液的制备: 精密称取原儿茶酸对照品
约 5 m g, 置 50 mL 量瓶中, 用 50% 乙醇2冰醋酸
(100∶1) 溶解并稀释至刻度, 精密量取 5～ 50 mL
量瓶中, 用 50% 乙醇2冰醋酸 (100∶1) 稀释至刻
度, 即得 10 ΛgömL 原儿茶酸对照品溶液。
214　供试品溶液的制备: 将五味子药材粉碎, 过 3
号筛, 精密称取药材粉末约 015 g, 置 100 mL 具塞
锥形瓶中, 精密加入 50% 乙醇2冰醋酸 (100∶1) 25
mL , 密塞, 放置 1 h, 超声提取 20 m in, 放冷至室温,
用 0145 Λm 的微孔滤膜滤过, 取续滤液备用。
215　色谱系统适用性试验: 按上述样品制备方法和
色谱条件进行分析, 以原儿茶酸峰计算, 测得理论板
数为 7 400, 原儿茶酸和前后色谱峰达到基线分离,
原儿茶酸峰的拖尾因子为 1112, 峰形基本对称。
216　方法学考察
21611　线性范围: 精密称取原儿茶酸对照品适量,
用 50% 乙醇2冰醋酸 (100∶1) 溶解并配成原儿茶
酸对照品溶液 A (9910 ΛgömL ) 和对照品溶液 B
(9190 ΛgömL ) , 分别精密吸取对照品溶液 A 2、5、
10 ΛL 和对照品溶液 B 2、5、10 ΛL 进样, 以峰面积
(A ) 对原儿茶酸的进样量 (X ) 进行线性回归, 回归
方程为: A = 1. 507×106 X - 1. 233×103, r= 01999
9。结果表明, 原儿茶酸在 0102～ 110 Λg 与峰面积呈
良好的线性关系。
21612　精密度试验: 精密吸取对照品溶液 10 ΛL ,
重复进样 5 次, 测定原儿茶酸的峰面积, 结果
R SD = 0. 65%。
21613　稳定性试验: 分别配制原儿茶酸对照品溶液
(9190 ΛgömL ) 和供试品溶液 (生药 01020 gömL ) ,
分别在 0、1、2、3 d 进样测定, 测得对照品溶液的平
均峰面积为 11495×105, R SD 为 0143% , 供试品溶
液中原儿茶酸的平均峰面积为 91344×104, R SD 为
019% (n= 4)。结果表明, 对照品溶液和供试品溶液
在 3 d 内稳定。
21614　重现性试验: 精密称取五味子药材粉末约
015 g 6 份, 置 100 mL 具塞锥形瓶中, 按 214 项方
法处理, 精密量取续滤液 10 ΛL 进样, 按外标法计
算含量, 测得原儿茶酸质量分数为 01235 m gög,
R SD 为 315%。
21615　加样回收率试验: 精密称取已知含量的五味
子药材粉末 0125 g, 置 25 mL 量瓶中, 分别精密加
入 5109 ΛgömL 原儿茶酸溶液 10、15、20 mL , 分别
补充 50% 乙醇2冰醋酸 (100∶1) 10、5、0 mL , 放置
1 h, 超声提取 20 m in, 放冷至室温, 用 50% 乙醇2冰
醋酸 (100∶1) 溶液稀释至刻度, 用 0145 Λm 微孔
滤膜滤过, 精密量取续滤液 10 ΛL 进样, 以外标法
计算质量分数, 并计算加样回收率。平均回收率为
10210% , R SD 为 213% (n= 9)。
21616　耐用性试验: 分别采用 L una C18 (2) 柱和岛
·818· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
津 OD S 柱进行分析, 原儿茶酸的保留时间基本一
致, 样品分离情况良好。
217　样品的测定: 按 214 项制备供试品溶液, 分别
精密量取对照品溶液和供试品溶液各 10 ΛL , 注入
液相色谱仪, 用峰面积按外标法计算, 几批市场上购
得的五味子药材中原儿茶酸的含量结果见表 2。
表 1　五味子中原儿茶酸含量测定结果
Table 1　Protocatechuic ac id in S. ch inens is
产地 原儿茶酸ö(m g·g- 1) RSD ö%
　辽　宁21 01221 017
　辽　宁22 01238 015
　河　北 01099 018
　吉　林 01130 316
　020801 01204 113
　011001 01398 117
　021101 01303 110
　韩　国 01276 012
3　讨论
311　分别采用甲醇2水2酸、乙腈2水2酸的流动相系
统进行分析, 发现乙腈2水2酸系统的分离效果较甲
醇2水2酸好。在流动相中加入醋酸铵可使原儿茶酸
保留时间缩短, 并改善原儿茶酸和相邻组分的分离。
用二级管阵列检测器检测, 发现原儿茶酸在 224、
258、295 nm 处均有最大吸收, 其中 258 nm 处吸收
最强, 故选择 258 nm 为检测波长。
312　提取溶剂的选择: 曾采用乙醇2水、水系统进行
提取, 发现水煎法比较费时费力, 且和最终采用的乙
醇2水超声提取的测定结果相比, 结果偏低, 故未采
用水煎法。分别用 10%、30%、50% 乙醇作为提取
溶剂, 结果以 50% 乙醇为溶剂的测定结果最高, 且
10%、30% 乙醇的提取物有大量的絮状物。故采用
50% 乙醇作为提取溶剂加入 1 % 冰醋酸可以提高
提取率。
313　提取条件的优化: 对放置时间和超声提取时间
等条件进行了优化, 结果表明, 放置 1 h 和放置 3 h
测定结果无明显差别, 故选择放置 1 h。放置 1 h 后
分别超声 20 、30 m in 后测定, 结果基本一致, 可以
认为超声 20 m in 已提取完全。
314　测定结果表明, 从市场上购买及雅安三九药业
有限公司提供的 8 个五味子样品中均含有原儿茶
酸, 原儿茶酸的质量分数在 011～ 014 m gög。
315　华中五味子 S ch isand ra sp henan thera R ehd.
et W ils. 干燥果实习称“南五味子”, 经测定, 其中也
含有原儿茶酸, 采用本法测定了南五味子中原儿茶
酸的含量, 4 批南五味子药材中原儿茶酸的质量分
数为 0115～ 014 m gög。本法也可以用于南五味子中
原儿茶酸的含量测定。
316　生脉注射液中含有五味子, 本法也可以用于生
脉注射液中原儿茶酸的含量测定, 人参和麦冬的成
分不干扰原儿茶酸的测定。
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HPLC 法测定秦皮中香豆素类成分的含量
刘丽梅1, 李曼玲2, 冯伟红2, 陈　琳1, 王瑞海1, 吴　萍1Ξ
(11 中国中医研究院基础理论研究所, 北京　100700; 21 中国中医研究院中药研究所, 北京　100700)
　　秦皮为常用中药,《神农本草经》列为上品。《中
华人民共和国药典》2000 年版一部规定秦皮为木犀
科植物苦枥白蜡树 F rax inus rhy nchop hy lla H ance、
白蜡树 F. ch inensis Roxb. 、尖叶白蜡树 F. sz 2
aboana L ingelsh. 或宿柱白蜡树 F. sty losa L in2 gelsh. 的干燥枝皮或干皮。本实验对苦枥白蜡树树皮进行了研究, 从中分离到 5 种香豆素类成分, 并进行了结构鉴定, 它们是秦皮乙素 (É )、秦皮素(Ê )、6, 72二甲氧基282羟基香豆素 (Ë )、秦皮苷(Ì )、秦皮甲素 (Í ) , 化合物Ê～ Ì 为首次从该植物
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Ξ 收稿日期: 2003210211
基金项目: 国家重点科技攻关项目 (99292920122428)