全 文 ：·药材·
不同树龄银杏叶在不同季节中总黄酮和总内酯的含量变化
钱大玮 1 ,鞠建明 1 ,朱玲英 1 ,段金廒 1 ,王宇环 1 ,张绍君 2 ,郭巧生 3
( 1. 江苏省中医药研究院 ,江苏 南京　 210028; 2. 江苏银杏生化集团股份有限公司 ,江苏 邳州　 221300; 3. 南京农业大学 ,
江苏 南京　 210000)
摘　要 :目的　确定银杏叶最适宜采收季节。方法　采用 HPLC法 (二级管阵列检测器 DAD和蒸发光散射检测器
ELSD)分别测定银杏叶中总黄酮和总内酯的含量。结果　不同树龄、不同季节的银杏叶总黄酮、总内酯含量不同。
结论　银杏叶的总黄酮、总内酯以二、三年生的为高 ;总黄酮在 5月份、总内酯在 9月份含量为高。
关键词: 银杏叶 ;总黄酮 ;总内酯 ;季节 ;树龄
中图分类号: R286. 6　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 11 1025 03
Study on changing rules for total flavonoids and total terpene lactones inGinkgo biloba
leaves at different ages of tree and collecting seasons
QIAN Da-w ei
1 , JU Jian-ming
1 , ZHU Ling-ying
1 , DU AN Jin-ao
1 ,
W ANG Yu-huan
1
, ZHANG Shao-jun
2
, GUO Qiao-sheng
3
( 1. Jiang su Academy of TCM , Nanjing 210028, China; 2. Jiang su Bio chemistry of Ginkgo biloba Group Co . , L td. ,
Pizhou 221300, China; 3. Nanjing Ag riculura l Univ er sity, Nanjing 210000, China )
Abstract: Object　 To define sui table g athering season o f Ginkgo biloba L. leaves. Methods　 The con-
tent of total f lav onoids and total terpene lactones in G. biloba leav es w ere determined by HPLC-DAD and
HPLC-ELSD. Results　 The content of to tal f lav onoids and to tal terpene lactones in G. biloba were distinct
in di fferent ages of tree and collecting seasons. Conclusion　 The content of to tal f lav onoids and to tal ter-
pene lactones in G. biloba are the highest in 2-3 ages of t ree. The tota l flav onoid is the highest in May and
to tal terpene lactone is the highest in September.
Key words: Ginkgo biloba L. leaves; to tal flavonoids; total terpene lactones; season; ages of t ree
　　银杏叶为银杏科植物银杏 Ginkgo biloba L. 的
干燥叶。银杏叶提取物 ( EGB) 在治疗心脑血管疾
病、神经系统疾病等方面有显著疗效。银杏叶主要含
黄酮类 ( f lav onoids) 和萜烯内酯 ( terpene lac-
tones) 类化合物 ,银杏叶中总黄酮的含量测定方
法 [1～ 3 ]已经成熟 ,而总内酯含量测定由于银杏叶所
含成分复杂、干扰大而报道较少 ,其中文献有报道测
4种内酯较成功的方法 [4 ] ,但其样品前处理复杂 ,需
用聚酰胺及硅胶双柱处理 ,而且采用梯度洗脱法分
离样品。本实验着重优化了银杏叶样品净化方法 ,采
用单一氧化铝柱处理样品 ,并利用 HPLC-ELSD法
测定 ,获得了满意的结果。
有文献报道银杏叶中总黄酮、总内酯含量随树
龄不同 [4, 5] ,含量变化较大 ,特别是总内酯含量下降
幅度很大 ,树龄大的银杏叶几乎不能作为生产银杏
叶提取物的原料。为了充分利用银杏资源 ,对最有药
用价值树龄的邳州银杏叶中总黄酮、总内酯进行了
较全面系统的研究 ,为生产出高质量的银杏叶提供
科学依据。
1　仪器与试药
1. 1　仪器: Waters高效液相色谱仪 ( 510泵、 996
二极管阵列检测器 ) ; All tech ELSD 2000蒸发光散
射检测器 ; Mi llipo re-Q超纯水制备仪。
1. 2　试药: 槲皮素、山柰酚、异鼠李素、银杏内酯 A
( GA)、银杏内酯 B ( GB)、银杏内酯 C ( GC)、白果
内酯 ( BB)均由中国药品生物制品检定所提供。 甲
醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。
1. 3　银杏叶样品: 2000年 5月至 2000年 10月采
自邳州银杏叶种植基地 (国家中医药管理局药源基
地之一 )的银杏叶 ,该基地引进法国规范化种植技
·1025·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 11期
收稿日期: 2002-03-30基金项目:国家科委“中药现代化研究与产业化开发”资助项目 ( 99-929-01-01AE99206)作者简介:钱大玮 ( 1962-) ,男 ,副教授 ,主要从事中药分析研究工作。
术 ,具有规范的采叶条件 ,同时所采集的银杏叶采用
统一的干燥方法 ,这样避免了背景干扰。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件
2. 1. 1　测定总黄酮色谱条件: Waters Nova-Pak C18
色谱柱 ( 3. 9 mm× 150 mm , 4μm);流动相: 甲醇 -
0. 5% 磷酸水溶液 ( 43∶ 57) ;流速 0. 7 mL /min;检
测波长 360 nm;柱温:室温;进样量: 20μL,外标法计
算含量 [1 ]。 在所拟色谱条件下 ,银杏叶中 3种黄酮苷
元得到了较好的分离 , HPLC色谱图见图 1。
2. 1. 2　测定总内酯色谱条件: Waters Nova-Pak
C18色谱柱 ( 3. 9 mm× 150 mm, 4μm);流动相:
甲醇-四氢呋喃 -水 ( 20∶ 12∶ 75) ;流速 0. 6 mL /
min; ELSD漂移管温度 100℃ ;载气流量 2. 5 L /
min;进样量 20μL,以外标两点对数方程计算样品
的含量 [6 ]。在所拟色谱条件下 ,银杏叶中 4种内酯得
到了较好的分离 , HPLC色谱图见图 1。
A-黄酮　　　　　　　　　　 B-内酯
　　　 1-槲皮素
　　　 2-山柰酚
　　　 3-异鼠李素
　
1-银杏内酯 C　 2-白果内
酯 BB　 3-银杏内酯 A　
4-银杏内酯 B
图 1　样品 HPLC色谱图
2. 2　供试品溶液制备
2. 2. 1　银杏总黄酮供试品溶液制备:取已测过水分
( 2000年版《中华人民共和国药典》一部附录 IX H
第一法 )的银杏叶粉末 0. 8 g ,精密称定 ,置 100 mL
圆底烧瓶中 ,精密加入 25 m L甲醇-25% 盐酸溶液
( 4∶ 1)混合液 ,闭塞 ,称重 ,沸水浴回流 1 h,取出放
冷 ,称重 ,以甲醇补足减失重量 ,摇匀 ,过滤 ,取续滤
液用 0. 45μm的滤膜过滤 ,作为供试品溶液。
2. 2. 2　银杏总内酯供试品溶液的制备:取已测过水
分的银杏叶粉末 0. 9 g ,精密称定 ,置索氏提取器
中 ,加 100 mL石油醚 ( 30℃～ 60℃ )于 70℃ 水
浴中回流 1 h ,取出 ,挥干石油醚后换用 80 mL甲醇
回流 3 h ,取出 ,减压回收甲醇至约 2 mL,以甲醇 5
mL转移残渣至酸性氧化铝柱上 ( 100～ 200目 , 5 g
直径 10 mm) ,用 20 mL甲醇洗脱 ,洗脱液蒸干 ,残
渣用流动相溶解至 10 mL量瓶中 ,并稀释至刻度 ,
摇匀 ,用 0. 45μm的滤膜过滤 ,作供试品溶液。
2. 3　对照品溶液的制备
2. 3. 1　黄酮对照品溶液的制备: 精密称取槲皮素、
山柰酚、异鼠李素对照品适量加甲醇制成每毫升分
别含 0. 315 6, 0. 249 2, 0. 140 0mg的溶液作为储备
液 ,临用前分别精密吸取 1, 1, 0. 4 m L置 5 mL量
瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 3. 2　内酯对照品溶液的制备: 精密称取 GA,
GB, GC和 BB对照品适量 ,置 10 mL量瓶中 ,加少
量甲醇溶解后以流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,即得浓度
分别为 0. 465, 0. 292, 0. 316, 0. 598 mg /mL的浓对
照品溶液 ,然后吸取浓溶液适量稀释 4倍作为稀对
照品溶液。
2. 4　线性关系考察
2. 4. 1　黄酮标准曲线的制备:分别配制不同浓度的
槲皮素、山柰酚、异鼠李素混合对照品溶液 ,各进样
20μL,按色谱条件测定 ,计算各对照品的回归方程
为槲皮素: Y= 123 438 756X+ 53 012, r= 0. 999 5,
线性范围 0. 231～ 1. 580μg;山柰酚: Y= 120 892
697 X+ 103 102, r= 0. 999 8,线性范围 0. 149～
0. 947μg;异鼠李素: Y= 132 079 414 X - 1 412, r=
0. 999 6,线性范围 0. 028～ 0. 224μg。
2. 4. 2　内酯标准曲线的制备: 配制一定浓度的
BB、 GA、 GB、 GC混合对照品溶液 ,分别进样 2, 4,
8, 12, 16, 20μL,按色谱条件测定 ,以峰面积的自然
对数为纵坐标 ,进样量的自然对数为横坐标 ,线性回
归 ,计算各对照品的回归方程为 BB: Y= 1. 53X+
11. 57, r= 0. 998 7,线性范围 1. 63～ 16. 32μg; GA:
Y= 1. 64X+ 11. 32, r= 0. 999 7,线性范围 0. 644～
6. 44μg; GB: Y= 1. 65X+ 11. 09, r= 0. 999 7,线性
范围 0. 36～ 3. 60μg; GC: Y= 1. 65X+ 11. 35, r=
0. 999 7,线性范围 0. 37～ 3. 74μg。
2. 5　精密度试验:结果 RSD为:槲皮素 0. 22% ;山
柰酚 0. 60% ;异鼠李素 0. 80% ; BB 1. 08% ; GA
0. 40% ; GB 1. 34% ; GC 1. 13% (n= 6)。
2. 6　稳定性试验: 对同一供试品溶液每隔 3 h进样
1次 ,依法测定 ,计算各峰峰面积积分值的 RSD。结
·1026· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 11期
果表明 , 3个黄酮苷元在 18 h内均稳定 , 4个内酯成
分在 12 h内均稳定。
2. 7　重复性试验: 按样品测定方法 ,对同一样品进
行 6次平行测定 ,测得各组分的 RSD 为槲皮素
1. 50% ; 山 柰酚 1. 57% ; 异鼠李 素 1. 13% ; BB
1. 82% ; GA 1. 95% ; GB 1. 99% ; GC 1. 51% ,结果
表明本方法重复性好。
2. 8　回收率试验
2. 8. 1　 3种黄酮苷元回收率试验: 采用加样回收
法 ,取已知含量的银杏叶粉末 0. 4 g ,精密称定 ,定
量加入适量 3种黄酮苷元对照品 (槲皮素 1. 815
mg、山柰酚 1. 545 mg、异鼠李素 0. 174 mg ) ,按上
述方法操作及测定 ,计算回收率 ,见表 1。结果表明
本法回收率良好。
2. 8. 2　 4种内酯回收率试验: 采用加样回收法 ,取
已知含量的银杏叶粉末 0. 45 g ,精密称定 ,定量加
入 适量内酯对照品 ( BB 1. 362, GA 0. 706, GB
0. 333, GC 0. 351 mg ) ,按上述方法操作及测定 ,计
算回收率 ,见表 1。 结果表明本法回收率良好。
表 1　回收率测定结果 ( n= 6) (% )
　　　　　组　分 回收率　 RSD　
3种黄酮苷元　槲皮素 　　 98. 6 　　 1. 02
山柰酚 97. 8 1. 70
异鼠李素 98. 7 1. 59
4种内酯 白果内酯 107. 5 2. 8
银杏内酯 A 107. 5 2. 3
银杏内酯 B 102. 6 2. 7
银杏内酯 C 107. 8 2. 1
2. 9　样品测定:将银杏叶样品分别按上述方法制
备 ,依法测定其总黄酮和总内酯含量。黄酮分别计算
3种黄酮苷元含量 ,按下式换算成总黄酮苷的含量:
总黄酮苷的含量= (槲皮素含量+ 山柰酚含量+ 异
鼠李素含量 )× 2. 51;总内酯含量为 4种内酯含量
之和。 样品中总黄酮、总内酯含量测定结果见
表 2, 3。
3　讨论
3. 1　不同树龄银杏叶 ,总黄酮随树龄的增长 ,呈下
表 2　不同树龄银杏叶总黄酮含量测定结果 ( n= 3) (mg /g)
树　龄
(年 )
5月
12日
5月
31日
6月
15日
7月
1日
7月
15日
8月
1日
8月
15日
9月
2日
9月
16日
10月
3日
2 21. 11 19. 70 16. 950 15. 562 14. 05 10. 61 10. 68 10. 20 8. 97 7. 48
3 19. 76 17. 77 12. 70 11. 26 9. 42 9. 16 8. 47 8. 64 7. 56 7. 88
4 12. 62 12. 96 11. 25 9. 98 10. 88 7. 71 7. 66 8. 55 7. 04 9. 03
5 10. 25 9. 71 8. 53 8. 98 6. 73 7. 07 5. 63 6. 14 6. 60 6. 38
6 9. 43 9. 69 8. 00 7. 32 8. 63 7. 95 6. 89 7. 22 7. 27 7. 87
表 3　不同树龄银杏叶总内酯含量测定结果 ( n= 3) (mg /g)
树　龄
(年 )
5月
12日
5月
31日
6月
15日
7月
1日
7月
15日
8月
1日
8月
15日
9月
2日
9月
16日
10月
3日
2 7. 03 7. 48 9. 85 9. 19 8. 99 9. 32 8. 67 10. 11 10. 74 12. 37
3 8. 24 7. 32 9. 71 8. 96 10. 33 9. 24 11. 01 12. 04 10. 01 11. 22
4 5. 90 7. 90 7. 63 7. 22 7. 19 7. 68 8. 53 7. 83 7. 61 6. 96
5 4. 67 5. 98 6. 00 6. 37 5. 92 7. 63 8. 23 6. 42 6. 43 6. 32
6 6. 32 8. 43 7. 26 8. 69 7. 63 6. 72 5. 73 7. 43 4. 63 5. 33
降趋势 ,其中 2年生的为最高 ; 1年中 , 不同树龄银
杏叶总黄酮以 5月份含量为最高 ,随后逐月下降。
3. 2　不同树龄银杏叶 ,总内酯含量不同 ,以 3年生
最高 ,以后随树龄增长呈下降趋势 ; 1年中 ,总内酯
含量也有较明显的变化 ,有一个最高值 , 2, 3年生在
9月下旬、 10月初含量为最高 ,随树龄增长 ,含量的
最高值在向前变化。
3. 3　并非所有银杏叶都可以采收作为药材 ,通过本
实验可以看出 ,银杏叶若以黄酮为主要成分 ,采收的
最适宜季节为 5月 ,若以内酯为主要成分 ,采收的
最适宜季节为 9月 ,采收树龄以 2, 3年生为最好。
参考文献:
[1 ]　中国药典 [ S] . 2000年版 .一部 .
[ 2 ]　苑可武 ,孟宪惠 ,徐文豪 .银杏叶中总黄酮的季节性变化 [ J ].
中草药 , 1997, 28( 4): 211.
[3 ]　管玉民 ,王　健 . 气候、季节、树龄对银杏叶中总黄酮含量的影
响 [ J] . 中成药 , 2000, 22( 5): 368.
[4 ]　颜玉贞 ,谢培山 . HPLC-ELSD法测定银杏叶的 4种萜内酯含
量 [ J] . 药物分析杂志 , 2001, 21( 3): 173.
[ 5]　王先荣 ,周正华 ,杜安全 .不同生长季节及生长年限银杏叶总
萜内酯含量的相关性研究 [ J] . 中国药科大学学报 , 2000, 31
( 2): 88.
[ 6]　田南卉 ,王　颉 ,厉进忠 .高效液相色谱法蒸发光散射检测器
测定银杏叶提取物中内酯的含量 [ J ]. 药物分析杂志 , 1997, 17
( 4): 282.
欢迎订阅《中草药》杂志 2002年增刊
为了加快中药现代化的进程 ,交流中药指纹图谱研究的经验 ,讨论入世后我国中药产业面临的挑战和对策 ,本刊在 2002
年 10月底出版以“中药现代化”和“中药指纹图谱”为主要内容的增刊。欢迎广大读者直接向《中草药》杂志编辑部订阅。定价:
60. 00元 ,另加 5. 00元邮费 ,款到寄刊。
本刊另有 1996— 2001年增刊 ,欢迎订阅。
编辑部地址: 天津市南开区鞍山西道 308号
　　邮编: 300193　电话 : ( 022) 27474913　 23006821　传真: ( 022) 23006821　 E-mail: zcyzzbjb@ tjipr. com
·1027·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 11期